山桐子U6启动子及其应用制造技术

技术编号：41296801 阅读：6 留言：0更新日期：2024-05-13 14:45

本发明专利技术涉及生物技术领域，本发明专利技术公开了山桐子的U6启动子，所述启动子为核苷酸序列如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.3所示的DNA分子。本发明专利技术从山桐子中克隆到的4个U6启动子并连接到含有LUC报告基因的pGreenII0800载体上，通过农杆菌瞬时转化烟草叶片，发现所克隆的四个IpU6启动子均具有活性，其中IpU6‑2、IpU6‑1的转录活性高于其他两个IpU6启动子活性以及对照OsU6a，可以作为山桐子内源U6启动子应用于山桐子CRISPR/Cas9编辑系统，提高山桐子的基因编辑效率。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物中山桐子u6启动子及其应用。

技术介绍

1、山桐子具有“树上油葡萄”美誉，是木本油料树种，果实含油量高，成熟果肉含油最高可达43.6％，种子含油约22.4％-25.9％，其中不饱和脂肪酸亚油酸含量高达油分总含量的58％-81％，还富含维生素e、角鲨烯等，对高脂血症和心血管疾病具有预防作用。山桐子果实产量高，盛果期单株产量可达50-70kg，外加其乔木多年生的特征，盛果期可持续15-40年。

2、为进一步提高山桐子产量，挖掘并鉴定其功能基因，开展山桐子基因编辑工作已势在必行。尤其，近年来，crispr/cas9系统由于其高效、便捷、易操作等优点，已经成为进行基因功能研究与种质遗传改良的主要工具，并运用于作物的各个品质性状的改良(jianget al.,2017；bandyopadhyay.,2019)。在crispr/cas9系统中重要元件之一是u6启动子。研究表明，u6启动子的转录活性决定sgrna的表达水平，从而影响基因的编辑效率(wei etal.,2016)。为了提高在不同物种中的基因编辑效率，人们对植物内源的u6启动子开展了相关研究。gao et al(2015)利用自身的内源启动子成功建立了适用于烟草的crispr/cas9系统。在苹果愈伤组织中，卞书讯等(2020)使用内源性u6启动子，可以大大提高sgrna的表达水平。唐志强等(2022)克隆了3个金银花u6启动子，并筛选出一个具有高效转录活性的启动子。

3、目前，u6启动子已在多个植物开展了相关研究，但是还没有关于山桐子内

技术实现思路

1、为了解决上述技术问题，本专利技术首先提供一种dna分子，所述dna分子的核苷酸序列为seq id no.2、seq id no.1、seq id no.4或seq id no.3。

2、上述dna分子中，所述dna分子可来源于山桐子。

3、本专利技术还保护表达盒，所述表达盒含有启动子，所述启动子为所述的dna分子。

4、本专利技术还保护重组载体，所述重组载体含有所述dna分子或含有所述表达盒。

5、可用现有的植物表达载体构建所述重组载体。

6、本专利技术还保护重组微生物，所述重组微生物含有所述dna分子、或含有所述表达盒、或含有所述重组载体。

7、上述重组微生物具体可为酵母，细菌，藻和真菌。

8、本专利技术还保护所述的dna分子在启动目的基因表达中的应用

9、上述应用中，所述启动目的基因表达为在植物中启动目的基因表达。

10、上述应用中，所述植物为双子叶植物，具体可为茄科烟草属植物(如：烟草(nicotiana tabacum l.))。

11、本专利技术还提供所述dna分子在基因编辑中的应用。

12、上述应用中，所述基因编辑通过crispr/cas9编辑实施。

13、本专利技术从山桐子中克隆到的4个u6启动子并连接到含有luc报告基因的pgreenⅱ0800载体上，通过农杆菌瞬时转化烟草叶片，发现所克隆的四个ipu6启动子均具有活性，其中ipu6-2、ipu6-1的转录活性高于其他两个ipu6启动子活性以及对照osu6a，可以作为山桐子内源u6启动子应用于山桐子crispr/cas9编辑系统，提高山桐子的基因编辑效率。

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【技术保护点】

1.DNA分子，其特征在于：所述DNA分子的核苷酸序列为SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.1、SEQID NO.4或SEQ ID NO.3。

2.表达盒，其特征在于：所述表达盒含有启动子，所述启动子为权利要求1所述的DNA分子。

3.重组载体，其特征在于：所述重组载体含有权利要求1所述的DNA分子、或含有权利要求2所述的表达盒。

4.重组微生物，其特征在于：所述重组微生物含有权利要求1所述的DNA分子、或含有权利要求2所述的表达盒、或含有权利要求3所述的重组载体。

5.权利要求1所述的DNA分子在启动目的基因表达中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述启动目的基因表达为在植物中启动目的基因表达。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述双子叶植物为茄科烟草属植物。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述茄科烟草属植物为烟草。

9.权利要求1所述DNA分子在基因编辑中的应用。

10.根据权利要求9所述应用，其特征在于，所述基因编辑通过CRISPR/Cas9编辑实施。

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【技术特征摘要】

1.dna分子，其特征在于：所述dna分子的核苷酸序列为seq id no.2、seq id no.1、seqid no.4或seq id no.3。

2.表达盒，其特征在于：所述表达盒含有启动子，所述启动子为权利要求1所述的dna分子。

3.重组载体，其特征在于：所述重组载体含有权利要求1所述的dna分子、或含有权利要求2所述的表达盒。

4.重组微生物，其特征在于：所述重组微生物含有权利要求1所述的dna分子、或含有权利要求2所述的表达盒、或含有权利要求3所述的重组载体。...

【专利技术属性】
技术研发人员：王雷，左毅，向浩鑫，李彬，张冬冬，
申请(专利权)人：中国科学院植物研究所，
类型：发明
国别省市：

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