生产mRNA原液的方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种生产mRNA原液的方法及其应用。所述方法通过优化共转录加帽反应体系从源头上减少dsRNA、不完整性RNA的含量、提高产物的加帽率及完整性来提高mRNA原液的质量；通过酶解反应，降低dsRNA副产物含量和蛋白残留；通过优化下游纯化方式进一步去除mRNA中的杂质、并且适用于工业生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于核糖核酸分离纯化，具体涉及一种生产mrna原液的方法及其应用，特别是工业化生产方法及其应用。

技术介绍

1、mrna疫苗是将编码疾病特异性抗原的mrna通过递送系统引入体内，利用宿主细胞的蛋白质合成机制产生抗原，从而触发免疫应答。除了疫苗，mrna技术作为通用性平台技术，理论上mrna具有合成任意一种蛋白的潜能，有可能一定程度上替代和补充蛋白质疗法。2020年全球首个mrna疫苗的成功上市标志mrna技术进入商业化时代，随着前期的技术积累和疫情形势的迫切需求，mrna技术进入快速发展时期。尽管如此，mrna疗法的大发展还有待进一步的技术突破，比如序列优化、递送系统设计以及生产工艺的优化等方面还存在诸多挑战。

2、mrna疫苗的生产主要包括：dna模板序列的设计与制备、mrna原液的制备及纯化、mrna制剂的制备(例如，采用lnp对mrna进行包裹)等步骤。其中，mrna原液的制备过程直接影响mrna的质量和生产成本，因此优化mrna原液的制备工艺至关重要。

3、mrna原液的制备包括mrna体外转录(in-vitro 本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种生产mRNA原液的方法，其包括如下步骤：

2.根据前述所述权利要求的方法，其中，步骤1)中所述共转录加帽反应过程中，采用缓冲溶液体系。

3.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，所述缓冲溶液包括镁离子溶液。

4.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，所述镁离子浓度为30～50mM，优选40mM。

5.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，步骤2)中所述纯化选自超滤换液和/或层析；优选地，所述层析为亲和层析或纤维素层析；优选地，所述纯化为超滤换液。

6.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，所述缓冲溶液包括镁离子溶...

【技术特征摘要】

1.一种生产mrna原液的方法，其包括如下步骤：

2.根据前述所述权利要求的方法，其中，步骤1)中所述共转录加帽反应过程中，采用缓冲溶液体系。

3.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，所述缓冲溶液包括镁离子溶液。

4.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，所述镁离子浓度为30～50mm，优选40mm。

5.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，步骤2)中所述纯化选自超滤换液和/或层析；优选地，所述层析为亲和层析或纤维素层析；优选地，所述纯化为超滤换液。

6.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，所述缓冲溶液包括镁离子溶液；

7.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，所述步骤2)中酶包括rnase iii和/或蛋白酶k；优选为rnase iii和蛋白酶k组合。

8.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，所述缓冲溶液包括镁离子溶液；

9.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，所述rnase iii的用量为0....

【专利技术属性】
技术研发人员：宋更申，董开，李艳芬，吉鑫，张晋瑜，王晨阳，
申请(专利权)人：北京悦康科创医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：