【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及黄曲霉毒素检测，具体涉及一种适用于黄曲霉毒素检测的固相萃取净化器及检测方法。
技术介绍
1、黄曲霉毒素(aflatoxins,aft)是一种由黄曲霉和寄生曲霉等真菌的次生代谢产物，常见的有aftb1、b2、g2和m1。其中，aftb1毒性最强，是氰化物的10倍，砒霜的68倍，对人和动物且具有很强的致突变、致畸和致癌作用，被世界卫生组织确定为1a级危险物。因此，世界各国都对进口农产品和食品中的aft的最大允许限量(mrl)做出严格规定。食品安全国家标准gb2761—2017《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》规定了我国食品中黄曲霉毒素b1的限量要求：玉米以及玉米制品中不得超过20μg/kg。
2、目前检测黄曲霉毒素的检测方法主要有：薄层层析法、酶联免疫吸附法、胶体金试纸条法、荧光定量检测法、quechers法、高效液相色谱法、高效液相色谱-质谱联用法等。专利cn 117110511a用薄层色谱法鉴别谷物中的黄曲霉素b1、b2，可快速完成谷物初筛，只能定性检测适合于大样品量的初筛。专利cn 115326951a用免疫亲和柱层析法对牛奶样品进行前处理，进超高效液相色谱-串联三重四级杆质谱联用仪检测得到牛奶中黄曲霉素m1的含量，提高检测样品的回收率。黄曲霉素检测免析亲和柱方案基于抗原抗体特异性可逆结合特性技术，根据抗原抗体的高特异性，从复杂的待测样品中提取目标化合物，再结合液相色谱法及液相色谱-质谱联用检测技术进行定量检测。黄曲霉素荧光定量检测技术基于免疫层析和特异性免疫反应，针对检测项目遴选高特异性的单克隆
3、quechers(quick、easy、cheap、effective、rugged、safe)，是近年来国际上最新发展起来的一种用于农产品检测的快速样品前处理技术，原理与高效液相色谱(hplc)和固相萃取(spe)相似，都是利用吸附剂填料与基质中的杂质相互作用，吸附杂质从而达到除杂净化的目的。quechers方法中常用的净化剂填料为psa(乙二胺-n-丙基硅烷)、c18(十八烷基硅(ods)键合相吸附剂)、gcb(石墨化碳黑)，并加入少量的无水硫酸镁除水。其中psa的弱阴离子交换、相似相溶和螯合作用可有效去除样品中的极性物质、糖类、脂肪酸、金属离子等杂质；c18对亲脂类物质和脂肪有很好的吸附效果；gcb可吸附色素和大分子非极性干扰物质。常规净化剂填料处理的玉米样品检测黄曲霉毒素的回收率偏低，不能满足高效液相色谱-质谱的检测要求。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种基于quechers-超高效液相色谱-串联质谱的玉米中黄曲霉毒素检测，通过改进quechers固相萃取净化器的填料，提高检测回收率。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种适用于玉米中黄曲霉毒素检测的固相萃取净化器，所述净化器中填充有下述比例的净化剂填料：20-25mg重量份psa、20-25mg重量份c18、8-10mg重量份gcb和8-10mg重量份纳米zro2。
4、本专利技术还提供了一种玉米中黄曲霉毒素的前处理方法，包括以下步骤：粉碎均质的玉米样本用有机溶剂提取，取上清液于上述的固相萃取净化器中漩涡振荡净化，离心过滤得到待检液。
5、作为一种实施方式，所述有机溶剂为乙腈或甲醇。
6、作为一种实施方式，所述提取方法为将有机溶剂和玉米样本混匀，超声提取，然后加入无水硫酸镁和氯化钠振荡，离心取上清液。
7、优选的，所述超声提取的频率为20000～28000hz，超声提取的时间为20-40min。
8、优选的，所述玉米样本与有机溶剂的重量体积比为2-5g：10ml。
9、优选的，所述无水硫酸镁和氯化钠的总质量与有机溶剂体积的比例为0.5-2g：10ml。
10、本专利技术还提供了一种玉米中黄曲霉毒素的检测方法，包括以下步骤：按照上述的方法进行前处理，得到待检液；将待检液进高效液相色谱和质谱检测。
11、优选的，所述液相色谱条件为：色谱柱：c18柱；流速：0.3ml/min；柱温：40℃；进样量：3.00ul；流动相a为h2o；流动相b为甲醇；梯度洗脱程序为：0～0.5min，70％a；2.0～3.0min，5％a；3.10～5.0min，70％a；分析时间：5.0min。
12、优选的，所述质谱条件为：电喷雾正离子模式扫描，多反应监测模式检测；电离电压：3000v；离子源温度：350℃；黄曲霉毒素b1的离子对为母离子为313.100，子离子为285.100，去簇电压为80.000v，碰撞电压为31.000v。
13、本专利技术的有益效果：
14、本专利技术对传统quechers法作了改进，减少了无水硫酸镁的使用，增加zro2纳米材料，其对真菌毒素类污染物以及脂类和非不饱和脂肪酸具有强吸附效果，能够提高检测回收率。
15、本专利技术基于改进quechers的前处理方法，在以增加一种新型的纳米吸附材料zro2为前提，结合高效液相色谱-质谱联用法检测玉米中黄曲霉毒素b1。该方法无需氮吹复溶、前处理简单、定量准确、省时省力、稳定性良好、环境和人员健康友好，适用于玉米基质样品中黄曲霉毒素的检测。
16、本专利技术基于quechers-超高效液相色谱-串联质谱(uplc-ms/ms)，建立了一种轻简化检测玉米中黄曲霉毒素b1的分析方法。样品经有机溶剂提取、quechers方法净化后，采用uplc-ms/ms检测分析。结果表明，在0.03～100μg/l范围内，黄曲霉毒素b1具有良好的线性关系，相关系数r>0.999；检出限(lod)和定量限(loq)分别为0.03～0.08μg/kg和0.1～0.2μg/kg；在0.03mg/kg、0.5mg/kg和2mg/kg添加水平下，平均回收率为84.62％～113.55％之间，相对标准偏差(rsd)为0.94％～5.14％。该方法高效、快速、灵敏、准确、稳定、成本低，适用于玉米中黄曲霉毒素b1的检测。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种适用于玉米中黄曲霉毒素检测的固相萃取净化器，其特征在于，所述净化器中填充有下述比例的净化剂填料：20-25mg重量份PSA、20-25mg重量份C18、8-10mg重量份GCB和8-10mg重量份纳米ZrO2。
2.一种玉米中黄曲霉毒素的前处理方法，其特征在于，包括以下步骤：粉碎均质的玉米样本用有机溶剂提取，取上清液于权利要求1所述的固相萃取净化器中漩涡振荡净化，离心过滤得到待检液。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂为乙腈或甲醇。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取方法为将有机溶剂和玉米样本混匀，超声提取，然后加入无水硫酸镁和氯化钠振荡，离心取上清液。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述超声提取的频率为20000～28000Hz，超声提取的时间为20-40min。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述玉米样本与有机溶剂的重量体积比为2-5g：10ml。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述无水硫酸镁和氯化钠的总质量与有机溶剂体积的比
8.一种玉米中黄曲霉毒素的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：按照权利要求2-7任意一项所述的方法进行前处理，得到待检液；将待检液进高效液相色谱和质谱检测。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述液相色谱条件为：色谱柱：C18柱；流速：0.3mL/min；柱温：40℃；进样量：3.00uL；流动相A为H2O；流动相B为甲醇；梯度洗脱程序为：0～0.5min，70％A；2.0～3.0min，5％A；3.10～5.0min，70％A；分析时间：5.0min。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述质谱条件为：电喷雾正离子模式扫描，多反应监测模式检测；电离电压：3000V；离子源温度：350℃；黄曲霉毒素B1的离子对为母离子为313.100，子离子为285.100，去簇电压为80.000V，碰撞电压为31.000V。
...【技术特征摘要】
1.一种适用于玉米中黄曲霉毒素检测的固相萃取净化器，其特征在于，所述净化器中填充有下述比例的净化剂填料：20-25mg重量份psa、20-25mg重量份c18、8-10mg重量份gcb和8-10mg重量份纳米zro2。
2.一种玉米中黄曲霉毒素的前处理方法，其特征在于，包括以下步骤：粉碎均质的玉米样本用有机溶剂提取，取上清液于权利要求1所述的固相萃取净化器中漩涡振荡净化，离心过滤得到待检液。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂为乙腈或甲醇。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取方法为将有机溶剂和玉米样本混匀，超声提取，然后加入无水硫酸镁和氯化钠振荡，离心取上清液。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述超声提取的频率为20000～28000hz，超声提取的时间为20-40min。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述玉米样本与有机溶剂的重量体积比为2-5g：10ml。
<...【专利技术属性】
技术研发人员：石洁，郑晓娟，陈丹，陈秀叶，刘树森，郭宁，张海剑，马红霞，孙华，王彦博，
申请(专利权)人：河北省农林科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。