【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于检测，尤其涉及用于检测欧洲樱桃绕实蝇的引物及其检测方法。
技术介绍
1、欧洲樱桃绕实蝇(rhagoletiscerasi)，也称作欧洲樱桃实蝇、樱桃绕实蝇，属于双翅目实蝇科绕实蝇属。其成虫具有一定的飞行能力，可进行近距离传播。成虫、幼虫、卵会随寄主果实和运输工具等进行远距离传播。目前的检疫方法通常根据欧洲樱桃绕实蝇的为害状，在检疫现场发现疑似欧洲樱桃绕实蝇发生的果实，取得卵、幼虫、蛹或成虫等虫样，卵、幼虫或蛹饲养获得成虫，解剖制作标本，用显微镜观察，根据成虫的形态特征对其进行种类鉴定。也可利用欧洲樱桃绕实蝇特异性扩增引物的常规pcr检测方法和实时荧光pcr检测方法，对欧洲樱桃绕实蝇进行种类判定。现有的检测方法需依靠专业的鉴定经验技术及精密的仪器设备，而检疫现场难以实现。
2、环介导等温扩增法(loop-mediated isothermal amplification,lamp)，是一种新型的核酸扩增方法，其特点是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物，在链置换dna聚合酶的作用下，60-65℃恒温扩增，15-60分钟左右即可实现109至1010倍的核酸扩增，具有操作简单、特异性强、产物易检测等特点。引物的选择对环介导等温扩增法的实验结果具有重要影响。若引物选择不当，将导致无法正确扩增，从而影响检测结果的判断。
技术实现思路
1、鉴于现有技术所存在的问题，本专利技术提供用于检测欧洲樱桃绕实蝇的引物及其检测方法。本专利技术可以实现对欧洲樱桃绕实蝇的检测，具有简
2、本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：
3、本专利技术提供用于检测欧洲樱桃绕实蝇的引物，包括f3_p3-2、b3_p3-2、fip_p3-2和bip_p3-2；f3_p3-2包括seq id no:3所示的核苷酸序列；b3_p3-2包括seq id no:4所示的核苷酸序列；fip_p3-2包括seq id no:5所示的核苷酸序列；bip_p3-2包括seq id no:6所示的核苷酸序列。
4、利用本专利技术提供的引物可以实现对欧洲樱桃绕实蝇的检测，具有简便快速、特异性好、稳定性好、灵敏度高等优点。
5、本专利技术提供一种用于检测欧洲樱桃绕实蝇的试剂盒，该试剂盒包括上述引物。
6、利用本专利技术提供的试剂盒可以实现对欧洲樱桃绕实蝇的检测，具有简便快速、特异性好、稳定性好、灵敏度高等优点。
7、所述试剂盒还可以包括：阴性对照、阳性对照、lamp恒温扩增可视染料法用试剂、lamp荧光方法用试剂中的一种或几种。
8、本专利技术提供一种检测欧洲樱桃绕实蝇的方法，包括以下步骤：采用上述引物和/或上述试剂盒进行检测。
9、本专利技术提供的方法可以实现对欧洲樱桃绕实蝇的检测，具有简便快速、特异性好、稳定性好、灵敏度高等优点。
10、进一步，可以采用lamp恒温扩增可视染料法进行检测；lamp恒温扩增可视染料法反应体系包括上述引物。
11、反应温度可以为58-64℃；优选地，为62℃。反应时间可以为30-45min；优选地，40-45min；最优地，为40min。
12、通过对温度、时间等条件进行优化可以进一步提高检测效果。
13、进一步，可以采用lamp荧光方法进行扩增，lamp荧光方法扩增体系包括上述引物。
14、lamp荧光方法的反应程序中的循环数为60个循环，反应程序可以设置为：65℃，15s；65℃，60s，60个循环；95℃，120s；25℃，120s。
15、采用上述条件有利于保证检测信号正常。
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1.用于检测欧洲樱桃绕实蝇的引物，其特征在于，包括F3_P3-2、B3_P3-2、FIP_P3-2和BIP_P3-2；F3_P3-2包括SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列；B3_P3-2包括SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列；FIP_P3-2包括SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列；BIP_P3-2包括SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列。
2.一种用于检测欧洲樱桃绕实蝇的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述引物。
3.根据权利要求2所述用于检测欧洲樱桃绕实蝇的试剂盒，其特征在于，还包括阴性对照、阳性对照、LAMP恒温扩增可视染料法用试剂、LAMP荧光方法用试剂中的一种或几种。
4.一种检测欧洲樱桃绕实蝇的方法，其特征在于，包括以下步骤：采用权利要求1所述的引物和/或权利要求2所述试剂盒进行检测。
5.根据权利要求4所述检测欧洲樱桃绕实蝇的方法，其特征在于，采用LAMP恒温扩增可视染料法进行检测；LAMP恒温扩增可视染料法反应体系包括上述引物。
6.根据权利要求5所述检测欧洲樱桃绕实蝇的方法，其特征在于，L
7.根据权利要求5或6所述检测欧洲樱桃绕实蝇的方法，其特征在于，LAMP恒温扩增可视染料法的反应时间为30-45min；优选地，40-45min；最优地，为40min。
8.根据权利要求4所述检测欧洲樱桃绕实蝇的方法，其特征在于，采用LAMP荧光方法进行扩增，LAMP荧光方法扩增体系包括上述引物。
9.根据权利要求8所述检测欧洲樱桃绕实蝇的方法，其特征在于，LAMP荧光方法的反应程序中的循环数为60个循环。
10.根据权利要求8或9所述检测欧洲樱桃绕实蝇的方法，其特征在于，LAMP荧光方法的反应程序设置为：65℃，15s；65℃，60s，60个循环；95℃，120s；25℃，120s。
...【技术特征摘要】
1.用于检测欧洲樱桃绕实蝇的引物，其特征在于，包括f3_p3-2、b3_p3-2、fip_p3-2和bip_p3-2；f3_p3-2包括seq id no:3所示的核苷酸序列；b3_p3-2包括seq id no:4所示的核苷酸序列；fip_p3-2包括seq id no:5所示的核苷酸序列；bip_p3-2包括seq id no:6所示的核苷酸序列。
2.一种用于检测欧洲樱桃绕实蝇的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述引物。
3.根据权利要求2所述用于检测欧洲樱桃绕实蝇的试剂盒，其特征在于，还包括阴性对照、阳性对照、lamp恒温扩增可视染料法用试剂、lamp荧光方法用试剂中的一种或几种。
4.一种检测欧洲樱桃绕实蝇的方法，其特征在于，包括以下步骤：采用权利要求1所述的引物和/或权利要求2所述试剂盒进行检测。
5.根据权利要求4所述检测欧洲樱桃绕实蝇的方法，其特征在于，采用lamp恒温扩增可...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘玮琦，赵畅，李兰，陈超，丛日赫，杨东来，王旭，
申请(专利权)人：满洲里海关技术中心，
类型：发明
国别省市：
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