用于人类β肌动蛋白的扩增及检测的多核苷酸制造技术

本文公开了涉及经由核酸扩增测试(NAAT)来检测β肌动蛋白[Homo sapiens(智人)(人类)]，例如扩增并确定测试样品中β

For humans \u03b2 Actin amplification and detection of polynucleotides

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于人类
β
肌动蛋白的扩增及检测的多核苷酸
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年12月2日提交的美国临时申请第16/700,824号的权益，该美国临时申请的公开内容通过引用以其整体并入本文。
[0003]序列表
[0004]本申请包含序列表，所述序列表已经以ASCII格式电子地提交并且在此通过引用以其整体并入。创建于2020年12月1日的所述ASCII副本被命名为TSM
‑
047WO_SL.txt，并且大小为42,596字节。
专利

[0005]本专利技术涉及分子生物学和核酸化学领域。本专利技术提供了用于检测哺乳动物特别是人类的β肌动蛋白基因的方法和试剂，并且还涉及医学诊断和预后领域。特别地，本专利技术涉及用于扩增和检测β肌动蛋白(beta actin)(以下称“β
‑
肌动蛋白(β
‑
actin)”)的多核苷酸和方法。
[0006]背景
[0007]不管细胞在组织或生物体中的具体作用如何，维持细胞存在所必需的基础细胞功能都需要管家基因。因此，无论组织类型、发育阶段、细胞周期状态或外部信号如何，这样的基因都被预期在正常和病理生理条件下的生物体的所有细胞中表达。由于这些基因代表了维持生命必需的基因的最小的组，它们可以为通过经常使用它们作为对照来进行实验研究和分子测试的研究人员和专业人员提供价值。对照与感兴趣的靶分析物被平行评估以建立对所获得的最终结果的置信因子。当对照的预期存在被确定时，实验或测定的一个或更多个方面被确认是正确地发挥功能的。然而，当不存在对照的预期存在时，所讨论的最终结果不符合性能标准并指示错误。
[0008]在一个具体的实例中，用于分子诊断测试的核酸扩增测试(NAAT)需要使用与一个或更多个感兴趣的靶分析物平行进行测试和检测的一个或更多个对照。本文公开的实施方案提供了涉及使用环介导等温扩增检测编码β
‑
肌动蛋白的管家基因的引物和探针。
[0009]专利技术概述
[0010]在一些实施方案中，本专利技术包括一种组合物，所述组合物包含选自由组1至组29组成的组的多核苷酸的组。在一些实施方案中，组合物还包含探针。在一些实施方案，探针包含标记物。在一些实施方案中，探针是经标记的多核苷酸。在优选的实施方式中，标记物是荧光团，所述荧光团优选地共价地附接至多核苷酸的末端。在特别优选的实施方案中，探针或多核苷酸是包含荧光团、猝灭剂和多核苷酸的分子信标。在一种实施方案中，荧光团是FAM并且猝灭剂是BHQ1。在替代的实施方式中，荧光团是ATTO 565或Alexa 594，并且猝灭剂是BHQ1或BHQ2。
[0011]在一些实施方式中，组合物包含经标记的多核苷酸，所述经标记的多核苷酸包含选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:135的核苷酸6
‑
33、SEQ ID NO:136的核苷酸6
‑
30、SEQ ID NO:137的核苷酸7
‑
27、SEQ ID NO:138的核苷酸7
‑
26、SEQ ID NO:139的核苷酸1
‑
26、SEQ ID NO:140的核苷酸7
‑
26、SEQ ID NO:141的核苷酸7
‑
30、SEQ ID NO:142的核苷酸6
‑
30、SEQ ID NO:143的核苷酸8
‑
32、SEQ ID NO:144的核苷酸8
‑
30、SEQ ID NO:145的核苷酸6
‑
31、SEQ ID NO:146的核苷酸8
‑
30、SEQ ID NO:147的8
‑
22、SEQ ID NO:148的核苷酸8
‑
24、SEQ ID NO:149的核苷酸7
‑
27、SEQ ID NO:150的核苷酸8
‑
21、SEQ ID NO:151的核苷酸8
‑
32、SEQ ID NO:152的核苷酸1
‑
24、SEQ ID NO:153的核苷酸4
‑
24、SEQ ID NO:154的核苷酸1
‑
23、SEQ ID NO:155的核苷酸8
‑
26、SEQ ID NO:156的核苷酸7
‑
29、SEQ ID NO:157的核苷酸8
‑
28、SEQ ID NO:158的核苷酸8
‑
29、SEQ ID NO:159的核苷酸7
‑
25、SEQ ID NO:160的核苷酸8
‑
22、SEQ ID NO:161的核苷酸6
‑
22、SEQ ID NO:162的核苷酸3
‑
22、SEQ ID NO:163的核苷酸8
‑
28、SEQ ID NO:164的核苷酸3
‑
28、SEQ ID NO:165的核苷酸5
‑
25、SEQ ID NO:166的核苷酸5
‑
26、SEQ ID NO:167的核苷酸5
‑
20、SEQ ID NO:168的核苷酸4
‑
22、SEQ ID NO:169的核苷酸7
‑
22、SEQ ID NO:170的核苷酸3
‑
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‑
28、SEQ ID NO:172的核苷酸6
‑
27、SEQ ID NO:173的核苷酸7
‑
29、SEQ ID NO:174的核苷酸5
‑
27、SEQ ID NO:175的核苷酸7
‑
29、SEQ ID NO:176的核苷酸6
‑
28、SEQ ID NO:177的核苷酸4
‑
23、SEQ ID NO:178的核苷酸4
‑
34、SEQ ID NO:179的核苷酸3
‑
27、SEQ ID NO:180的核苷酸2
‑
27、SEQ ID NO:181的核苷酸5
‑
33、SEQ ID NO:182的核苷酸3
‑
30、SEQ ID NO:183的核苷酸9
‑
34和SEQ ID NO:184的核苷酸8
‑
28。在另外的实施方式中，经标记的多核苷酸可以包含选自由SEQ ID NO:135至SEQ ID NO:184组成的组的序列。在某些实施方式中，经标记的多核苷酸的序列选自由SEQ ID NO:135至SEQ ID NO:184组成的组。
[0012]在一些实施方案中，多核苷酸的组选自由组9
‑
组12、组17和组22
‑
组本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种组合物，所述组合物包含选自由组1至组29组成的组的多核苷酸的组。2.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物还包含探针。3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述探针包含标记物。4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述探针是经标记的多核苷酸。5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:135的核苷酸6
‑
33、SEQ ID NO:136的核苷酸6
‑
30、SEQ ID NO:137的核苷酸7
‑
27、SEQ ID NO:138的核苷酸7
‑
26、SEQ ID NO:139的核苷酸1
‑
26、SEQ ID NO:140的核苷酸7
‑
26、SEQ ID NO:141的核苷酸7
‑
30、SEQ ID NO:142的核苷酸6
‑
30、SEQ ID NO:143的核苷酸8
‑
32、SEQ ID NO:144的核苷酸8
‑
30、SEQ ID NO:145的核苷酸6
‑
31、SEQ ID NO:146的核苷酸8
‑
30、SEQ ID NO:147的8
‑
22、SEQ ID NO:148的核苷酸8
‑
24、SEQ ID NO:149的核苷酸7
‑
27、SEQ ID NO:150的核苷酸8
‑
21、SEQ ID NO:151的核苷酸8
‑
32、SEQ ID NO:152的核苷酸1
‑
24、SEQ ID NO:153的核苷酸4
‑
24、SEQ ID NO:154的核苷酸1
‑
23、SEQ ID NO:155的核苷酸8
‑
26、SEQ ID NO:156的核苷酸7
‑
29、SEQ ID NO:157的核苷酸8
‑
28、SEQ ID NO:158的核苷酸8
‑
29、SEQ ID NO:159的核苷酸7
‑
25、SEQ ID NO:160的核苷酸8
‑
22、SEQ ID NO:161的核苷酸6
‑
22、SEQ ID NO:162的核苷酸3
‑
22、SEQ ID NO:163的核苷酸8
‑
28、SEQ ID NO:164的核苷酸3
‑
28、SEQ ID NO:165的核苷酸5
‑
25、SEQ ID NO:166的核苷酸5
‑
26、SEQ ID NO:167的核苷酸5
‑
20、SEQ ID NO:168的核苷酸4
‑
22、SEQ ID NO:169的核苷酸7
‑
22、SEQ ID NO:170的核苷酸3
‑
22、SEQ ID NO:171的核苷酸7
‑
28、SEQ ID NO:172的核苷酸6
‑
27、SEQ ID NO:173的核苷酸7
‑
29、SEQ ID NO:174的核苷酸5
‑
27、SEQ ID NO:175的核苷酸7
‑
29、SEQ ID NO:176的核苷酸6
‑
28、SEQ ID NO:177的核苷酸4
‑
23、SEQ ID NO:178的核苷酸4
‑
34、SEQ ID NO:179的核苷酸3
‑
27、SEQ ID NO:180的核苷酸2
‑
27、SEQ ID NO:181的核苷酸5
‑
33、SEQ ID NO:182的核苷酸3
‑
30、SEQ ID NO:183的核苷酸9
‑
34和SEQ ID NO:184的核苷酸8
‑
28。6.根据权利要求4所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含选自由SEQ ID NO:135至SEQ ID NO:184组成的组的序列。7.根据权利要求4所述的组合物，其中所述标记物是荧光团。8.根据权利要求7所述的组合物，其中所述荧光团共价地附接至所述多核苷酸的末端。9.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物还包含经标记的多核苷酸，所述经标记的多核苷酸包含选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:147的核苷酸8
‑
22、SEQ ID NO:148的核苷酸8
‑
24、SEQ ID NO:149的核苷酸7
‑
27、SEQ ID NO:150的核苷酸8
‑
21、SEQ ID NO:155的核苷酸8
‑
26、SEQ ID NO:156的核苷酸7
‑
29、SEQ ID NO:165的核苷酸5
‑
25、SEQ ID NO:166的核苷酸5
‑
26、SEQ ID NO:167的核苷酸5
‑
20、SEQ ID NO:168的核苷酸4
‑
22、SEQ ID NO:169的核苷酸7
‑
22、SEQ ID NO:171的核苷酸7
‑
28、SEQ ID NO:172的核苷酸6
‑
27、SEQ ID NO:173的核苷酸7
‑
29、SEQ ID NO:174的核苷酸5
‑
27、SEQ ID NO:175的核苷酸7
‑
29、SEQ ID NO:176的核苷酸6
‑
28、SEQ ID NO:183的核苷酸9
‑
34和SEQ ID NO:184的核苷酸8
‑
28，并且其中所述多核苷酸的组选自由组9
‑
组12、组17和组22
‑
组29组成的组。10.根据权利要求9所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:149、SEQ ID NO:150、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:167、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:169、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:174、SEQ ID NO:
175、SEQ ID NO:176、SEQ ID NO:183和SEQ ID NO:184。11.根据权利要求10所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸的序列是SEQ ID NO:184，并且所述多核苷酸的组是组29。12.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物还包含经标记的多核苷酸，所述经标记的多核苷酸包含选自由SEQ ID NO:152的核苷酸1
‑
24、SEQ ID NO:153的核苷酸4
‑
24和SEQ ID NO:154的核苷酸1
‑
23组成的组的序列，并且其中所述多核苷酸的组选自由组9
‑
组11、组17和组23
‑
组29组成的组。13.根据权利要求12所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含选自由SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:153和SEQ ID NO:154组成的组的序列。14.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物还包含经标记的多核苷酸，所述经标记的多核苷酸包含选自由SEQ ID NO:144的核苷酸8
‑
30、SEQ ID NO:145的核苷酸6
‑
31和SEQ ID NO:146的核苷酸8
‑
30组成的组的序列，并且其中所述多核苷酸的组选自由组4、组9
‑
组12、组17和组22
‑
组26组成的组。15.根据权利要求14所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含选自由SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145和SEQ ID NO:146组成的组的序列。16.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物还包含经标记的多核苷酸，所述经标记的多核苷酸包含SEQ ID NO:170的核苷酸3
‑
22，并且其中所述多核苷酸的组选自由组5、组12、组17和组22
‑
组25组成的组。17.根据权利要求16所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含SEQ ID NO:170。18.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物还包含经标记的多核苷酸，所述经标记的多核苷酸包含选自由SEQ ID NO:180的核苷酸2
‑
27和SEQ ID NO:182的核苷酸3
‑
30组成的组的序列，并且其中所述多核苷酸的组选自由组6
‑
组8、组15和组16组成的组。19.根据权利要求18所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含选自由SEQ ID NO:180和SEQ ID NO:182组成的组的序列。20.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物还包含经标记的多核苷酸，所述经标记的多核苷酸包含选自由SEQ ID NO:178的核苷酸4
‑
34和SEQ ID NO:181的核苷酸5
‑
33组成的组的序列，并且其中所述多核苷酸的组选自由组6
‑
组11和组28
‑
组29组成的组。21.根据权利要求20所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含选自由SEQ ID NO:178和SEQ ID NO:181组成的组的序列。22.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物还包含经标记的多核苷酸，所述经标记的多核苷酸包含SEQ ID NO:179的核苷酸3
‑
27，并且其中所述多核苷酸的组选自由组6
‑
组9和组11组成的组。23.根据权利要求22所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含SEQ ID NO:179。24.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物还包含经标记的多核苷酸，所述经标记的多核苷酸包含SEQ ID NO:177的核苷酸4
‑
23，并且其中所述多核苷酸的组选自由组6
‑
组9、组11和组28组成的组。25.根据权利要求24所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含SEQ ID NO:177。26.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物还包含经标记的多核苷酸，所述经标记的多核苷酸包含选自由SEQ ID NO:159的核苷酸7
‑
25和SEQ ID NO:160的核苷酸8
‑
22组成
的组的序列，并且其中所述多核苷酸的组选自由组13
‑
组15组成的组。27.根据权利要求26所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含选自由SEQ ID NO:159和SEQ ID NO:160组成的组的序列。28.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物还包含经标记的多核苷酸，所述经标记的多核苷酸包含选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:157的核苷酸8
‑
28、SEQ ID NO:158的核苷酸8
‑
29、SEQ ID NO:161的核苷酸6
‑
22和SEQ ID NO:162的核苷酸3
‑
22，并且其中所述多核苷酸的组选自由组13
‑
组16组成的组。29.根据权利要求28所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含来自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:161和SEQ ID NO:162。30.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物还包含经标记的多核苷酸，所述经标记的多核苷酸包含选自以下的组的序列：SEQ ID NO:137的核苷酸7
‑
27、SEQ ID NO:138的核苷酸7
‑
26、SEQ ID NO:139的核苷酸1
‑
26、SEQ ID NO:140的核苷酸7
‑
26、SEQ ID NO:141的核苷酸7
‑
30、SEQ ID NO:142的核苷酸6
‑
30、SEQ ID NO:151的核苷酸8
‑
32和SEQ ID NO:153的核苷酸4
‑
24，并且其中所述多核苷酸的组是组3。31.根据权利要求30所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:138、SEQ ID NO:139、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:151和SEQ ID NO:153。32.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物还包含经标记的多核苷酸，所述经标记的多核苷酸包含选自由SEQ ID NO:163的核苷酸8
‑
28和SEQ ID NO:164的核苷酸3
‑
28组成的组的序列，并且其中所述多核苷酸的组选自由组1、组2和组18
‑
组20组成的组。33.根据权利要求32所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含来自由SEQ ID NO:163和SEQ ID NO:164组成的组的序列。34.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物还包含经标记的多核苷酸，所述经标记的多核苷酸包含选自由SEQ ID NO:135的核苷酸6
‑
33和SEQ ID NO:136的核苷酸6
‑
30组成的组的序列，并且其中所述多核苷酸的组选自由组1、组2和组18
‑
组21组成的组。35.根据权利要求34所述的组合物，其中所述经标记的多核苷酸包含来自由SEQ ID NO:135和SEQ ID NO:136组成的组的序列。36.根据权利要求2所述的组合物，其中所述探针是包含荧光团、猝灭剂和多核苷酸的分子信标。37.根据权利要求36所述的组合物，其中所述分子信标包含选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:135的核苷酸6
‑
33、SEQ ID NO:136的核苷酸6
‑
30、SEQ ID NO:137的核苷酸7
‑
27、SEQ ID NO:138的核苷酸7
‑
26、SEQ ID NO:139的核苷酸1
‑
26、SEQ ID NO:140的核苷酸7
‑
26、SEQ ID NO:141的核苷酸7
‑
30、SEQ ID NO:142的核苷酸6
‑
30、SEQ ID NO:143的核苷酸8
‑
32、SEQ ID NO:144的核苷酸8
‑
30、SEQ ID NO:145的核苷酸6
‑
31、SEQ ID NO:146的核苷酸8
‑
30、SEQ ID NO:147的8
‑
22、SEQ ID NO:148的核苷酸8
‑
24、SEQ ID NO:149的核苷酸7
‑
27、SEQ ID NO:150的核苷酸8
‑
21、SEQ ID NO:151的核苷酸8
‑
32、SEQ ID NO:152的核苷酸1
‑
24、SEQ ID NO:153的核苷酸4
‑
24、SEQ ID NO:154的核苷酸1
‑
23、SEQ ID NO:155的核苷酸8
‑
26、SEQ ID NO:156的核苷酸7
‑
29、SEQ ID NO:157的核苷酸8
‑
28、SEQ ID NO:158的核苷酸8
‑
29、SEQ ID NO:159的核苷酸7
‑
25、SEQ ID NO:160的核苷酸8
‑
22、SEQ ID NO:
161的核苷酸6
‑
22、SEQ ID NO:162的核苷酸3
‑
22、SEQ ID NO:163的核苷酸8
‑
28、SEQ ID NO:164的核苷酸3
‑
28、SEQ ID NO:165的核苷酸5
‑
25、SEQ ID NO:166的核苷酸5
‑
26、SEQ ID NO:167的核苷酸5
‑
20、SEQ ID NO:168的核苷酸4
‑
22、SEQ ID NO:169的核苷酸7
‑
22、SEQ ID NO:170的核苷酸3
‑
22、SEQ ID NO:171的核苷酸7
‑
28、SEQ ID NO:172的核苷酸6
‑
27、SEQ ID NO:173的核苷酸7
‑
29、SEQ ID NO:174的核苷酸5
‑
27、SEQ ID NO:175的核苷酸7
‑
29、SEQ ID NO:176的核苷酸6
‑
28、SEQ ID NO:177的核苷酸4
‑
23、SEQ ID NO:178的核苷酸4
‑
34、SEQ ID NO:179的核苷酸3
‑
27、SEQ ID NO:180的核苷酸2
‑
27、SEQ ID NO:181的核苷酸5
‑
33、SEQ ID NO:182的核苷酸3
‑
30、SEQ ID NO:183的核苷酸9
‑
34和SEQ ID NO:184的核苷酸8
‑
28。38.根据权利要求37所述的组合物，其中所述分子信标包含选自由SEQ ID NO:135至SEQ ID NO:184组成的组的序列。39.根据权利要求38所述的组合物，其中所述多核苷酸序列由SEQ ID NO:184组成。40.一种分子信标，所述分子信标包含荧光团、猝灭剂和多核苷酸，其中所述多核苷酸包含选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:135的核苷酸6
‑
33、SEQ ID NO:136的核苷酸6
‑
30、SEQ ID NO:137的核苷酸7
‑
27、SEQ ID NO:138的核苷酸7
‑
26、SEQ ID NO:139的核苷酸1
‑
26、SEQ ID NO:140的核苷酸7
‑
26、SEQ ID NO:141的核苷酸7
‑
30、SEQ ID NO:142的核苷酸6
‑
30、SEQ ID NO:143的核苷酸8
‑
32、SEQ ID NO:144的核苷酸8
‑
30、SEQ ID NO:145的核苷酸6
‑
31、SEQ ID NO:146的核苷酸8
‑
30、SEQ ID NO:147的8
‑
22、SEQ ID NO:148的核苷酸8
‑
24、SEQ ID NO:149的核苷酸7
‑
27、SEQ ID NO:150的核苷酸8
‑
21、SEQ ID NO:151的核苷酸8
‑
32、SEQ ID NO:152的核苷酸1
‑
24、SEQ ID NO:153的核苷酸4
‑
24、SEQ ID NO:154的核苷酸1
‑
23、SEQ ID NO:155的核苷酸8
‑
26、SEQ ID NO:156的核苷酸7
‑
29、SEQ ID NO:157的核苷酸8
‑
28、SEQ ID NO:158的核苷酸8
‑
29、SEQ ID NO:159的核苷酸7
‑
25、SEQ ID NO:160的核苷酸8
‑
22、SEQ ID NO:161的核苷酸6
‑
22、SEQ ID NO:162的核苷酸3
‑
22、SEQ ID NO:163的核苷酸8
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28、SEQ ID NO:164的核苷酸3
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25、SEQ ID NO:166的核苷酸5
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20、SEQ ID NO:168的核苷酸4
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‑
27、SEQ ID NO:175的核苷酸7
‑
29、SEQ ID NO:176的核苷酸6

【专利技术属性】
技术研发人员：詹森，
申请(专利权)人：达丽斯生物医学公司，
类型：发明
国别省市：