一种用化学发光法体外检测血液乳酸的方法技术

一种用化学发光法体外检测血液乳酸的方法，其特征在于：利用ＬＤ催化Ｌ－乳酸和ＮＡＤ↑［＋］生成丙酮酸和ＮＡＤＨ，丙酮酸与ＡＤＰ在丙酮酸激酶（ＰＫ）催化下产生ＡＴＰ，ＡＴＰ与甘油，在ＧＫ催化下生成甘油－３－磷酸及ＡＤＰ，而甘油－３－磷酸被ＧＰＯ作用得到Ｈ↓［２］Ｏ↓［２］，Ｈ↓［２］Ｏ↓［２］经ＨＰＲ催化使鲁米诺发光。光信号的大小与乳酸的浓度呈正相关，即乳酸浓度越大发出的光信号越强。记录这种光信号即可推测乳酸的浓度。用已知浓度的乳酸测出的光信号，作出剂量－反应曲线，未知样品的乳酸含量可从该曲线推算出来。本发明专利技术用化学发光物代替显色物，达到更灵敏、更稳定、范围宽、更安全的目的；可制备相应的定量测定全血、血浆、脑脊液、尿液、胃液等体液中乳酸的商品试剂盒。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种医用试剂检测方法。特别是一种用化学发光法体外检测血液乳酸 的方法。
技术介绍
利用现代生物技术所开发的超微量测定方法，极大的推动了生物和医学各领域的 各项临床和科研工作的快速发展，为人类的科学事业和社会进步作出了非凡的贡献。上世纪七十年代由Arakawa首先发表了应用鲁米诺——过氧化物酶的化学发光 反应进行酶免分析的技术，这一技术由于灵敏度高(可达10-ismol)，快速(可在20 分钟内出测定结果)、简便(可实现完全自动化)，有效期长(可达一年以上)，利于 环保(无放射性和致畸物质)而受到普遍欢迎，是目前发展最迅速的检测技术。化学发光技术在免疫分析中已得到相当普及的程度，已发展为能检测多种生物活 性物质的常规监床检测方法，从免疫反应方式分，该方法有两种基本类型，即化学发 光免疫分析(CLIA)和免疫化学发光分析(ICMA);从发光方式上看， 一是将发光物 质直接标记到抗体或抗原上，免疫反应后，在起动剂的作用下而发光，另一种是用酶 标记抗体或抗原，免疫反应后，加入化学发光底物，在酶催作用下而发光。该方法虽有突出的优点，但目前仅限于免疫分析，而在生化分析中还是空白，本 专利技术就是要把化学发光这一高级技术推广到生化分析等领域。乳酸在下列情况活性可增高组织严重缺氧、肺功能不全、休克、心失代偿、血液病等；在肝脏灌流量降低的病例，亦会出现乳酸酸中毒。现在普遍使用的测定血液中乳酸的方法为比色法，该法是利用LD催化L-乳酸和 NAD+生成丙酮酸和NADH，加入硫酸肼捕获丙酮酸使反应完成，生成的NADH与乳酸等 摩尔。测定NADH来计算乳酸的含量。该法的不足之处主要有31. 线性范围窄。由于检测光吸收，其分辨率不像化学发光那么敏感，线性范围不 能完全满足临床检测的需要，对高浓度的样品需要经稀释后测定，带来一定不便。2. 灵敏度不如化学发光。化学发光是测定光信号，灵敏度要比测光吸收高出许多
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种灵敏、宽范围、成本低便于普及而又安全的体外检测 血液乳酸的方法。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的 一种用化学发光法体外检测血液乳酸 的方法，其特征在于用乳酸氧化酶使乳酸变成丙酮酸，同时产生过氧化氢，后者在 服P催化下使鲁米诺发光，光信号的大小与乳酸含量成正比，记录这种光信号推测出 乳酸的浓度。本专利技术的目的还可以通过以下技术方案实现利用LD催化L-乳酸和NAD+生成丙酮酸和NADH，丙酮酸与ADP在丙酮酸激酶(PK)催化下产生ATP， ATP与甘油，在GK 催化下生成甘油-3-磷酸及ADP，而甘油-3-磷酸被GP0作用得到H202， HA经HPR催化 使鲁米诺发光。光信号的大小与乳酸的浓度呈正相关，即乳酸浓度越大发出的光信号 越强。记录这种光信号即可推测乳酸的浓度。用已知浓度的乳酸测出的光信号，作出 剂量-反应曲线，未知样品的乳酸含量可从该曲线推算出来。本专利技术用化学发光物代替显色物，达到更灵敏、更稳定、范围宽、更安全的目的。 用本专利技术方法可以制备相应的定量测定全血、血浆、脑脊液、尿液、胃液等体液中乳 酸的商品试剂盒。具体来讲，本专利技术与传统的方法相比有如下优点l灵敏度更高。传统方法是检测颜色深浅，而化学发光是测光信号，可一个一个 光子计数，所测的最低限更小，因而灵敏度更高。2. 线性范围宽。测颜色的深浅的分辨率比光子计数的精度要低得多，化学发光的 检测范围高达105。3. 安全适用。化学发光物如鲁米诺等很安全，整个检测过程无有害物出现，无论 是检测或处理废物都很安全，有利于环境保护。4. 便于普及。本专利技术所制备的试剂盒，可用于全自动测量，也可用于手工或半自 动测量，适宜大、中、小各层次的医疗和研究机构使用。5.巨大的社会效益。用化学发光法测定生化指标或免疫物质，可同用一台化学发 光仪，不再需要进口昂贵的生化仪，节省大量资金，不只降低了成本，对医疗机构、 患者及社会均大有益处。具体实施例方式下面举例说明本专利技术的实施。 方案一反应原理乳酸+02+仏0 (L0)—丙酮酸+HA HA+鲁米诺(HRP)—发光 1.试剂-1. l.乳酸标准单一或系列浓度； 1.2.底物液含HRP和L0。2. 测定程序，按下表进行，加样单位为W。标准样品标准20样品20底物液150150混匀，室温或30 37。C温育后测量RLU方案二反应原理L-乳酸+NAD+ (LD) —NADH+丙酮酸+!T 丙酮酸+ADP (PK) —ATP+。。。。 甘油+ATP (GK)—甘油-3-磷酸+ADP 甘油-3-磷酸+02 (GPO)—磷酸二羟丙酮+11202 HA+鲁米诺(HRP)—发光1. 试剂1.1. 乳酸标准单一或系列浓度；1.2. 混合酶液，含ADP和甘油；1.3. 发光底物液。2. 测定程序，按下表进行，加样单位为W。标准样品5<table>table see original document page 6</column></row><table>混匀，室温或30 37t:温育后测量RLU3. 用适当方法处理作出剂量-反应曲线，根据样品的RLU值从该曲线求出其乳酸 的浓度。或直接由公式求出-乳酸浓度=(样品RLU/标准RLU) X标准浓度4. 也可用双试剂两步法测定。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用化学发光法体外检测血液乳酸的方法，其特征在于：用乳酸氧化酶使乳酸变成丙酮酸，同时产生过氧化氢，后者在ＨＲＰ催化下使鲁米诺发光，光信号的大小与乳酸含量成正比，记录这种光信号推测出乳酸的浓度。

【技术特征摘要】
1、一种用化学发光法体外检测血液乳酸的方法，其特征在于用乳酸氧化酶使乳酸变成丙酮酸，同时产生过氧化氢，后者在HRP催化下使鲁米诺发光，光信号的大小与乳酸含量成正比，记录这种光信号推测出乳酸的浓度。2、 一种用化学发光法体外检测血液乳酸的方法，其特征在于利用U)催化L-乳酸和NAD+生成丙酮酸和NADH，丙酮酸与ADP在丙酮酸激酶催化...

【专利技术属性】
技术研发人员：王京，
申请(专利权)人：福建省洪诚生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：35[中国|福建]