【技术实现步骤摘要】
本申请涉及药物敏感性检测，特别是涉及一种微小组织块培养药敏检测方法。
技术介绍
1、头颈部恶性肿瘤是恶性肿瘤之一，舌鳞状细胞癌是其主要分类之一。舌癌的治疗方式由过去的单纯手术治疗，现已发展为包括术前诱导化疗、手术、术后放(化)疗在内的综合序列治疗。化疗耐药所致的术前化疗疗效不佳是患者预后较差的重要原因。
2、通常情况下，化疗药物的敏感性需要临床医生在患者的化疗疗程结束后依据疗效进行评估，这会不可避免地对患者造成身体损害与经济损失。人源性异种移植瘤模型(patient derived xenograft，pdx)是将来源于患者的肿瘤组织或细胞植入免疫缺陷鼠的体内形成的移植瘤模型，肿瘤可以依靠动物提供的环境生长，且能保留人原代肿瘤的组织学、遗传学特征并维持患者肿瘤的异质性和微环境，常被用于替代进行药物实验。虽然pdx模型的使用可以避免患者的试药风险，但由于其平均成瘤时间大于6个月，无法对肿瘤组织的药物敏感性进行快速检测，因此无法在临床治疗中被广泛应用。
3、有鉴于此，水凝胶包被的肿瘤组织培养药敏检测法(hydrogel embeddedhistoculture drug sensitivity test，hdst)应运而生，该药敏检测法通过使用鼠尾胶、氢氧化钠及完全培养基混合形成的水凝胶，对肿瘤微小组织块进行包裹来模拟肿瘤组织在人体内的生长环境，在3～5天的药物培养后，通过mtt检测肿瘤微小组织块的活性来判断对药物的敏感性。但该药敏检测方法形成的水凝胶会形成碱性环境，与人体内的酸性生长环境有所区别，将导致药敏
技术实现思路
1、本申请实施例提供了一种微小组织块培养药敏检测方法，以解决现有技术中通过hdst药敏检测法进行药敏检测，其形成的水凝胶会形成碱性环境，将导致药敏检测结果的准确性降低的技术问题。
2、本申请实施例提供了一种微小组织块培养药敏检测方法，包括以下步骤：
3、将肿瘤组织浸泡于保存液中，于低温条件下保存，并将其配送至超净工作台；
4、于所述超净工作台处将所述肿瘤组织区隔为优质部分及劣质部分，并将所述优质部分分隔为若干块微组织；
5、配制包括生长因子及细胞外基质的基质胶，并配制转化生长因子β溶液，并将所述基质胶、所述转化生长因子β溶液、10×pbs及完全组织培养基以预设混合比例混合为水凝胶；
6、将若干块所述微组织分别置于96孔培养板的培养孔内，并于所述培养孔内添加所述水凝胶，将所述96孔培养板置于培养箱内进行预培养，并判断所述预培养是否完成；
7、若所述预培养完成，则向所述培养孔内添加组织培养基，并将添加组织培养基后的所述96孔培养板再次置于所述培养箱内，以对所述微组织进行二次培养；
8、吸除所述96孔培养板内的所述组织培养基，并将不同的所述微组织区隔为空白对照组及给药组，于放置所述空白对照组的培养孔内再次添加所述组织培养基，并于放置所述给药组的培养孔内添加含药培养基，以对所述空白对照组及所述给药组进行比对培养；
9、吸除所述培养孔内的所述组织培养基及所述含药培养基，并对所述微组织进行清洗，于所述培养孔内滴加cck8混合液，静置预设时间后，使用酶标仪检测所述cck8混合液于450nm波长处的吸光度值，基于所述吸光度值确定不同药物对所述肿瘤组织的活性抑制度。
10、进一步地，所述于所述超净工作台处将所述肿瘤组织区隔为优质部分及劣质部分，并将所述优质部分分隔为若干块微组织的步骤包括：
11、于所述超净工作台处，将所述肿瘤组织自所述保存液中取出，并通过0.4％的台盼蓝染色液检测所述肿瘤组织的活性，以将所述肿瘤组织区隔为优质部分及劣质部分，所述劣质部分呈蓝色；
12、剔除所述劣质部分，并将所述优质部分于0.2％的碘伏溶液中浸泡预设浸泡时间；
13、自所述碘伏溶液中取出所述优质部分，通过含3％双抗的pbs缓冲液对其进行冲洗后，将其置于第一dmem培养基中；
14、于所述第一dmem培养基中通过眼科剪将所述优质部分分隔为若干块微组织。
15、进一步地，所述劣质部分包括坏死部分及低活性部分，所述预设浸泡时间为25s～35s。
16、进一步地，所述生长因子包括类胰岛素生长因子、血管内皮生长因子、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子，所述细胞外基质包括层粘连蛋白、iv型胶原蛋白、巢蛋白及硫酸乙酰肝素蛋白多糖。
17、进一步地，所述基质胶、所述转化生长因子β溶液、10×pbs及完全组织培养基的预设混合比例为40:3:5:152。
18、进一步地，所述完全组织培养基包括dmem/f12培养基、胎牛血清及双抗，所述dmem/f12培养基、所述胎牛血清及所述双抗的混合比例为15:4:1。
19、进一步地，所述培养箱内的培养温度为35℃～40℃，所述培养箱内的二氧化碳含量为4％～7％，所述预培养的时间为2.5h～3.5h。
20、进一步地，所述以对所述空白对照组及所述给药组进行比对培养的步骤具体为：
21、以预设间隔频次更换所述组织培养基及所述含药培养基；
22、持续预设比对时间后完成对所述空白对照组及所述给药组的比对培养。
23、进一步地，所述预设间隔频次为24h/次，所述预设比对时间为3天～5天。
24、进一步地，所述cck8混合溶液由cck8溶液与第二dmem培养基混合形成，所述cck8溶液与所述第二dmem培养基的混合比例为1:9，所述预设时间为1h～2h。
25、相比于相关技术，本专利技术的有益效果在于：通过将包括生长因子及细胞外基质的所述基质胶、所述转化生长因子β溶液、所述10×pbs及所述完全组织培养基混合形成所述水凝胶，在ph检测仪的检测下，其ph值在7.35～7.45之间，与体内正常ph环境一致，进而使所述微组织的生长环境更为贴合体内环境，提高了药敏检测的准确性。通过利用所述cck8混合液检测所述微组织的活性，其与所述微组织接触后，可被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物，生成的甲臜产物的数量与活细胞的数量成正比，通过所述酶标仪在450nm波长处测定其光吸收值，可反映活细胞数量，以此可确定对药物的敏感性。所述cck8混合液使用方便，无需有机溶剂溶解，进一步提高了药敏检测的准确性。
26、本申请的一个或多个实施例的细节在以下附图和描述中提出，以使本申请的其他特征、目的和优点更加简明易懂。
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1.一种微小组织块培养药敏检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的微小组织块培养药敏检测方法，其特征在于，所述于所述超净工作台处将所述肿瘤组织区隔为优质部分及劣质部分，并将所述优质部分分隔为若干块微组织的步骤包括：
3.根据权利要求2所述的微小组织块培养药敏检测方法，其特征在于，所述劣质部分包括坏死部分及低活性部分，所述预设浸泡时间为25s～35s。
4.根据权利要求1所述的微小组织块培养药敏检测方法，其特征在于，所述生长因子包括类胰岛素生长因子、血管内皮生长因子、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子，所述细胞外基质包括层粘连蛋白、IV型胶原蛋白、巢蛋白及硫酸乙酰肝素蛋白多糖。
5.根据权利要求1所述的微小组织块培养药敏检测方法，其特征在于，所述基质胶、所述转化生长因子β溶液、10×PBS及完全组织培养基的预设混合比例为40:3:5:152。
6.根据权利要求1所述的微小组织块培养药敏检测方法，其特征在于，所述完全组织培养基包括DMEM/F12培养基、胎牛血清及双抗，所述DMEM/F12培养基、所述胎牛
7.根据权利要求1所述的微小组织块培养药敏检测方法，其特征在于，所述培养箱内的培养温度为35℃～40℃，所述培养箱内的二氧化碳含量为4％～7％，所述预培养的时间为2.5h～3.5h。
8.根据权利要求1所述的微小组织块培养药敏检测方法，其特征在于，所述以对所述空白对照组及所述给药组进行比对培养的步骤具体为：
9.根据权利要求8所述的微小组织块培养药敏检测方法，其特征在于，所述预设间隔频次为24h/次，所述预设比对时间为3天～5天。
10.根据权利要求1所述的微小组织块培养药敏检测方法，其特征在于，所述CCK8混合溶液由CCK8溶液与第二DMEM培养基混合形成，所述CCK8溶液与所述第二DMEM培养基的混合比例为1:9，所述预设时间为1h～2h。
...【技术特征摘要】
1.一种微小组织块培养药敏检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的微小组织块培养药敏检测方法，其特征在于，所述于所述超净工作台处将所述肿瘤组织区隔为优质部分及劣质部分，并将所述优质部分分隔为若干块微组织的步骤包括：
3.根据权利要求2所述的微小组织块培养药敏检测方法，其特征在于，所述劣质部分包括坏死部分及低活性部分，所述预设浸泡时间为25s～35s。
4.根据权利要求1所述的微小组织块培养药敏检测方法，其特征在于，所述生长因子包括类胰岛素生长因子、血管内皮生长因子、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子，所述细胞外基质包括层粘连蛋白、iv型胶原蛋白、巢蛋白及硫酸乙酰肝素蛋白多糖。
5.根据权利要求1所述的微小组织块培养药敏检测方法，其特征在于，所述基质胶、所述转化生长因子β溶液、10×pbs及完全组织培养基的预设混合比例为40:3:5:152。
6.根据权利要求1所述的微小组织块培...
【专利技术属性】
技术研发人员：邱嘉旋，辛雨琪，姜庆坤，刘晨姝，何斐，
申请(专利权)人：南昌大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：
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