【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于肿瘤靶向治疗，涉及一种a7r-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽及其制备方法和应用。
技术介绍
1、血管生成(angiogenesis)是指从已有的毛细血管或毛细血管后静脉发展而形成新的血管。新生血管的生长和成熟是一个相当复杂和协调的过程，血管的形成与发展取决于血管生成促进因子和抑制因子的动态平衡。诱导血管新生是肿瘤十大标志性特征之一。肿瘤血管新生是肿瘤发生发展、浸润与转移的重要条件，在肿瘤生长和转移中起着关键作用。肿瘤血管生成的过程主要为：肿瘤细胞持续分裂和增殖，消耗大量的氧气和营养物质。当实体瘤的体积小于2mm3时，可以通过扩散获得氧气和营养物质。随着肿瘤组织的逐渐生长，肿瘤需要形成新的血管来获取营养和氧气，以确保肿瘤呈指数增长。因此，对于实体瘤来说，血管生成是不可避免的。因此，抑制血管生成可作为肿瘤治疗的一种治疗策略。
2、近年来，靶向肿瘤血管生成已成为肿瘤治疗和预防肿瘤扩展的研究热点。目前fda批准的抗血管生成药物根据靶点的数量分为两类：单靶点抑制剂和多靶点抑制剂。为了增强药物载体与肿瘤细胞的相互作用，并增强肿瘤细胞对药物载体的内吞，需要赋予药物载体主动靶向的功能。对于主动靶向，主要是利用靶向分子来修饰药物载体，将药物定向地运送到肿瘤区域以发挥药效，降低药物在长循环中被体内清除的速率，从而增加药物在肿瘤区域的富集浓度，提高药效。通过噬菌体展示技术筛选的七肽a7r(atwlppr)对在各种肿瘤中过表达的vegfr-2和nrp-1具有高亲和力和特异性，因而被用作靶向配体来构建用于肿瘤成像和治疗的成像探针和靶向递
3、但目前有关a7r的报道主要为对其稳定性的改造，还未见关于提高a7r透膜性的报道。
技术实现思路
1、为了克服上述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种a7r-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽及其制备方法和应用，提高a7r的透膜性。
2、为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：
3、本专利技术公开了一种a7r-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽，对a7r的非关键氨基酸进行突变得到；所述a7r的序列如seq id no.1所示，所述a7r的非关键氨基酸为第一位的丙氨酸、第二位的苏氨酸、第三位的色氨酸以及第六位的脯氨酸。
4、优选地，所述突变为单点突变、多点突变或d型氨基酸替换。
5、进一步优选地，将a7r非关键氨基酸中的一个或多个氨基酸替换为精氨酸，得到a7r-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽。
6、进一步优选地，将a7r第一位的丙氨酸，和/或第二位的苏氨酸，和/或第三位的色氨酸替换为精氨酸，将第六位的脯氨酸替换为谷氨酸，在第一位氨基酸之前引入赖氨酸；再通过首尾相连式环化得到a7r-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽。
7、优选地，a7r-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽的序列如seq id no.2～seq id no.9所示。
8、本专利技术还公开了上述a7r-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽的制备方法，通过基于fmoc氨基酸的固相合成法制备得到。
9、本专利技术还公开了上述a7r-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽在制备抗肿瘤药物制剂中的应用。
10、优选地，所述抗肿瘤药物为靶向肿瘤的药物。
11、优选地，所述肿瘤为宫颈癌、肝癌或神经胶质瘤。
12、优选地，a7r-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽的浓度为1.0×10-2～20.0μmol/l。
13、本专利技术还公开了一种抗肿瘤药物组合物，包括具有抗肿瘤作用的其他活性成分、上述a7r-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽以及药学上可接受的载体或赋形剂。
14、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
15、本专利技术提供的一种a7r-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽，通过对七肽a7r的非关键氨基酸位点(atwlppr)进行突变，构建基于a7r设计的靶向穿膜肽化合物库。制得的a7r-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽分子量小，易进入细胞发挥作用，易于大量合成，稳定性好，对hela细胞、huh-7细胞、u251细胞及hek293细胞没有明显的细胞毒性；能够特异性靶向肿瘤细胞，对hela细胞、huh-7细胞及u251细胞的透膜性明显增加，作用效率高。特别是a7r-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽中的cyclo-a7r-rrr与a7r相比，对hela细胞、huh-7细胞及u251细胞的透膜性明显增加，在hela细胞、huh-7细胞及u251细胞中的透膜呈现浓度依赖性和时间依赖性，浓度越高，细胞中的摄取越高，时间越长，细胞中的摄取越高。该a7r-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽在制备靶向抗肿瘤药物(靶向递送及透膜方面)、抗血管生成药物、靶向宫颈癌细胞、肝癌细胞及神经胶质瘤细胞的治疗中有良好的应用前景，并且基本不会对hela细胞、huh-7细胞、u251细胞及hek293细胞的细胞活力产生影响，可以作为a7r系列多肽开发的又一重要领域。
16、进一步地，在a7r中引入精氨酸，能够提高a7r的透膜性。
17、进一步地，在a7r中引入精氨酸的基础上，再引入赖氨酸和谷氨酸使a7r环化，提高a7r透膜性的同时，能够提高a7r-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽的稳定性。
18、本专利技术提供的a7r-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽的制备方法，通过化学合成进行制备，技术线路成熟，易于大量制备，稳定性好，对于目前尚无疗效优良的a7r靶向穿膜肽研发具有潜在应用前景。
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1.一种A7R-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽，其特征在于，对A7R的非关键氨基酸进行突变得到；所述A7R的序列如SEQ ID NO.1所示，所述A7R的非关键氨基酸为第一位的丙氨酸、第二位的苏氨酸、第三位的色氨酸以及第六位的脯氨酸。
2.根据权利要求1所述的一种A7R-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽，其特征在于，所述突变为单点突变、多点突变或D型氨基酸替换。
3.根据权利要求2所述的一种A7R-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽，其特征在于，将A7R非关键氨基酸中的一个或多个氨基酸替换为精氨酸，得到A7R-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽。
4.根据权利要求3所述的一种A7R-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽，其特征在于，将A7R第一位的丙氨酸，和/或第二位的苏氨酸，和/或第三位的色氨酸替换为精氨酸，将第六位的脯氨酸替换为谷氨酸，在第一位氨基酸之前引入赖氨酸；再通过首尾相连式环化得到A7R-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽。
5.根据权利要求1～4任意一项所述的一种A7R-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽，其特征在于，A7R-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽的序列如SEQ ID NO.2～SEQ ID NO
6.权利要求1～5任意一项所述的一种A7R-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽的制备方法，其特征在于，通过基于FMOC氨基酸的固相合成法制备得到。
7.权利要求1～5任意一项所述的一种A7R-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽在制备抗肿瘤药物制剂中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物为靶向肿瘤的药物。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为宫颈癌、肝癌或神经胶质瘤。
10.一种抗肿瘤药物组合物，其特征在于，包括具有抗肿瘤作用的其他活性成分、权利要求1～5任意一项所述的A7R-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽以及药学上可接受的载体或赋形剂。
...【技术特征摘要】
1.一种a7r-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽，其特征在于，对a7r的非关键氨基酸进行突变得到；所述a7r的序列如seq id no.1所示，所述a7r的非关键氨基酸为第一位的丙氨酸、第二位的苏氨酸、第三位的色氨酸以及第六位的脯氨酸。
2.根据权利要求1所述的一种a7r-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽，其特征在于，所述突变为单点突变、多点突变或d型氨基酸替换。
3.根据权利要求2所述的一种a7r-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽，其特征在于，将a7r非关键氨基酸中的一个或多个氨基酸替换为精氨酸，得到a7r-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽。
4.根据权利要求3所述的一种a7r-透膜改造肿瘤靶向穿膜肽，其特征在于，将a7r第一位的丙氨酸，和/或第二位的苏氨酸，和/或第三位的色氨酸替换为精氨酸，将第六位的脯氨酸替换为谷氨酸，在第一位氨基酸之前引入赖氨酸；再通过首尾相连式环化得到a7r-透膜改造肿瘤靶向穿...
【专利技术属性】
技术研发人员：张杰，潘晓艳，卢闻，张晴晴，李彦宸，海平，郑永彪，
申请(专利权)人：西安交通大学，
类型：发明
国别省市：
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