甘薯ARF基因沉默及方法的构建与应用技术

本发明专利技术公开了甘薯ARF基因沉默载体的构建及应用。甘薯ARF基因沉默载体质粒，包括pTRV1和pTRV2‑ARF；pTRV2‑ARF为pTRV2中插入SEQ ID NO：1所示ARF基因的部分片段构建获得。甘薯ARF基因沉默方法包括如下步骤：(1)选择“r”型甘薯茎段作为材料；“r”型甘薯茎段为带有两个节和一个腋芽的甘薯茎段；(2)将载体质粒pTRV1和pTRV2‑ARF分别转化农杆菌；(3)分别将转入了pTRV1和pTRV2‑ARF的农杆菌按照1:1的体积比混合，加入乙酰丁香酮、半胱氨酸和Tween 20后制成农杆菌侵染液，对“r”型甘薯茎段进行减压和共培养处理；(4)侵染后的“r”型甘薯茎段清洗后进行培养。本发明专利技术能够实现甘薯ARF基因的高效沉默，建立的甘薯VIGS体系也为甘薯基因功能研究及遗传育种奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因沉默，具体涉及甘薯生长素响应因子arf基因沉默载体质粒及方法的构建与应用，更具体的是涉及arf基因沉默载体质粒的构建及其通过病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing，vigs)的方法在甘薯基因功能研究或遗传育种中的应用。

技术介绍

1、植物生长素响应因子arf(auxinresponse factor)参与调节植物的众多生理反应,在植物生长发育过程中起到重要调控作用。甘薯是旋花科一年生草本植物，是重要的粮食作物和工业原料作物，其全基因组已经公布，在甘薯基因组网站上能够找到预测的甘薯的arf基因，但其基因功能尚未见报道。

2、病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing，vigs)是一种不依赖于转基因技术的基因功能缺失研究方法，可以简便、高效的沉默靶标基因。以烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus，trv)为介导的vigs体系具有侵染效率高、沉默时间长、引起的症状轻等诸多优势，是目前vigs技术中应用最广泛的病毒载体质粒。trv病毒具有两条rna本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.甘薯ARF基因在调节甘薯不定根生长中的应用，其特征在于，所述ARF基因部分片段的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.甘薯ARF基因沉默载体质粒，其特征在于，

3.根据权利要求2所述的甘薯ARF基因沉默载体质粒，其特征在于，所述pTRV2-ARF的构建方法如下：

4.根据权利要求3所述的甘薯ARF基因沉默载体质粒，其特征在于，所述引物包括：

5.甘薯ARF基因沉默方法，其特征在于，包括如下步骤：

6.根据权利要求5所述的甘薯ARF基因沉默方法，其特征在于，步骤(3)中的所述转入载体质粒pTRV1和pTRV2-ARF的...

【技术特征摘要】

1.甘薯arf基因在调节甘薯不定根生长中的应用，其特征在于，所述arf基因部分片段的核苷酸序列如seq id no：1所示。

2.甘薯arf基因沉默载体质粒，其特征在于，

3.根据权利要求2所述的甘薯arf基因沉默载体质粒，其特征在于，所述ptrv2-arf的构建方法如下：

4.根据权利要求3所述的甘薯arf基因沉默载体质粒，其特征在于，所述引物包括：

5.甘薯arf基因沉默方法，其特征在于，包括如下步骤：

6.根据权利要求5所述的甘薯arf基因沉默方法，其特征在于，步骤(3)中的所述转入载体质粒ptrv1和ptrv2-arf的农杆菌的od600均为1-1.2；

7.根据权利要求5所述的甘薯arf基因沉默方法，其特征在于，步骤(3)中的所述的减压处理具体为：将...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘起丽，李成伟，姜良良，郎剑锋，杜建峰，胡海燕，黄胜胜，王海荣，曾孙孟，雷闪闪，
申请(专利权)人：河南科技学院，
类型：发明
国别省市：