【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及重组减毒革兰氏阴性细菌菌株及其在治疗受试者癌症的方法中的用途。
技术介绍
1、细菌已经进化形成了不同的机制来将蛋白直接注射到靶细胞中1。被如耶尔森氏菌、志贺氏菌和沙门氏菌2的细菌使用的iii型分泌系统(t3ss)的功能类似于将所谓的细菌效应蛋白注射到宿主细胞中的纳米注射器。
2、t3s已经被用来将杂合肽和蛋白递送到靶细胞中。异源细菌t3ss效应子已经被传递，以防所研究的细菌难以通过遗传学获得(如沙眼衣原体)。通常将报告蛋白融合到可能的t3ss分泌信号从而研究对t3ss依赖性蛋白递送的需求，例如百日咳博德特氏菌(bordetella pertussis)腺苷酸环化酶、鼠dhfr或可磷酸化标签。肽递送主要以疫苗接种为目的进行。这包括病毒表位、细菌表位(李斯特菌溶血素o)以及代表人类癌细胞表位的肽。在少数情况下，递送功能性真核蛋白来调节宿主细胞，如递送纳米抗体3、核蛋白(cre重组酶，myod)4,5或il10和illra6。上述系统均不允许单蛋白递送，因为在每种情况下，均会编码一个或多个内源效应蛋白。此外，使用的载体未以能简单克隆编码所选蛋白的其他dna片段的方式设计，阻碍了这种系统的广泛应用。
3、允许靶向药物递送的方法非常令人感兴趣。例如，使用识别肿瘤细胞表面结构，并且在最佳情况下，选择性结合肿瘤细胞的抗体。为了改善这种抗体的机制，可将它们与治疗剂或与包装了药物的脂质囊泡缀合。这种囊泡的难题之一是活性试剂的恰当释放。更加复杂的是治疗性蛋白或肽的递送，特别是当靶向的是细胞内机制时。已经尝试了许
技术实现思路
1、本专利技术涉及重组减毒革兰氏阴性细菌菌株及其在治疗受试者癌症的方法中的用途。在一些实施方案中，本专利技术提供了重组减毒革兰氏阴性细菌菌株及其用于治疗受试者癌症的用途，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株允许各种iii型效应子，以及iv型效应子、病毒蛋白和最重要的功能性真核蛋白转运到癌细胞中，例如恶性实体瘤的细胞中。
2、本专利技术提供了一种重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其具有增加的异源蛋白表达和分泌特性，并且令人惊讶地其能够在体内数天或甚至数周内稳定地编码异源蛋白。
3、在第一方面，本专利技术涉及一种重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其包含核苷酸分子，所述核苷酸分子包含编码异源蛋白的核苷酸序列，所述编码异源蛋白的核苷酸序列与编码来自细菌效应蛋白的递送信号的核苷酸序列的3'末端框内融合，其中，所述编码来自细菌效应蛋白的递送信号的核苷酸序列与启动子可操作地连接，并且其中，所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株还包含编码生长所必需的内源蛋白的染色体基因的缺失，并且还包含内源毒力质粒，所述内源毒力质粒包含核苷酸序列，所述核苷酸序列包含与启动子可操作地连接的编码生长所必需的所述内源蛋白的基因。
4、在另一方面，本专利技术涉及一种重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其包含核苷酸分子，所述核苷酸分子包含编码异源蛋白的核苷酸序列，所述编码异源蛋白的核苷酸序列与编码来自细菌效应蛋白的递送信号的核苷酸序列的3'末端框内融合，其中，所述编码来自细菌效应蛋白的递送信号的核苷酸序列与启动子可操作地连接，并且其中，所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株还包含位于编码内源arac型dna结合蛋白的基因上游的rna热传感器(rnathermosensor)区域内的调整。
5、在另一方面，本专利技术涉及一种重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其包含核苷酸分子，所述核苷酸分子包含编码异源蛋白的核苷酸序列，所述编码异源蛋白的核苷酸序列与编码来自细菌效应蛋白的递送信号的核苷酸序列的3'末端框内融合，其中，所述编码来自细菌效应蛋白的递送信号的核苷酸序列与启动子可操作地连接，并且其中，所述异源蛋白是参与诱导或调节干扰素(ifn)应答的蛋白。
6、在另一方面，本专利技术涉及用于在治疗受试者的癌症的方法中的使用的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其包含核苷酸分子，所述核苷酸分子包含编码异源蛋白的核苷酸序列，所述编码异源蛋白的核苷酸序列与编码来自细菌效应蛋白的递送信号的核苷酸序列的3'末端框内融合，其中，所述编码来自细菌效应蛋白的递送信号的核苷酸序列与启动子可操作地连接，并且其中，所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株还包含编码生长所必需的内源蛋白的染色体基因的缺失，并且还包含内源毒力质粒，所述内源毒力质粒包含核苷酸序列，所述核苷酸序列包含与启动子可操作地连接的编码生长所必需的所述内源蛋白的基因，所述方法包括给受试者施用所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株以足以治疗受试者的量施用。
7、本专利技术同样涉及治疗受试者的癌症的方法，其包括给受试者施用重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株包含核苷酸分子，所述核苷酸分子包含编码异源蛋白的核苷酸序列，所述编码异源蛋白的核苷酸序列与编码来自细菌效应蛋白的递送信号的核苷酸序列的3'末端框内融合，其中，所述编码来自细菌效应蛋白的递送信号的核苷酸序列与启动子可操作地连接，并且其中，所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株还包含编码生长所必需的内源蛋白的染色体基因的缺失，并且还包含内源毒力质粒，所述内源毒力质粒包含核苷酸序列，所述核苷酸序列包含与启动子可操作地连接的编码生长所必需的所述内源蛋白的基因，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株以足以治疗受试者的量施用。
8、本专利技术同样涉及重组减毒革兰氏阴性细菌菌株用于制造治疗受试者的癌症的药物的用途，所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株包含核苷酸分子，所述核苷酸分子包含编码异源蛋白的核苷酸序列，所述编码异源蛋白的核苷酸序列与编码来自细菌效应蛋白的递送信号的核苷酸序列的3'末端框内融合，其中，所述编码来自细菌效应蛋白的递送信号的核苷酸序列与启动子可操作地连接，并且其中，所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其包含核苷酸分子，所述核苷酸分子包含编码异源蛋白的核苷酸序列，所述编码异源蛋白的核苷酸序列与编码来自细菌效应蛋白的递送信号的核苷酸序列的3'末端框内融合，其中，所述编码来自细菌效应蛋白的递送信号的核苷酸序列与启动子可操作地连接，并且其中，所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株还包含编码生长所必需的内源蛋白的染色体基因的缺失，并且还包含内源毒力质粒，所述内源毒力质粒包含核苷酸序列，所述核苷酸序列包含与启动子可操作地连接的编码生长所必需的所述内源蛋白的基因。
2.根据权利要求1所述的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其中所述减毒重组革兰氏阴性细菌菌株在至少一种细菌效应蛋白的产生方面有缺陷。
3.根据权利要求1或2所述的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其中，所述编码生长所必需的内源蛋白的基因选自编码氨基酸产生所必需的酶的基因、编码参与肽聚糖生物合成的酶的基因、编码参与LPS生物合成的酶的基因、编码参与核苷酸合成的酶的基因和编码翻译起始因子的基因。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其中，所述编码生长所必
5.根据权利要求1-4中任一项所述的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其中，所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株是耶尔森氏菌菌株。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其中位于所述内源毒力质粒上的编码生长所必需的内源酶的基因包含其内源启动子及其内源转录终止子。
7.根据权利要求6所述的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其中，所述编码生长所必需的内源酶的基因、其内源启动子及其内源转录终止子位于内源毒力质粒上的orf155起点(SycO)的上游122bp处。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其中，所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株还包含位于编码内源AraC型DNA结合蛋白的基因上游的RNA热传感器区域内的调整。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其用于在治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括给受试者施用所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株以足以治疗受试者的量施用。
...【技术特征摘要】
1.一种重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其包含核苷酸分子，所述核苷酸分子包含编码异源蛋白的核苷酸序列，所述编码异源蛋白的核苷酸序列与编码来自细菌效应蛋白的递送信号的核苷酸序列的3'末端框内融合，其中，所述编码来自细菌效应蛋白的递送信号的核苷酸序列与启动子可操作地连接，并且其中，所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株还包含编码生长所必需的内源蛋白的染色体基因的缺失，并且还包含内源毒力质粒，所述内源毒力质粒包含核苷酸序列，所述核苷酸序列包含与启动子可操作地连接的编码生长所必需的所述内源蛋白的基因。
2.根据权利要求1所述的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其中所述减毒重组革兰氏阴性细菌菌株在至少一种细菌效应蛋白的产生方面有缺陷。
3.根据权利要求1或2所述的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其中，所述编码生长所必需的内源蛋白的基因选自编码氨基酸产生所必需的酶的基因、编码参与肽聚糖生物合成的酶的基因、编码参与lps生物合成的酶的基因、编码参与核苷酸合成的酶的基因和编码翻译起始因子的基因。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其中，所述编码生长所必需的内源蛋白的基因是编码氨基...
【专利技术属性】
技术研发人员：西蒙·伊泰格，马利斯·阿姆斯特茨，克里斯托夫·卡斯帕，
申请(专利权)人：巴塞尔大学，
类型：发明
国别省市：
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