【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种细胞分离纯化，具体涉及不同纯度小细胞的纯化方法，即从小细胞形成体系中分离出小细胞细胞群体的方法。
技术介绍
1、大肠杆菌细胞正常分裂的结果是分裂为两个大小相等的子细胞，这是由细胞中间的z环负责调控的。小细胞(minicell)是纳米级的无染色体细胞，一般由杆状细菌母细胞体中的异常细胞分裂而形成。minicell包含除dna外的亲本细胞所有分子成分，包括膜、核糖体、rna、蛋白质以及质粒等。与正常细胞相比，minicell在无细胞核的环境中仍然保持细胞代谢功能，表现出优越的稳定性和特殊的耐受性。
2、为了提高minicell的应用范围，需要有效分离无核minicell与有核母体细胞，目前已提出多种纯化minicell的方法，主要包括差速离心法、多密度蔗糖梯度离心法以及多步过滤法等。然而，这些方法均存在一定的局限性，例如回收率低，成本增加等。虽然不同的纯化方法可以获得较纯的minicell，但要完全去除母体细胞仍具有一定的难度。
3、基于此，我们根据不同的研究需求开发了不同的纯化纯度的minicel
【技术保护点】
1.小细胞的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：将大肠杆菌菌液通过差速离心法离心得到沉淀，将所述的沉淀经PBS缓冲液清洗后再经混合纤维酯膜过滤，即得纯化的小细胞。
2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述的大肠杆菌菌液按照如下方法制备得到，将大肠杆菌种子液以1％～2％v/v的接种量接种至降磷TB培养基中，28～37℃培养8～15h即得；所述的降磷TB培养基，其配方为：蛋白胨10～15g/L、酵母粉20～26g/L、十二水合磷酸氢二钠8～10g/L、磷酸二氢钾1～3g/L和甘油2～5mL/L。
3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在...
【技术特征摘要】
1.小细胞的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：将大肠杆菌菌液通过差速离心法离心得到沉淀，将所述的沉淀经pbs缓冲液清洗后再经混合纤维酯膜过滤，即得纯化的小细胞。
2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述的大肠杆菌菌液按照如下方法制备得到，将大肠杆菌种子液以1％～2％v/v的接种量接种至降磷tb培养基中，28～37℃培养8～15h即得；所述的降磷tb培养基，其配方为：蛋白胨10～15g/l、酵母粉20～26g/l、十二水合磷酸氢二钠8～10g/l、磷酸二氢钾1～3g/l和甘油2～5ml/l。
3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述的差速离心法，将所述的大肠杆菌菌液先经低速离心，得到上清液，再将上清液高速离心，得到沉淀。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的低速离心，离心力为400×g～1000×g，离心时间为1～10min，优选为800×g，5min；所述的高速离心，离心力为10000×g～13000×g，离心时间为10～20min，优...
【专利技术属性】
技术研发人员：柳东，刘书利，应汉杰，张迪，王振宇，熊文韬，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：
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