【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学，涉及靶向抗原呈递细胞的脂质组合物及其应用。
技术介绍
1、通过编码mrna在抗原呈递细胞(apc)中表达肿瘤抗原，以诱导针对肿瘤的t细胞应答，在肿瘤的免疫治疗中具有巨大的潜力。由于带负电荷的mrna分子不能直接进入抗原呈递细胞，而现有的大部分递送技术通常不可避免的会将mrna大量递送至肝脏和肺，对于免疫治疗来说，mrna在肺或肝的免疫应答通常是有害的，因此，决定mrna免疫治疗成功的关键问题是将编码特定抗原的mrna高选择性的递送至抗原呈递细胞(apc)。
2、采用脂质组合物包裹mrna制成脂质-rna组合物的方式是mrna免疫治疗中较为常用的将mrna导入细胞中的方式之一。目前研究人员开发出的用于脂质-rna组合物的脂质体系主要包括：
3、1、脂质纳米颗粒（lipid nanoparticle，lnp）由一个(单层)或多个(多层)磷脂双层组成的球形囊泡，lnp递送技术就是把mrna包裹在由阳离子脂质（例如，dlin-mc3-dma、c12-200）、中性脂质（例如，dspc、dope）、结构性脂质（例如，胆固醇）和聚合物共轭脂质（例如，dmg-peg2000）四种成分组成的纳米脂质体颗粒里面。其中，阳离子脂质包括永久阳离子脂质（包含季铵基团）和可电离阳离子脂质（包含伯胺基团、仲胺基团或叔胺基团）；由于采用永久性阳离子脂质导致制备得到的lnp对细胞的毒性增强，进而采用可电离阳离子脂质进行替代。
4、在传统四组分肝靶向脂质纳米颗粒中添加第5种脂质（选择性器官靶向sort
5、2、脂质多聚复合物(lipopolyplex，lpp)是一种以聚合物包载mrna为内核、磷脂包裹为外壳的双层结构，带负电荷的mrna凝聚在带正电荷的聚合物内，它们一起形成直径为几纳米到几百纳米的紧密多聚复合物“核”结构。lpp的双层纳米结构和传统的lnp相比具有更好的包载、保护mrna的效果，并能够随聚合物的降解逐步释放mrna分子。并且，其优异的树突状细胞靶向性可以更好地通过抗原递呈激活t细胞的免疫反应，从而达到理想的免疫治疗效果。
6、例如，cn115845040a中记载了由囊封在1,2-二油酰-sn-甘油-3-乙基磷酸胆碱/1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺/1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-n-[氨基(聚乙二醇)-2000(永久阳离子脂质edopc/中性脂质dope/辅助脂质dspe-peg)脂质壳中的聚(β-氨基酯)聚合物mrna核组成的脂质多聚复合物mrna疫苗。在上述壳/核-mrna疫苗中，由亲水性磷脂双层“壳”囊封该多聚复合物核，所述壳既增强树突状细胞的摄取，又保护内核内的mrna分子不被细胞的核酸酶降解。并且，其中还记载了一条增强树突状细胞摄取疫苗粒子的有效途径：在mrna疫苗在脂质壳的表面上缀合亲和成分(例如，糖部分例如甘露糖、结合蛋白或对一种或多种dc表达表位具有特异性的抗体)进行“官能化”，增强疫苗粒子与所述疫苗核/壳复合物靶向的抗原呈递细胞(例如树突状细胞、巨噬细胞和b细胞)之间的相互作用和/或增加它们之间的结合。
7、3、脂质体复合物（lipoplex，lpx）是biontech开发的由阳离子脂质和中性辅助脂质生成的复合物递送载体，mrna分子嵌入于双层脂质之间。例如，cn 109331176 a公开了可由永久阳离子(带正电的)脂质体和阴离子(带负电的)核酸形成，还可以加入中性脂质作为辅助脂质。通过优化rna-lipoplexes (rna-lpx)中脂质和rna的比例，将制剂组合物的净电荷调整为中性或负电荷，静脉注射后可以精准地靶向树突状细胞（dendritic cells，dc细胞），而不需要对纳米颗粒进行靶向性的改造。
8、在最简单的情况下，脂质体复合物通过某种混合方案使核酸与脂质体混合来自发形成，但是也可应用多种其他方案。带正电的脂质体与带负电的核酸之间的静电相互作用是形成脂质体复合物的驱动力。除了脂质组分以外，阳离子部分和阴离子部分之间的电荷比也对有效的缩合和转染起重要作用。一般来说，脂质体复合物的过量正电荷被认为是有效转染所必需的(templeton，n .s .等，(1997)nature biotechnology15(7)：647-652；zhdanov，r .i .等，(2002)bioelectrochemistry58(1)：53-64；templeton，n .s .(2003)current medicinal chemistry10(14)：1279-1287)。大多数天然膜带负电，带正电的脂质体复合物与带负电的生物膜之间的静电相互吸引作用可能在细胞结合和脂质体复合物摄取方面起作用；反之，如果具有较低的过量正电荷，则转染效率大幅下降或几乎为零。但是，基于已报道的带正电的脂质体和脂质体复合物具有较高的细胞毒性，因此作为药品应用也存在问题。
9、已证实，上述脂质体复合物能够在多种器官中进行转染，其在具体器官的表达分布取决于制剂和施用参数(脂质组成、尺寸、施用途径)等多重参数。迄今为止，还不能充分实现在指定的靶器官或细胞部分中进行选择性表达同时避免在非靶器官中表达。已经报道了使用萤光素酶dna或rna作为报道基因(reporter)，在肺、肝、脾、肾和心脏等器官中进行的转染。但是，避免靶向肺和肝难度系数较大；因为，在许多情况下，靶向肺和肝占主导。肺具有非常大的表面，并且它是经静脉注射(i.v.)的化合物在施用后第一个通过的器官。肝是脂质体和具有亲脂性化合物(如存在于脂质体复合物中的脂质)制剂的典型靶器官。对于基于rna的免疫治疗，由于存在对肺或肝的免疫应答的风险，所以靶向肺或肝可能是有害的。因此，对于这样的治疗，需要仅对dc(例如脾中的)具有高选择性的制剂。
10、某些配体被认为可以改进靶向选择性。例如，在脂质上进行缀合修饰（包括甘露糖等）可以显著增加对巨噬细胞的靶向性，但是脂质的缀合修饰需要考虑到血清的相互作用以及rna在血清中的降解，这样的组分使制剂更加复杂，从而使得实际的药物开发更加困难。
11、此外，还发现将rna与阳离子脂质体孵育过程中通常观察到大聚集物的形成，该聚集物的形成导致粒径显著增大，并且稳定性减本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种脂质组合物，其包含：
2.根据权利要求1所述的脂质组合物，其中，所述永久阴离子脂质中包含磷酸根基团；
3.根据权利要求1所述的脂质组合物，其中，所述永久阴离子脂质选自以下任意一种或多种：
4.根据权利要求1-3中任意一项所述的脂质组合物，其中，所述脂质组合物包含：
5.脂质组合物在提高对靶器官中的抗原呈递细胞的靶向性中的应用，该脂质组合物包含：
6.一种组合物，其包含：
7.根据权利要求6所述的组合物，其中，所述治疗剂和/或预防剂为能够编码一种或多种抗原的核酸分子。
8.根据权利要求6或7所述的组合物，其中，所述抗原为疾病相关抗原，或者所述核酸分子或抗原能够引发针对疾病相关抗原或表达疾病相关抗原之细胞的免疫应答。
9.根据权利要求6所述的组合物，其中，所述靶器官选自以下中任意一种或多种：脾、肝和肺。
10.根据权利要求9所述的组合物，其中，所述靶器官为脾。
11.根据权利要求6所述的组合物，其中，所述抗原呈递细胞包括以下任意一种或多种：树突状细胞、巨噬细
12.根据权利要求6所述的组合物，其中，所述治疗剂和/或预防剂与脂质组合物的用量使得所述组合物中的净正电荷与负电荷的电荷比为1:2至1:5。
13.根据权利要求6所述的组合物，其中，所述脂质组合物包含：
14.根据权利要求12或13所述的组合物，其中，所述组合物中的净正电荷与负电荷的电荷比为1:2；
15.根据权利要求6或7所述的组合物，其中，所述核酸分子是编码一种或多种抗原的RNA。
16.根据权利要求6所述的组合物，其中，所述组合物还包含至少一种辅助成分或佐剂；
17.一种制备用于将治疗剂和/或预防剂递送至靶器官中的抗原呈递细胞的组合物的方法，该方法包括：
18.根据权利要求17所述的方法，其中，步骤（a）中，所述有机溶剂为醇溶剂；
19.根据权利要求17或18所述的方法，其中，步骤（a）中，所述有机溶剂包括碳原子数1-4的醇；
20.根据权利要求17所述的方法，其中，所述永久阴离子脂质中包含磷酸根基团；
21.根据权利要求20所述的方法，其中，所述永久阴离子脂质选自以下任意一种或多种：
22.根据权利要求17所述的方法，其中，步骤（c）中，脂质混合液与治疗剂和/或预防剂的用量使得得到的组合物中的净正电荷与负电荷的电荷比为1:2至1:5。
23.权利要求1-4中任意一项所述的脂质组合物、权利要求6-16中任意一项所述的组合物，或者，根据权利要求17-22中任意一项所述的方法制备得到的组合物在制备能够诱发细胞的免疫应答的药物中的用途。
24.权利要求1-4中任意一项所述的脂质组合物、权利要求6-16中任意一项所述的组合物，或者，根据权利要求17-22中任意一项所述的方法制备得到的组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防、诊断、治疗或改善哺乳动物受试者中疾病、病症、异常病况或功能障碍。
25.根据权利要求24所述的用途，其中，所述疾病、病症、异常病况或功能障碍选自以下中的任意一种或多种：感染性疾病、癌症、增生性疾病、遗传性疾病、自体免疫性疾病、神经退化性疾病、心血管和肾血管疾病、代谢性疾病。
26.根据权利要求24所述的用途，其中，所述哺乳动物受试者选自人类、非人灵长类动物、伴侣动物、外来物种、家畜动物和供食用动物中的一种或多种。
...【技术特征摘要】
1.一种脂质组合物，其包含：
2.根据权利要求1所述的脂质组合物，其中，所述永久阴离子脂质中包含磷酸根基团；
3.根据权利要求1所述的脂质组合物，其中，所述永久阴离子脂质选自以下任意一种或多种：
4.根据权利要求1-3中任意一项所述的脂质组合物，其中，所述脂质组合物包含：
5.脂质组合物在提高对靶器官中的抗原呈递细胞的靶向性中的应用，该脂质组合物包含：
6.一种组合物，其包含：
7.根据权利要求6所述的组合物，其中，所述治疗剂和/或预防剂为能够编码一种或多种抗原的核酸分子。
8.根据权利要求6或7所述的组合物，其中，所述抗原为疾病相关抗原，或者所述核酸分子或抗原能够引发针对疾病相关抗原或表达疾病相关抗原之细胞的免疫应答。
9.根据权利要求6所述的组合物，其中，所述靶器官选自以下中任意一种或多种：脾、肝和肺。
10.根据权利要求9所述的组合物，其中，所述靶器官为脾。
11.根据权利要求6所述的组合物，其中，所述抗原呈递细胞包括以下任意一种或多种：树突状细胞、巨噬细胞和b细胞。
12.根据权利要求6所述的组合物，其中，所述治疗剂和/或预防剂与脂质组合物的用量使得所述组合物中的净正电荷与负电荷的电荷比为1:2至1:5。
13.根据权利要求6所述的组合物，其中，所述脂质组合物包含：
14.根据权利要求12或13所述的组合物，其中，所述组合物中的净正电荷与负电荷的电荷比为1:2；
15.根据权利要求6或7所述的组合物，其中，所述核酸分子是编码一种或多种抗原的rna。
16.根据权利要求6所述的组合物，其中，所述组合物还包含至少一种辅助...
【专利技术属性】
技术研发人员：宋更申，张宏雷，周玉婷，靳立杰，张晋瑜，董开，王环宇，余晓文，
申请(专利权)人：北京悦康科创医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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