【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药品领域，具体涉及一种具有降尿酸作用的金果榄提取物及其制备方法与用途。
技术介绍
1、金果榄是防己科植物青牛胆或金果榄的干燥块根。药典中的功能主治为：有清热解毒，利咽，止痛之功效。用于咽喉肿痛，痈疽疔毒，泄泻，痢疾，脘腹疼痛。外用浸膏或者其汁液可以用于治疗毒蛇咬伤等。近代研究发现其活性成分主要为生物碱，木脂素，甾体，二萜类如金果榄块根含掌叶防己碱、防已内酯、异防已内酯、药根碱、金果榄苷、古伦宾等，主要具有抗炎，抗菌，抗肿瘤，抗溃疡，镇痛，降血糖及缓解压力等生物活性。而该植物的特征性呋喃二萜类对多种肿瘤细胞都具有一定的细胞毒性。
2、目前在痛风治疗中最常用的药物有非布司他和别嘌醇，均为xod抑制剂类药物，而这两种药物均具有较多的不良反应。本专利技术从金果榄中提取到的活性部位亦具有较好的xod抑制作用，目前未见其有降尿酸相关报道。
技术实现思路
1、本专利技术提供一种具有降尿酸治疗效果，且制备方法简单的天然降尿酸药物，并提供了制备方法。
2、本专利技术通过以下的技术方案来实现：本专利技术提供一种具有降尿酸作用的金果榄提取物，金果榄提取物中古伦宾含量≥20%。
3、优选的本专利技术金果榄提取物通过以下制备方法得到，包括以下步骤：步骤一，取金果榄药材粉碎，用5倍重量的的乙醇水溶液超声提取，提取三次，合并提取液，减压浓缩得到醇提浸膏；步骤二，用柱层析或者溶剂萃取的方式富集到古伦宾含量≥20%的部位。
4、进一步优选的，步骤一中乙醇
5、进一步优选的，步骤二溶剂萃取为先后使用石油醚和乙酸乙酯萃取，取其中乙酸乙酯萃取部位。
6、进一步优选的，步骤二中层析柱洗脱步骤如下：先后依次用纯水，10%乙醇水溶液，30%乙醇水溶液，60%乙醇水溶液，90%乙醇水溶液洗脱，每个梯度洗脱三个柱体积，取60%，90%乙醇水溶液洗脱分别减压浓缩干燥，即得到古伦宾含量≥20%的部位。
7、本专利技术还提供了通过上述制备方法制备得到的金果榄提取物部位在制备黄嘌呤氧化酶抑制剂中的应用。
8、本专利技术还提供了通过上述制备方法制备得到的金果榄提取物部位在制备具有降尿酸作用的药品中的应用。
9、本专利技术具有以下优点：本专利技术具有显著的xod抑制活性，可作为潜在的降尿酸药物且制备方法简单，并使用沿用历史悠久的药材，安全性较好。
10、实施例：
11、金果榄购自亳州药材市场，古伦宾对照品购自上海同田生物技术有限公司。
12、实施例1 金果榄提取物tg-30%，tg-60%，tg-90%部位的制备。
13、取金果榄药材2kg，粉碎，用10l的80%乙醇超声提取40分钟，提取三次，合并提取液，减压浓缩得到浸膏，将浸膏用xad16n大孔树脂填料进行柱层析分离纯化，先后依次用纯水，10%乙醇水溶液，30%乙醇水溶液，60%乙醇水溶液，90%乙醇水溶液洗脱，每个梯度洗脱三个柱体积，将30%，60%，90%乙醇水溶液洗脱分别减压浓缩干燥，得到tg-30%，tg-60%，tg-90%部位。检测tg-30%，tg-60%，tg-90%中古伦宾含量分别为10.3%，49.1%，23.6%，检测方法如下：
14、取古伦宾对照品适量，精密称定，用70%甲醇制成每1 ml含0.25mg的溶液，即得。取样品粉末约0.5g，精密称定，精密加入70%甲醇10ml，称定重量，超声处理（功率200w，频率59khz）20分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加70%甲醇至刻度，摇匀，即得。分别精密吸取对照品溶液与供试样品溶液各10μl，注入液相色谱仪，以乙腈-水（40:60）为流动相；检测波长为210nm测定，即得。
15、实施例2金果榄提取物tg-ea部位的制备。
16、取金果榄药材2kg，粉碎，用10l的90%乙醇超声提取40分钟，提取三次，合并提取液，减压浓缩得到浸膏267g，将所得浸膏混悬于200ml水中，先后依次使用石油醚和乙酸乙酯萃取，每种溶剂萃取三次，每次萃取溶剂体积为500ml，将所得乙酸乙酯部位萃取液减压浓缩至干，得到tg-ea，采用实施例1中方法测定其古伦宾含量为31.7%。
17、实施例3制剂。
18、称取一定量的tg-60%，研磨，加入常规辅料，按照常规工艺，制成片剂。
19、称取一定量的tg-90%，研磨，加入常规辅料，按照常规工艺，制成口服液。
20、称取一定量的tg-ea，研磨，加入常规辅料，按照常规工艺，制成颗粒剂。
21、实施例4金果榄提取物对黄嘌呤氧化酶的体外抑制作用的研究
22、1、实验方法
23、1.1溶液配制
24、磷酸盐缓冲液pb的配制
25、预先配制好k2hpo4（称取5.23g k2hpo4溶于400ml水中）和kh2po4溶液（称取1.02gkh2po4溶于100ml水中），然后准确量取324ml k2hpo4和76ml kh2po4，混合均匀后，即得50mm、ph7.5的磷酸盐缓冲液pb，作为空白对照组的供试品溶液。
26、别嘌呤醇溶液的配制
27、称取别嘌呤醇5mg溶于1ml dmso中制成母液，完全溶解后用pb稀释至1.5μg/ml、10μg/ml，分装1ml/管保存至-20℃冰箱，作为阳性对照组的供试品溶液。实验时各取1管，无需稀释，解冻后直接使用。其中，浓度为1.5μg/ml的别嘌呤醇溶液作为别嘌呤醇低剂量组，浓度为10μg/ml的别嘌呤醇溶液作为别嘌呤醇高剂量组。
28、黄嘌呤氧化酶溶液的配制
29、按黄嘌呤氧化酶产品包装上显示的酶量和体积，用pb将其稀释到100u/l，配好后分装8ml/管于-20℃环境中保存。每次取用1管，以pb稀释至25 u/l备用。
30、底物黄嘌呤溶液的配制
31、准确称取4.56mg 黄嘌呤，置50ml容量瓶中，加入150µl 1m氢氧化钠，pb 30ml，超声助溶，待黄嘌呤全部溶解至澄清透明后，以pb定容至刻度，即得 600µm的黄嘌呤溶液。
32、供试品溶液的配制
33、分别称取20mg实施例1-2制备的tg-30%，tg-60%，tg-90%，tg-ea，加入至1.5ml离心管，然后加入1ml dmso超声溶解成母液，吸取50μl母液和950μl pb混匀，即得供试药物的溶液。
34、1.2酶和底物的反应与终止
35、实验组在1.5ml离心管中依次加入黄嘌呤氧化酶（xod）溶液400μl和供试品溶液200μl，空白对照组在1.5ml离心管中依次加入黄嘌呤氧化酶（xod）溶液400μl和空白对照组的供试品溶液20本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种具有降尿酸作用的金果榄提取物，其特征在于，所述金果榄提取物中古伦宾含量≥20%。
2.一种权利要求1所述的金果榄提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，取金果榄药材粉碎，用5倍重量的的乙醇水溶液超声提取，提取三次，合并提取液，减压浓缩得到醇提浸膏；步骤二，用柱层析或者溶剂萃取的方式富集到古伦宾含量≥20%的部位。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤一中乙醇水溶液的乙醇含量＞75%，步骤二中柱层析为XAD16N大孔树脂填料柱层析，使用乙醇水溶液梯度洗脱，取其中乙醇浓度＞50%的洗脱部位。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤二溶剂萃取为先后使用石油醚和乙酸乙酯萃取，取其中乙酸乙酯萃取部位。
5.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，步骤二中层析柱洗脱步骤如下：先后依次用纯水，10%乙醇水溶液，30%乙醇水溶液，60%乙醇水溶液，90%乙醇水溶液洗脱，每个梯度洗脱三个柱体积，取60%，90%乙醇水溶液洗脱分别减压浓缩干燥，即得到古伦宾含量≥20%的部位。
6.权利要求
7.权利要求1所述的金果榄提取物、权利要求2-5中任一项所述的制备方法制备得到的金果榄提取物部位在制备具有降尿酸作用的药品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种具有降尿酸作用的金果榄提取物，其特征在于，所述金果榄提取物中古伦宾含量≥20%。
2.一种权利要求1所述的金果榄提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，取金果榄药材粉碎，用5倍重量的的乙醇水溶液超声提取，提取三次，合并提取液，减压浓缩得到醇提浸膏；步骤二，用柱层析或者溶剂萃取的方式富集到古伦宾含量≥20%的部位。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤一中乙醇水溶液的乙醇含量＞75%，步骤二中柱层析为xad16n大孔树脂填料柱层析，使用乙醇水溶液梯度洗脱，取其中乙醇浓度＞50%的洗脱部位。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤二溶剂萃取为先后...
【专利技术属性】
技术研发人员：温尧林，
申请(专利权)人：苏州凯祥生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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