【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开总体上涉及dna编辑，并且更具体地，涉及用于将大片段dna插入多种真核细胞类型中的组合物和方法。
技术介绍
1、基因组写入方法的开发可以帮助研究人员在单次递送步骤中将大量设计特征引入哺乳动物基因组，这对于“一次一编辑”方法来说极具挑战性。现有的大dna递送方法，如诱导盒式交换(ice)、重组酶介导的基因组替换(rmgr)和其他相关方法都存在缺点。目前需要一种无痕、可迭代且功能性同源的哺乳动物基因组编写方法。本公开正是针对这一需求而提出的。
技术实现思路
1、本公开提供了本文中被称为“mswap-in”的组合物、方法和系统，“mswap-in”代表哺乳动物逐步转换抗生素抗性标记以进行整合(mammalian switching antibioticresistance markers progressively for integration)。mswap-in方法的非限制性实施例在附图中被示出。例如，mswap-in组合物和方法的总体概述被提供在图1的图组中，额外的组合物与方法步骤在...
【技术保护点】
1.一种组合物，所述组合物包含第一连续DNA分子，所述第一连续DNA分子包含：
2.一种组合物，所述组合物包含
3.如权利要求2所述的组合物，其中所述组合物还包含第三连续DNA分子，所述第三连续DNA分子在5'-3'的方向上包含：
4.如权利要求2所述的组合物，其中所述组合物被引入细胞中。
5.如权利要求4所述的组合物，其中所述细胞为哺乳动物细胞。
6.如权利要求4所述的组合物，其中所述组合物被引入所述细胞的内源染色体区段中。
7.如权利要求2所述的组合物，其中在将所述组合物引入所述细胞之前，所述...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种组合物，所述组合物包含第一连续dna分子，所述第一连续dna分子包含：
2.一种组合物，所述组合物包含
3.如权利要求2所述的组合物，其中所述组合物还包含第三连续dna分子，所述第三连续dna分子在5'-3'的方向上包含：
4.如权利要求2所述的组合物，其中所述组合物被引入细胞中。
5.如权利要求4所述的组合物，其中所述细胞为哺乳动物细胞。
6.如权利要求4所述的组合物，其中所述组合物被引入所述细胞的内源染色体区段中。
7.如权利要求2所述的组合物，其中在将所述组合物引入所述细胞之前，所述ugt1和/或所述ugt2对于所述细胞的内源染色体区段不是内源的。
8.如权利要求2所述的组合物，其中所述组合物还包含ugt1非依赖性核酸酶，所述ugt1非依赖性核酸酶切割所述染色体中位于所述第三同源区段或所述dna有效负荷的上游且不存在于所述第三同源区段或所述dna有效负荷中的区段。
9.如权利要求2所述的组合物，其中所述组合物还包含grna引导的ugt1核酸酶。
10.如权利要求2所述的组合物，其中所述grna引导的ugt1核酸酶的引入通过所述第一同源区段和所述第三同源区段促进基于同源重组的完整mc1的替换。
11.如权利要求2所述的组合物，其中所述mc1包含启动子、第一报告蛋白、第一正向选择标记和/或第一负向选择标记。
12.如权利要求2所述的组合物，其中所述mc2包含启动子、第二报告蛋白、第二负向选择标记和/或第二正向选择标记。
13.如权利要求2所述的组合物，其中所述mc1包含启动子、第一报告蛋白、第一正向选择标记和/或第一负向选择标记，并且其中所述mc2包含启动子、第二报告蛋白、第二负向选择标记和/或第二正向选择标记。
14.如权利要求13所述的组合物，其中所述mc1的所述第一报告蛋白、所述第一正向选择标记和/或所述第一负向选择标记不同于所述mc2的所述第二报告蛋白、所述第二正向选择标记和/或所述第二负向选择标记。
15.如权利要求13所述的组合物，其中所述mc1和/或所述mc2的所述启动子是相同的启动子。
16.如权利要求13所述的组合物，其中所述mc1的所述第一报告蛋白、所述第一正向选择标记和/或所述第一负向选择标记与所述mc2的所述第二报告蛋白、所述第二正向选择标记和/或所述第二负向选择标记相同。
17.如权利要求13所述的组合物，其中所述第一报告蛋白和/或所述第二报告蛋白包括荧光蛋白。
18.如权利要求13所述的组合物，其中所述第一正向选择标记和/或所述第二正向选择标记包括抗生素抗性基因。
19.如权利要求18所述的组合物，其中所述抗生素抗性基因包括n-乙酰基转移酶(pac)、杀稻瘟菌素s脱氨酶(bsd)、新霉素(g418)抗性基因(neo)、潮霉素抗性基因(hygb)、博莱霉素抗性基因(sh ble)或次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1基因(hprt1)。
20.如权利要求13所述的组合物，其中所述第一负向选择标记和/或所述第二负向选择标记包括毒素-抗毒素系统或反向选择。
21.如权利要求13所述的组合物，其中所述第一负向选择标记和/或所述第二负向选择标记包括1型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶(hsv1-tk)、人hprt1或胞嘧啶脱氨酶基因(coda)。
22.如权利要求2所述的组合物，其中所述第一同源区段位于待替换的内源基因的上游，并且所述第二同源区段位于所述待替换的内源基因的下游。
23.如权利要求2所述的组合物，其中所述第一同源区段位于待替换的内源基因的下游，并且所述第二同源区段位于所述待替换的内源基因的上游。
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