【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开提供了用于处理细胞外囊泡的方法，其中在与荧光染色染料或抗体接触之前，所述细胞外囊泡未被纯化。通过利用离心过滤器，在分析所述细胞外囊泡的一种或多种特性之前，可以容易地去除过量染色染料或抗体。所述方法提供了快速且简单的处理和分析，同时维持细胞外囊泡的高浓度。
技术介绍
1、使用外泌体或细胞外囊泡用于各种癌症和其它病状的应用和治疗的研究在继续发展。这些50-150nm细胞源性囊泡递送包含蛋白质、脂质和核酸(包含sirna和反义核酸)的各种货物的能力引起了对利用其递送至各种不同细胞类型的关注。
2、为了从正在生成的细胞群体和相关联碎片中分离并分析细胞外囊泡，已经开发了各种方法。然而，这些传统方法通常会导致细胞外囊泡的损失或显著稀释样品，从而导致分析不一致或受到影响。
3、需要简单、快速的方法来提供细胞外囊泡分离和分析，而不需要不想要的稀释。本专利技术提供了此类方法。
技术实现思路
1、在一些实施例中，本文提供了一种用于处理细胞外囊泡的方法，所述方法包括：浓缩生物流体中...
【技术保护点】
1.一种用于处理细胞外囊泡的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述浓缩包括使所述生物流体穿过切向流过滤器。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述切向流过滤器的分子量截止值为约100kD至约500kD。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞外囊泡与所述荧光染色染料6-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE)接触。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞外囊泡与抗CD9抗体、抗CD63抗体、抗CD81抗体和/或抗IgG1抗体接触。
6.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述细胞...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于处理细胞外囊泡的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述浓缩包括使所述生物流体穿过切向流过滤器。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述切向流过滤器的分子量截止值为约100kd至约500kd。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞外囊泡与所述荧光染色染料6-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(cfse)接触。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞外囊泡与抗cd9抗体、抗cd63抗体、抗cd81抗体和/或抗igg1抗体接触。
6.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述细胞外囊泡与所述荧光染色染料接触，并在约30℃-40℃的温度下温育至少1小时。
7.根据权利要求1至3或权利要求5所述的方法，其中所述细胞外囊泡与所述抗体接触，并在约30℃-40℃的温度下温育至少30分钟。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述细胞外囊泡由人胚胎肾(hek-293)细胞、人高加索结肠腺癌ht-29细胞或间充质干细胞(msc)产生。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述生物流体中的所述细胞外囊泡的浓度是使用用于纳米颗粒分析的流式细胞仪来确定的。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中在c中的所述接触之前，所述细胞外囊泡的浓度被确定为至少1×1010个细胞外囊泡/ml。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述生物流体是包括hek-293、ht-29或msc细胞生长培养基的条件培养基。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述所接触的细胞外囊泡在至少10,000xg的离心力下穿过所述离心过滤器持续至少10分钟。
13.一种用于分析细胞外囊泡的方法，所述方法包括：
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述细胞外囊泡与所述荧光染色染料6-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(cfse)接触。
15.根据权利要求13所述的方法，其中所述细胞外囊泡与抗cd9抗体、抗cd63抗体、抗cd81抗体和/或抗igg1抗体接触。
16.根据权利要求13或权利要求14所述的方法，其中所述细胞外囊泡与所述荧光染色染料接触，并在约30℃-40℃的温度下温育至少1小时。
17.根据权利要求13或权利要求15所述的方法，其中所述细胞外囊泡与所述抗体接触，并在约30℃-40℃的温度下温育至少30分钟。
18.根据权利要求13至17中任一项所述的方法，其中所述细胞外囊泡由人胚胎肾(hek-293)细胞、人高加索结肠腺癌ht-29细胞或间充质干细胞(msc)产生。
19.根据权利要求13至18中任一项所述的方法，其中所述条件培养基中的所述细胞外囊泡的浓度是使用用于纳米颗粒分析的流式细胞仪来确定的。
20.根据权利要求13至19中任一项所述的方法，其中在c中的所述接触之前，所述细胞外囊泡的浓度被确定为至少1×1010个细胞外囊泡/ml。
21.根据权利要求13至20中任一项所述的方法，其中所述条件培养基包括hek-293、ht-29或msc细胞生长培养基，并且所述细胞外囊泡是在b中使用分子量截止值为300kd的切向流过滤器来浓缩的。
22.根据权利要求13至21中任一项所述的方法，其中所述所接触的细胞外囊泡在至少10,000xg的离心力下穿过所述离心过滤器持续至少10分钟。
23.根据权利要求13至22中任一项所述的方法，其中分析所回收的、经标记的细胞外囊泡群体以确定标记效率、细胞外囊泡数量、细胞外囊泡浓度和细胞外囊泡大小中的一项或多项。
24.一种用于处理细胞外囊泡的方法，所述方法包括：
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述细胞外囊泡与抗cd9抗体、抗cd63抗体、抗cd81抗体和/或抗igg1抗体接触。
26.根据权利要求24或权利要求25所述的方法，其中所述细胞外囊泡与1×108至1×109个抗体颗粒接触。
27.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：D·佐科，M·克里斯库利，I·帕萨拉夸，
申请(专利权)人：意大利胶囊有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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