【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物提取分离，具体涉及一种甘草查尔酮a的制备方法及其应用。
技术介绍
1、甘草查尔酮a(licochalcone a)是从甘草属植物中分离纯化的黄酮类化合物，分子式为c21h22o4，分子量为338.4，在常温下呈现橘黄色粉末状态，难溶于水，易溶于有机溶剂和碱性溶液。
2、甘草查尔酮a最早由日本学者saitoh和shibata在1975年新疆甘草中提取分离得到，并对其化学结构进行了鉴定证明，被视为g.inflata b at.的特异性成分，其分子结构具有较大的柔性。现代药理研究表明，甘草查尔酮a具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、抗菌以及免疫促进等活性，在护肤、食品和医药行业应用广泛。
3、由于甘草查尔酮a在甘草中的含量极低，因此要取得高纯度的甘草查尔酮a工艺极为复杂，成本昂贵，现如今市场上所售甘草查尔酮a只是含量不一的甘草查尔酮a粗品。目前，甘草查尔酮a主要是从新疆胀果甘草中提取，主要包括加热回流、浸泡、超声辅助和微波辅助等提取法，分离纯化的方法包括萃取、打孔吸附树脂洗脱、各种色谱、聚酰胺层析和硅胶柱层析等方法，或者几种分离方法联合使用。这些方法存在操作工艺复杂、设备要求高、溶剂消耗大、生成的废弃物多、周期长、成本高等缺点，不适合工业大生产，导致其产量无法满足市场需求。
4、本专利技术提供了一种甘草查尔酮a的新制备方法，此制备方法工艺稳定、操作简单、成品含量高，可实现规模化生产的特点。
技术实现思路
1、本专利技术旨在解决上述问题，提供了一
2、本专利技术的第一方面，提供了一种甘草查尔酮a的制备方法，包括如下步骤：
3、s1提取：称取干燥后的甘草渣，加入到5-15倍甘草渣重量的提取剂中，提取得到提取液，浓缩至浸膏状，回收提取剂，重复上述提取步骤2-4次，合并浸膏；
4、s2萃取：将s1步骤中得到的浸膏用2-6倍浸膏重量的水溶解，然后依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，得石油醚、乙酸乙酯萃取液，取乙酸乙酯萃取液，将萃取液浓缩至膏状，冷冻干燥得样品a；
5、s3层析：a；大孔树脂粗分：取乙酸乙酯部位，加2-4倍乙酸乙酯部位重量的15-25％乙醇溶解，湿法上样，进行大孔树脂分离，洗脱液75-85％乙醇，柱体积为5-7个柱体积，浓缩成膏状，冷冻干燥得样品b；b：硅胶柱分离：将a所得的干燥品加乙醇溶解，加入1.2-1.8倍的硅胶，搅拌均匀，干燥并研成粉末，干法上样，洗脱得馏分，浓缩，冷冻干燥，得样品c；
6、其中浸膏为提取物，石油醚萃取去掉低极性化合物，目标化合物属于中极性化合物，在乙酸乙酯部位。
7、s4析晶：样品c加入55-65％乙醇溶解，乙醇：样品＝4-8：1(重量比)，在45-55℃条件下溶解，以2-4℃/min降至0-5℃，在2-8℃条件下，放置，过滤得滤饼，干燥，得淡黄色粉末。
8、该制备方法提取率大于90％，经液相检测，纯度大于98％。
9、优选的，步骤s3层析中，a；大孔树脂粗分：取乙酸乙酯部位，加2-4倍乙酸乙酯部位重量的20％乙醇溶解，如有不溶物，过滤，取滤液；湿法上样，进行大孔树脂分离，洗脱液80％乙醇，柱体积为6个柱体积，浓缩成膏状，冷冻干燥得样品b；b：硅胶柱分离：将a所得的干燥品加乙醇溶解，加入1.5倍的200-300目硅胶，搅拌均匀，干燥并研成粉末，干法上样，洗脱得馏分，浓缩，冷冻干燥，得样品c。
10、更具体的，s4析晶：样品c加入60％乙醇溶解，乙醇：样品＝4-8：1(重量比)，在50℃条件下溶解，以2-4℃/min降至5℃，在2-8℃条件下，放置48h。
11、本专利技术技术方案的特点和进一步的改进在于：
12、进一步，在上述的s1步骤中，所述的提取剂为浓度为70-95％的乙醇溶液，优选浓度为80-95％的乙醇溶液。
13、且s1步骤中，提取的具体步骤可以为：在70-85℃的温度条件下回流提取1-4小时，得到提取液，此为回流法。且优选条件为：首先取干燥后的甘草渣，加入到8-12倍甘草渣重量的提取剂中，在70-85℃的温度条件下回流提取2小时，重复3次后，合并浸膏。为了保证溶解回流，提取更为充分，采用70-85℃的温度。样品为黄酮类化合物，单纯用水不能提取出来，用高比例溶剂可以充分的提取出所需物，同时可以剔除掉蛋白和多糖等物资，而乙醇相比其它有机溶剂，乙醇毒性更低。
14、s1步骤中的提取的具体步骤也可以为：在常温下浸泡48h，得到提取液，此为浸泡法，主要针对提取剂为乙醇的情况。
15、更进一步，上述方法的s3步骤中，大孔树脂柱的型号为ab-8、d-101、xad-16、hpd-100和hpd-400中的任一种，优选hpd-400或d-101，通过大孔树脂粗分，使样品富集；硅胶柱洗脱液为二氯甲烷-甲醇或者正己烷-丙酮，使用前者，二氯甲烷：甲醇(体积比)＝6：1，使用后者，正己烷：丙酮(体积比)＝4：1。
16、本专利技术的第二方面是提供前述的甘草查尔酮a的制备方法在提高甘草查尔酮a提取率和纯度中的应用。
17、与现有技术相比，本专利技术的有益效果包括：本专利技术提供了一种新的制备高纯度、高产率甘草查尔酮a的方法，该方法工艺稳定、操作简单、节能环保，所得产物含量高、收率高，可实现规模化生成。
18、现有技术中提取制备甘草查尔酮a会使用聚乙酰胺柱，由于甘草中其它成分结构中也含有羟基，不仅不能起到很好的分离效果，而且会有大量化合物被吸附在柱子上难以洗脱，收率低，同时损伤柱子(聚乙酰胺柱是可以多次使用的)，因此本专利技术不使用聚乙酰胺柱；本专利技术整个制备过程不使用一类试剂，在最后一步不使用二类试剂，大大减少了高毒性溶剂的使用，且收率高达90％以上。
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1.一种甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，该制备方法提取率大于90％，经液相检测，纯度大于98％。
3.根据权利要求1所述的甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，步骤S3层析中，a；大孔树脂粗分：取乙酸乙酯部位，加2-4倍乙酸乙酯部位重量的20％乙醇溶解，如有不溶物，过滤，取滤液；湿法上样，进行大孔树脂分离，洗脱液80％乙醇，柱体积为6个柱体积，浓缩成膏状，冷冻干燥得样品B；b：硅胶柱分离：将a所得的干燥品加乙醇溶解，加入1.5倍的200-300目硅胶，搅拌均匀，干燥并研成粉末，干法上样，洗脱得馏分，浓缩，冷冻干燥，得样品C。
4.根据权利要求1所述的甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，S4析晶：样品C加入60％乙醇溶解，乙醇：样品＝4-8：1(重量比)，在50℃条件下溶解，以2-4℃/min降至5℃，在2-8℃条件下，放置48h。
5.根据权利要求1所述的甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，S1步骤中，所述的提取剂为浓度为70-95％的乙醇溶液或浓度为80
6.根据权利要求1所述的甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，S1提取的具体步骤为：在70-85℃的温度条件下回流提取1-4小时，得到提取液；首先取干燥后的甘草渣，加入到8-12倍甘草渣重量的提取剂中，在70-85℃的温度条件下回流提取2小时，重复3次后，合并浸膏。
7.根据权利要求1所述的甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，S1提取的具体步骤包括：
8.根据权利要求1所述的甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，S3步骤中，大孔树脂柱的型号为AB-8、D-101、XAD-16、HPD-100和HPD-400中的任一种，优选HPD-400或D-101。
9.根据权利要求1所述的甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，S3步骤中，硅胶柱洗脱液为二氯甲烷-甲醇或者正己烷-丙酮，体积比二氯甲烷：甲醇＝6：1，体积比正己烷：丙酮＝4：1。
10.权利要求1-9任意一项所述的甘草查尔酮A的制备方法在提高甘草查尔酮A提取率和纯度中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种甘草查尔酮a的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的甘草查尔酮a的制备方法，其特征在于，该制备方法提取率大于90％，经液相检测，纯度大于98％。
3.根据权利要求1所述的甘草查尔酮a的制备方法，其特征在于，步骤s3层析中，a；大孔树脂粗分：取乙酸乙酯部位，加2-4倍乙酸乙酯部位重量的20％乙醇溶解，如有不溶物，过滤，取滤液；湿法上样，进行大孔树脂分离，洗脱液80％乙醇，柱体积为6个柱体积，浓缩成膏状，冷冻干燥得样品b；b：硅胶柱分离：将a所得的干燥品加乙醇溶解，加入1.5倍的200-300目硅胶，搅拌均匀，干燥并研成粉末，干法上样，洗脱得馏分，浓缩，冷冻干燥，得样品c。
4.根据权利要求1所述的甘草查尔酮a的制备方法，其特征在于，s4析晶：样品c加入60％乙醇溶解，乙醇：样品＝4-8：1(重量比)，在50℃条件下溶解，以2-4℃/min降至5℃，在2-8℃条件下，放置48h。
5.根据权利要求1所述的甘草查尔酮a的制备方法，其特征在于，s1步骤中，所述的提取剂...
【专利技术属性】
技术研发人员：季浩，汪洋，阚建伟，
申请(专利权)人：江苏天晟药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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