【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学，具体而言，涉及具有casrx活性的突变体及其应用。
技术介绍
1、2016年，科学家发现了可以靶向rna进行切割的crispr/cas13系统，该系统由单一的效应蛋白cas13和crispr rna(crrna)组装形成一个由crrna引导的rna靶向效应复合物。目前，cas13家族共鉴定出四种亚型，包括cas13a(又名c2c2)、cas13b、cas13c和cas13d。其中，crispr/cas13d(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/crispr-associated protein 13d)核酸酶在2018年有研究发现cas13d平均大小约为930aa，是目前发现的哺乳动物细胞中相对较小的ⅱ类crispr效应因子(比其家族成员cas13a-c小20％，比cas9小33％)，使它更容易包装到容量有限的应用载体如aav载体中，cas13d对rna靶点的切割不依赖于pfs序列(protospacer flanking sequ...
【技术保护点】
1.具有CasRx活性的突变体，其与SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列具体具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％、至少99.9％或100％的序列同一性，并且参照SEQ ID NO：1的氨基酸位置变化，具有位于下列位置处中的一个或多个突变：
2.根据权利要求1所述的突变体，其具有位于下列位置处中的一个或两个突变：
3.根据权利要求2所述的突变体，其具有下述突变中的一个或两个：
4.根据权利要求1所述的突变体，其具有下述位置处的突变：
5.根据权...
【技术特征摘要】
1.具有casrx活性的突变体，其与seq id no：1所示的氨基酸序列具体具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％、至少99.9％或100％的序列同一性，并且参照seq id no：1的氨基酸位置变化，具有位于下列位置处中的一个或多个突变：
2.根据权利要求1所述的突变体，其具有位于下列位置处中的一个或两个突变：
3.根据权利要求2所述的突变体，其具有下述突变中的一个或两个：
4.根据权利要求1所述的突变体，其具有下述位置处的突变：
5.根据权利要求4所述的突变体，其具有下述突变n641a、t486a和r648a，优选其为seqid no：2所示。
6.根据权利要求1～5任一项所述的突变体，其具有显著提高的区分单碱基突变相关的突变型和野生型转录本的能力。
7.根据权利要求6任一项所述的突变体，其与向导rna分子(grna)所组成的复合物与靶rna的结合不稳定性提高。
8.根据权利要求6所述的突变体，其具有显著减少的核酸识别结构域与核酸酶结构域之间的负相关性；其中所述核酸识别结构域包括helical1结构域，所述核酸酶结构域包括helical2和hepn结构域。
9.分离的多核苷酸，其编码权利要求1～8任一项所述的突变体。
10.权利要求9所述的多核苷酸，其包含调控元件，且所述调控元件与编码所述突变体的部分可操作地关联。
11.权利要求9或权利要求10所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸经密码子优化以在生物体中表达。
12.权利要求11所述的多核苷酸，其中所述生物体是动物、植物、真菌、古细菌或细菌。
13.一种分子系统，其为复合物或组合物，包含(a)权利要求1～8任一项所述的突变体和(b)向导rna分子(grna)的集合。
14.编码权利要求13所述的分子系统的核酸构建体。
15.载体，其包含权利要求9～12任一项所述的多核苷酸，或权利要求14所述的核酸构建体。
16.根据权利要求15所述的载体，其是病毒载体。
17.根据权利要求16所述的载体，其是腺病毒载体、腺相关病毒(aav)载体、慢病毒载体或逆转录病毒载体。
18.根据权利要求17所述的载体，所述aav载体选自由以下组成的组：aav 1型、aav 2型、aav 3型、aav 4型、aav 5型、aav 6...
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