【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
专利
本公开内容涉及分子生物学和核酸化学领域。更具体地说，本公开内容涉及通过分子测定法检测病原体，诸如乙型流感病毒，并且因此也涉及医学诊断和预后领域。
技术介绍
0、专利技术背景
1、乙型流感病毒是几种能导致疾病的流感病毒之一。在人类中，流感病毒可能导致传染性急性呼吸道疾病，并且流感病毒感染可导致广泛的临床表现，从无症状感染到急性自限性流感综合征，到严重并且有时甚至致命的并发症。非常希望能够检测人类受试者(包括无症状或轻度症状受试者)中的乙型流感病毒感染，并将其与疾病的其他病毒或细菌原因区分开来。
2、流感病毒具有单链负义rna的基因组，并且属于正粘病毒科(orthomyxoviridae)家族。乙型流感病毒基因组包含八个rna区段和大约14.5千碱基。区段1、3、4和5每个区段编码一种蛋白质：pb2、pa、ha和np蛋白。所有流感病毒都在区段2上编码聚合酶亚基pb1。乙型流感病毒的区段6既编码na蛋白，并且在-1交替阅读框中编码nb基质蛋白。乙型流感病毒的区段7编码m1基质蛋白。最后，区段8表达干扰素拮抗物ns1蛋白。由于缺乏rna聚合酶的校对机制，乙型流感病毒易于频繁突变。基因组中的这些微小变化在一个叫做抗原漂移的过程中积累。
3、自20世纪70年代以来，乙型流感病毒被鉴定为两个可区分的谱系，命名为维多利亚(victoria)谱系和山形(yamagata)谱系。乙型流感病毒仅限于人类感染，并且这两种谱系都导致了每年的流行病。新的乙型流感病毒毒株和变体产生于相对频繁的抗原漂移。抗原漂移
4、仍然需要一种稳健的包容性乙型流感病毒检测测定，即使乙型流感病毒基因组经历遗传漂变，该测定仍将保持准确、特异和包容性。还迫切需要开发一种用于乙型流感病毒感染的快速、负担得起、样品-输入答案-输出的护理点(poc)诊断平台。
技术实现思路
0、概述
1、本公开内容提供了用于检测测试样品中的乙型流感病毒的组合物、方法和试剂盒。样品中乙型流感病毒的存在或不存在通过基于核酸的测定使用对乙型流感病毒毒株具有极好的灵敏度、特异性和包容性的引物和/或探针来确定。
2、本专利技术技术包括包含多核苷酸组的组合物，多核苷酸组选自由set-1至set-47组成的组。可选择地，组合物包含多核苷酸组，多核苷酸组选自由set-1至set-36组成的组或选自由set-1至set-20组成的组。在一些实施方案中，组合物还包含探针。在一些实施方案中，探针包含标记。在一些实施方案中，探针是经标记的多核苷酸。在一些实施方案中，经标记的多核苷酸包含一个或更多个锁核酸。例如，标记物可以是荧光团，其可以共价地附接至多核苷酸的末端。在一些实施方案中，探针或多核苷酸是包含荧光团、猝灭剂和多核苷酸的分子信标。在一些实施方案中，荧光团是fam，并且猝灭剂是bhq1。在替代的实施方式中，荧光团是atto 565或alexa 594，并且猝灭剂是bhq1或bhq2。
3、在一些实施方案中，组合物包含经标记的多核苷酸，经标记的多核苷酸包含选自由以下组成的组的序列：seq id no:61的核苷酸5-21、seq id no:62的核苷酸6-38、seq idno:63的核苷酸5-26、seq id no:64的核苷酸8-37、seq id no:65的核苷酸8-37、seq idno:66的核苷酸8-37、seq id no:67的核苷酸8-26、seq id no:68的核苷酸7-25、seq idno:69的核苷酸8-26、seq id no:70的核苷酸3-29、seq id no:71的核苷酸8-31、seq idno:72的核苷酸8-25、seq id no:73的核苷酸6-36、seq id no:74的核苷酸6-34、seq idno:75的核苷酸5-35、seq id no:76的核苷酸5-35和seq id no:77的核苷酸4-29。在另外的实施方式中，经标记的多核苷酸可以包含选自由seq id no:61至seq id no:77组成的组的序列。在某些实施方式中，经标记的多核苷酸的序列选自由seq id no:61至seq id no:77组成的组。
4、在一些实施方案中，多核苷酸组选自由以下组成的组：set-3至set-11、set-19、set-20、set-23至set-30和set-38至set-42，并且组合物包含经标记的多核苷酸，经标记的多核苷酸包含选自由以下组成的组的序列：seq id no:61的核苷酸5-21、seq id no:62的核苷酸6-38、seq id no:63的核苷酸5-26、seq id no:64的核苷酸8-37、seq id no:65的核苷酸8-37、seq id no:66的核苷酸8-37、seq id no:67的核苷酸8-26、seq id no:68的核苷酸7-25以及seq id no:69的核苷酸8-26。在一些实施方式中，经标记的多核苷酸包含选自由seq id no:61至seq id no:69组成的组的序列。在一些实施方式中，经标记的多核苷酸是选自由seq id no:61至seq id no:69组成的组的序列。在一种实施方式中，经标记的多核苷酸的序列是seq id no:65，并且多核苷酸组是set-11。在优选的实施方式中，经标记的多核苷酸的序列是seq id no:65，并且多核苷酸组是set-20。
5、在一些实施方案中，多核苷酸组选自由以下组成的组：set-14、set-32和set-44，并且组合物包含经标记的多核苷酸，经标记的多核苷酸包含选自由以下组成的组的序列：seq id no:70的核苷酸3-29、seq id no:71的核苷酸8-31和seq id no:72的核苷酸8-25。在一些实施方式中，经标记的多核苷酸包含选自由seq id no:70至seq id no:72组成的组的序列。在其它实施方案中，经标记的多核苷酸的序列选自由seq id no:70至seq id no:72组成的组。
6、在一些实施方案中，多核苷酸组选自由以下组成的组：set-12、set-13、set-16至set-18、set-31、set-34至set-36、set-46和set-47，并且组合物包含经标记的多核苷酸，经标记的多核苷酸包含选自由以下组成的组的序列：seq id no:73的核苷酸6-36、seq idno:74的核苷酸6-34、seq id no:75的核苷酸5-35、seq id no:76的核苷酸5-35以及seq idno:77的核苷酸4-29。在一些实施方式中，经标记的多核苷酸包含选自由seq id no:73至seq id no:77组成的组的序列。在其它实施方案中，经标记的多核苷酸的序列选自由seqid no:73至seq id no:77组成的组。
7、本专利技术的另一方面提供了一本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种组合物，所述组合物包含选自由Set-1至Set-47组成的组的多核苷酸组。
2.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物还包含探针。
3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述探针包含标记物。
4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述探针是经标记的多核苷酸。
5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含一个或更多个锁核酸。
6.根据权利要求4或5所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:61的核苷酸5-21、SEQ ID NO:62的核苷酸6-38、SEQ ID NO:63的核苷酸5-26、SEQ ID NO:64的核苷酸8-37、SEQ ID NO:65的核苷酸8-37、SEQ ID NO:66的核苷酸8-37、SEQ ID NO:67的核苷酸8-26、SEQ ID NO:68的核苷酸7-25、SEQ ID NO:69的核苷酸8-26、SEQ ID NO:70的核苷酸3-29、SEQ ID NO:71的核苷酸8-31、SEQ ID NO:72的核苷酸8-
7.根据权利要求4所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含选自由SEQ ID NO:61至SEQ ID NO:77组成的组的序列。
8.根据权利要求4-6中任一项所述的组合物，其中所述标记物是荧光团。
9.根据权利要求8所述的组合物，其中所述荧光团共价地附接至所述多核苷酸的末端。
10.根据权利要求1所述的组合物，还包含经标记的多核苷酸，所述经标记的多核苷酸包含选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:61的核苷酸5-21、SEQ ID NO:62的核苷酸6-38、SEQ ID NO:63的核苷酸5-26、SEQ ID NO:64的核苷酸8-37、SEQ ID NO:65的核苷酸8-37、SEQ ID NO:66的核苷酸8-37、SEQ ID NO:67的核苷酸8-26、SEQ ID NO:68的核苷酸7-25和SEQ ID NO:69的核苷酸8-26，并且其中所述多核苷酸组选自由以下组成的组：Set-3至Set-11、Set-19、Set-20、Set-23至Set-30和Set-38至Set-42。
11.根据权利要求10所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含选自由SEQ IDNO:61至SEQ ID NO:69组成的组的序列。
12.根据权利要求11所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸的序列是SEQ ID NO:65，并且所述多核苷酸组是Set-11。
13.根据权利要求11所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸的序列是SEQ ID NO:65，并且所述多核苷酸组是Set-20。
14.根据权利要求1所述的组合物，还包含经标记的多核苷酸，所述经标记的多核苷酸包含选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:70的核苷酸3-29、SEQ ID NO:71的核苷酸8-31、SEQ ID NO:72的核苷酸8-25，并且其中所述多核苷酸组选自由以下组成的组：Set-14、Set-32和Set-44。
15.根据权利要求14所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含选自由SEQ IDNO:70至SEQ ID NO:72组成的组的序列。
16.根据权利要求1所述的组合物，还包含经标记的多核苷酸，所述经标记的多核苷酸包含选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:73的核苷酸6-36、SEQ ID NO:74的核苷酸6-34、SEQ ID NO:75的核苷酸5-35、SEQ ID NO:76的核苷酸5-35和SEQ ID NO:77的核苷酸4-29，并且其中所述多核苷酸组选自由以下组成的组：Set-12、Set-13、Set-16至Set-18、Set-31、Set-34至Set-36、Set-46和Set-47。
17.根据权利要求16所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含选自由SEQ IDNO:73至SEQ ID NO:77组成的组的序列。
18.根据权利要求2所述的组合物，其中所述探针是包含荧光团、猝灭剂和多核苷酸的分子信标。
19.根据权利要求18所述的组合物，其中所述分子信标包含选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:61的核苷酸5-21、SEQ ID...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种组合物，所述组合物包含选自由set-1至set-47组成的组的多核苷酸组。
2.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物还包含探针。
3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述探针包含标记物。
4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述探针是经标记的多核苷酸。
5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含一个或更多个锁核酸。
6.根据权利要求4或5所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含选自由以下组成的组的序列：seq id no:61的核苷酸5-21、seq id no:62的核苷酸6-38、seq id no:63的核苷酸5-26、seq id no:64的核苷酸8-37、seq id no:65的核苷酸8-37、seq id no:66的核苷酸8-37、seq id no:67的核苷酸8-26、seq id no:68的核苷酸7-25、seq id no:69的核苷酸8-26、seq id no:70的核苷酸3-29、seq id no:71的核苷酸8-31、seq id no:72的核苷酸8-25、seq id no:73的核苷酸6-36、seq id no:74的核苷酸6-34、seq id no:75的核苷酸5-35、seq id no:76的核苷酸5-35和seq id no:77的核苷酸4-29。
7.根据权利要求4所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含选自由seq id no:61至seq id no:77组成的组的序列。
8.根据权利要求4-6中任一项所述的组合物，其中所述标记物是荧光团。
9.根据权利要求8所述的组合物，其中所述荧光团共价地附接至所述多核苷酸的末端。
10.根据权利要求1所述的组合物，还包含经标记的多核苷酸，所述经标记的多核苷酸包含选自由以下组成的组的序列：seq id no:61的核苷酸5-21、seq id no:62的核苷酸6-38、seq id no:63的核苷酸5-26、seq id no:64的核苷酸8-37、seq id no:65的核苷酸8-37、seq id no:66的核苷酸8-37、seq id no:67的核苷酸8-26、seq id no:68的核苷酸7-25和seq id no:69的核苷酸8-26，并且其中所述多核苷酸组选自由以下组成的组：set-3至set-11、set-19、set-20、set-23至set-30和set-38至set-42。
11.根据权利要求10所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含选自由seq idno:61至seq id no:69组成的组的序列。
12.根据权利要求11所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸的序列是seq id no:65，并且所述多核苷酸组是set-11。
13.根据权利要求11所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸的序列是seq id no:65，并且所述多核苷酸组是set-20。
14.根据权利要求1所述的组合物，还包含经标记的多核苷酸，所述经标记的多核苷酸包含选自由以下组成的组的序列：seq id no:70的核苷酸3-29、seq id no:71的核苷酸8-31、seq id no:72的核苷酸8-25，并且其中所述多核苷酸组选自由以下组成的组：set-14、set-32和set-44。
15.根据权利要求14所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含选自由seq idno:70至seq id no:72组成的组的序列。
16.根据权利要求1所述的组合物，还包含经标记的多核苷酸，所述经标记的多核苷酸包含选自由以下组成的组的序列：seq id no:73的核苷酸6-36、seq id no:74的核苷酸6-34、seq id no:75的核苷酸5-35、seq id no:76的核苷酸5-35和seq id no:77的核苷酸4-29，并且其中所述多核苷酸组选自由以下组成的组：set-12、set-13、set-16至set-18、set-31、set-34至set-36、set-46和set-47。
17.根据权利要求16所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含选自由seq idno:73至seq id no:77组成的组的序列。
18.根据权利要求2所述的组合物，其中所述探针是包含荧光团、猝灭剂和多核苷酸的分子信标。
19.根据权利要求18所述的组合物，其中所述分子信标包含选自由以下组成的组的序列：seq id no:61的核苷酸5-21、seq id no:62的核苷酸6-38、seq id no:63的核苷酸5-26、seq id no:64的核苷酸8-37、seq id no:65的核苷酸8-37、seq id no:66的核苷酸8-37、seq id no:67的核苷酸8-26、seq id no:68的核苷酸7-25、seq id no:69的核苷酸8-26、seq id no:70的核苷酸3-29、seq id no:71的核苷酸8-31、seq id no:72的核苷酸8-25、seq id no:73的核苷酸6-36、seq id no:74的核苷酸6-34、seq id no:75的核苷酸5-35、seq id no:76的核苷酸5-35和seq id no:77的核苷酸4-29。
20.根据权利要求19所述的组合物，其中所述分子信标包含选自由seq id no:61至seqid no:77组成的组的序列。
21.根据权利要求20所述的组合物，其中所述多核苷酸序列由seq id no:65组成。
22.一种分子信标，所述分子信标包含荧光团、猝灭剂和多核苷酸，其中所述多核苷酸包含选自由以下组成的组的序列：seq id no:61的核苷酸5-21、seq id no:62的核苷酸6-38、seq id no:63的核苷酸5-26、seq id no:64的核苷酸8-37、seq id no:65的核苷酸8-37、seq id no:66的核苷酸8-37、seq id no:67的核苷酸8-26、seq id no:68的核苷酸7-25、seq id no:69的核苷酸8-26、seq id no:70的核苷酸3-29、seq id no:71的核苷酸8-31、seq id no:72的核苷酸8-25、seq id no:73的核苷酸6-36、seq id no:74的核苷酸6-34、seq id no:75的核苷酸5-35、seq id no:76的核苷酸5-35和seq id no:77的核苷酸4-29。
23.根据权利要求22所述的分子信标，其中所述多核苷酸包含选自由seq id no:61至seq id no:77组成的组的序列。
24.根据权利要求23所述的分子信标，其中所述多核苷酸由选自由seq id no:61至seqid no:77组成的组的序列组成。
25.根据权利要求22所述的分子信标，其中所述荧光团是fam并且所述猝灭剂是bhq1。
26.根据权利要求22所述的分子信标，其中所述荧光团是atto 565或alexa 594并且所述猝灭剂是bhq1或bhq2。
27.一种检测测试样品中乙型流感病毒的方法，所述方法包括：
28.根据权利要求27所述的方法，其中步骤(b)中所述靶序列的扩增在约60℃和...
【专利技术属性】
技术研发人员：威廉·布朗，梅根·普赖斯，赵琰，爱德华多·莫拉莱斯，詹姆士·哈特，丹·瓦纳塔，安德里亚·迪登，约瑟芬·王，多丽斯·科托维拉，
申请(专利权)人：达丽斯生物医学公司，
类型：发明
国别省市：
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