一种超甜玉米转基因再生苗的生根方法技术

本发明专利技术公开了一种超甜玉米转基因再生苗的生根方法，该方法生根率高，适用性广。本方法采用两步生根法，先在含ＮＡＡ的根诱导培养基中诱导根源基的形成；随后转接到含ＮＡＡ＋ＩＢＡ的生根培养基中继续进行再生根的生长培养。本发明专利技术与现有方法相比，生根时间短、速度快，生根培养２５天即可移栽；生根率高，根系发达；移栽成活率高；适合多种基因型，是对超甜玉米转基因苗生根培养技术的重要改革。本方法对其他植物的生根也有参考价值。

Rooting method of super sweet corn transgene regeneration seedling

The invention discloses a rooting method of a super sweet corn transgene regeneration seedling, which has high rooting rate and wide applicability. The method adopts two step rooting method, first induced in NAA containing root culture medium induced the formation of root bases; then transferred to rooting medium containing NAA + IBA to continue the growth culture of regenerated roots. Compared with the prior method, the rooting time is short, fast, training 25 days high rooting rate, rooting and transplanting; root system; high transplanting survival rate; suitable for a variety of genotypes, is an important reform of the super sweet corn transgenic seedling rooting culture technology. This method is also of reference value for rooting of other plants.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于玉米组织培养及转基因研究
，具体涉及。
技术介绍
组织培养技术是指在无菌条件下利用人工培养基对原生质体、悬浮细胞、植物组织等进行培养的技术。组织培养技术在农业领域的应用十分广泛，是转基因技术不可或缺的组成部分，为遗传工程提供理想的受体材料；为常规植物改良程序提供一种新的手段，更快捷、高效地创造出各种农作物和园艺植物的新品种。 超甜玉米组织培养、转基因技术中，转基因再生苗的生根技术严重制约了超甜玉米遗传工程的发展。在生根阶段，通常的做法有两种。其一是转基因再生苗在整个生根过程只在一种培养基上完成，这类方法易产生两种不良现象(1)、生根培养基中如果生长素含量偏高，则在生根培养后期，根的表面往往表现为结构松散、凸凹不平、无根毛且透亮的玻璃化现象，这种类型的根在移栽时，植株成活率极低；(2)、生根培养基中如果细胞分裂素含量偏高，则不利于根源基的形成，造成生根缓慢甚至不生根。其二是转基因再生苗先在一种生根培养基中培养，一段时间后不生根的幼苗转接入第二种生根培养基，其中不生根的植株再转接入第三种生根培养基，甚至经历第四种、第五种生根培养基等，此类方法不足之处在于(1)、转基因再生苗整个生根过程复杂，时间跨度大，实验周期长；(2)、生根转基因再生苗历经多次在含不同种类激素(或浓度)的生根培养基上生长，易产生激素中毒现象，最终导致转基因再生苗死亡；(3)、在生育期内生根阶段占用时间长，影响后期的田间生长。 采用第一种生根法虽然也建立了多种基因型玉米的离体再生体系，但是生根情况普遍不理想，不能满足实际生产和研究的需要；加之适合一种基因型玉米的生根方法对另一种基因型却效果不理想，缺乏一种高效、广适性的玉米生根方法。采用第二种生根方法虽然生根率较高，但是，由于生根培养过程繁琐、占用时间长，会明显影响后期的田间生长。因此，改良目前的生根培养方法是超甜玉米基因工程育种的需要，有助于转基因技术在超甜玉米育种实践中的应用。
技术实现思路
为克服现有超甜玉米转基因再生苗生根方法中存在的生根时间长、生根率不理想、适应性狭窄等问题，本专利技术的目的在于提供一种适应性广、生根速度快且效果好的超甜玉米转基因再生苗的高效生根方法。 本专利技术的目的通过下述技术方案来实现 —种超甜玉米转基因再生苗的高效生根方法，先在含NAA (萘乙酸)的根诱导培养基中诱导根源基的形成；随后转接到含NAA(萘乙酸)+IBA(吲哚丁酸)的生根培养基中继续进行再生根的生长培养。 作为优选，所述根诱导培养基中含NAAO. 04 0. 15mg/L ;更优选，所述根诱导培养3基中含NAAO. 05mg/L。 作为优选，所述生根培养基中含NAA 0. 04 0. 15mg/L， IBA 1. 5 5. Omg/L ;更优选，含NAA 0. 05mg/L和IBA 2. Omg/L。 作为优选，所述根诱导培养基成分为1/2MS大量元素+1/2MS微量元素+1/2铁盐+肌醇125mg/L+VB！ 1. 75mg/L+VB6 0. 5mg/L+烟酸0. 25mg/L+甘氨酸2. Omg/L+NAA 0. 05mg/L+蔗糖20g/L+植物凝胶2. Og/L+MES 0. 5g/L。 生根培养基包括但不限于常规已知的用于组织培养的培养基，如Murashige和Skoog培养基，White培养基，Gamborg B_5培养基，Nitsch培养基，Heller培养基，ER培养基，N6培养基等，其可以是液体培养基或含有凝胶剂的固体培养基，所述凝胶剂为0. 5% 1.5%的琼脂、0. 1% 0. 3%的植物凝胶，或1% 8%的卡拉胶。 作为优选，生根培养基的主要成分除NAA和IBA夕卜，还包括1/2MS大量元素+1/2MS微量元素+1/2铁盐+1/2RM维生素+植物凝胶。 本专利技术所述再生苗优选株型正常，主茎明显的再生植株，形成筛管、导管等传导组织。 培养时间方面，所述在根诱导培养基中培养的时间为5 10天， 一般又优选8天。 与现有的生根方法相比，本专利技术具有如下优点 本专利技术采用两步法诱导和促进生根培养，首先将再生幼苗培养在含适量生长素的培养基中进行根源基诱导，根源基形成并长出根点后再转接入含NAA和IBA的根生长培养基中，进行根的伸长培养。本专利技术能够使根在25天内生长到可以移栽的程度，与上述第一种方法相比提前5 10天；生根率达到96. 8%，生根率比对照1高出14. 5% ;与上述第二种方法相比，生根阶段所用时间比对照縮短23天，节省近一半时间。此外，本专利技术适用于多种基因型甜玉米，对其他植物的生根也有参考价值。 本专利技术中，术语生根率指有根点长出的再生植株占进行生根培养的再生植株的百分比。附图说明 图1为本专利技术中转基因再生苗在含NAA的根源基诱导培养基上的长势图。 其中la、为再生苗在含NAA0. 05mg/L的培养基生长10天时的根长势；lb、为再生苗在含NAAO. 15mg/L的培养基生长4天时的根长势；lc、为再生苗在含NAAO. lmg/L的培养基生长6天时的根长势；ld、为再生苗在含NAAO. 04mg/L的培养基生长10天时的根长势。 图2为本专利技术中转基因再生苗在含NAA+IBA的生根培养基上的根长势图。其中2a、为再生苗在含NAAO. 05mg/L+IBA2. Omg/L的培养基上培养20天的根长势；2b、为再生苗在含NAA 0. 15mg/L+IBA 5. Omg/L的生根培养基上培养24天的根长势；2c、为再生苗在含NAA 0.05mg/L+IBA 2. Omg/L的生根培养基上培养21天的根长势；2d、为再生苗在含NAA 0.04mg/L+IBA 1. 5mg/L的生根培养基上培养22天的根长势。具体实施例方式下面结合实例及附图对本专利技术做进一步详细描述，但本专利技术的实施方式不限于此 实施例1 :以甜玉米自交系1132愈伤组织转基因再生苗进行生根培养 (1):在无菌条件下，挑选株型正常，主茎明显的再生植株，小心去除基部褐化组织。 (2):将上述准备的植株转入根源基诱导培养基，培养基成分为1/2MS大量元素 +1/2MS微量元素+1/2铁盐+肌醇125mg/L+VBi 1. 75mg/L+VB6 0. 5mg/L+烟酸0. 25mg/L+甘 氨酸2. Omg/L+NAA 0. 05mg/L+蔗糖10g/L+植物凝胶2. 3g/L (或琼脂粉7. Og/L) +PH5. 8。培 养第10天时近50%的植株见根点长出(图la)。 (3):将(2)中有根点长出的植株转入含NAA+IBA(0. 05mg/L NAA+2. Omg/L IBA)的 生根培养基(其余成分同上)进行根的伸长生长，20天后见大量根长出(图2a)，生根率 91. 3%。 此时移栽，移栽成活率达95%。 实施例2 :以甜玉米自交系1132愈伤组织转基因再生苗进行生根培养 (1):在无菌条件下，挑选株型正常，主茎明显的再生植株，小心去除基部褐化组织。 (2):将上述准备的植株转入根源基诱导培养基，培养基成分为1/2MS大量元素 +1/2MS微量元素+1/2铁盐+肌醇125mg/L+VBi 1. 75mg/L+VB60. 5mg/L+烟酸0. 25mg/L+甘 氨酸2. Omg/L+NAA本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种超甜玉米转基因再生苗的生根方法，其特征在于：先在含ＮＡＡ的根诱导培养基中诱导根源基的形成；随后转接到含ＮＡＡ＋ＩＢＡ的生根培养基中继续进行再生根的生长培养。

【技术特征摘要】
一种超甜玉米转基因再生苗的生根方法，其特征在于先在含NAA的根诱导培养基中诱导根源基的形成；随后转接到含NAA+IBA的生根培养基中继续进行再生根的生长培养。2. 根据权利要求1所述的超甜玉米转基因再生苗的生根方法，其特征在于所述根诱 导培养基中含NAAO. 04 0. 15mg/L。3. 根据权利要求2所述的超甜玉米转基因再生苗的生根方法，其特征在于所述根诱 导培养基成分为1/2MS大量元素+1/2MS微量元素+1/2铁盐+肌醇125mg/L+VBJ. 75mg/ L+VB60. 5mg/L+烟酸0. 25mg/L+甘氨酸2. Omg/L+NAA 0. 05mg/L+蔗糖10g/L+植物凝胶 2.Og/L+MES 0.5g/L。4. 根据权利要求1所述的超甜玉米转基因再生苗的生根方法，其特征在于所述生根 培养基中含NAA 0. 04 0. 15mg/L， IBA 1. 5 5. Omg/L。5. 根据权利要求4所述的超甜玉米转基因再生苗的生...

【专利技术属性】
技术研发人员：祁喜涛，胡建广，孙思思，
申请(专利权)人：广东省农业科学院作物研究所，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]