【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，尤其涉及一种同时检测致病性大肠杆菌、沙门菌及耐药基因微流体芯片及其应用。
技术介绍
1、大肠杆菌是广泛存在于人及多种动物肠道中的一种微生物，致病性大肠杆菌能引起肠道和肠道外感染，引起畜禽局部或全身感染，严重影响畜禽的生长发育，带来巨大经济损失。沙门菌大多数仅能引起畜禽等动物的感染，但部分血清型的沙门菌能引起人的严重感染。致病性大肠杆菌、沙门菌能通过污染的畜禽产品感染人类，导致尿道感染，脓毒病、食物中毒等一系列疾病，危害严重。
2、抗生素在畜禽养殖临床中的应用，虽然对疾病的预防与控制取得了一些效果，但是，由于抗生素的长期、不合理使用，导致了细菌耐药性的产生和扩散，出现了越来越多的耐药性大肠杆菌与沙门菌株，从而使抗生素疗效降低甚至失效，部分曾经可以治愈的感染性疾病变得无法控制，同时也加剧了抗生素在畜禽体内的残留，严重威胁畜禽产品质量安全和公共卫生安全，给畜禽养殖业的持续发展、人类身体健康及生态安全带来潜在危害。
3、目前针对致病性大肠杆菌和沙门菌的检测技术主要包括细菌分离培养及生化鉴定、免疫学技术、分子生物学技术等。传统检测手段耗时且检测效率低下，细菌分离培养周期较长，操作繁琐，不能满足快速检测的要求；免疫学技术敏感性和特异性较低，不适合多种病原体混合感染的检测；pcr技术因其特异性强、敏感性高、操作简单、检测快速等优点而被广泛应用。在临床上pcr技术主要是针对单一病原的检测，针对不同病原同时检测的较少，而且由于大肠杆菌、沙门菌等病原的血清型复杂，目前多重pcr技术也只能同时检测有限的几种
4、目前，在细菌耐药性检测中，传统药敏试验具有一定的局限性，此方法由于需要对细菌进行培养和纯化，耗时长，且经验依赖性强，操作也较繁琐，因此不能完全适应临床诊断治疗的需求。细菌对抗菌药物耐药大多数是由于耐药基因的存在或获得产生的，因此耐药基因的检测对耐药菌的确定有重要意义，基因型检测在耐药菌感染和传播的流行病学调查、新的耐药菌株的发现和鉴定方面发挥了重要作用。如果在用药前能够检测出某种耐药基因，将有利于指导临床合理用药，延缓耐药的发展。由于细菌耐药机制相当复杂，由多种耐药基因引起，如果分别对这些耐药基因进行检测，工作量巨大，而且随着临床上多重耐药菌的不断增多，需要对多类抗生素的多个耐药基因同时进行检测。因此，非常有必要改变一对一的检测模式，开发一次多元的检测方法，实现细菌耐药性的快速、准确检测。
5、基因芯片技术是将大量的靶基因片段有序排列在玻片等载体上，应用已知核酸序列作为探针与互补的靶核苷酸序列杂交，用芯片扫描仪检测荧光信号后，通过计算机软件进行数据分析。基因芯片技术具有集成化、微型化、自动化、快速、高通量等特点。与传统pcr相比，pcr技术与微流体芯片结合应用可以获得更均匀的体系温度，有助于提高扩增产量，使检测更灵敏。微流体芯片将检测全过程集中在一块芯片中，实现了自动化，样品和试剂消耗量少，反应速度快，它以高通量并行检测的方式，可以同时完成多种病原菌的鉴定和耐药菌株的多种耐药基因检测，为病原菌的鉴定及耐药基因分析提供了强有力的工具。
6、目前，针对致病性大肠杆菌和沙门菌的鉴别诊断及耐药性分别建立了多种检测方法，然而，在临床上还没有可以同时鉴别检测多种致病性大肠杆菌、沙门菌及耐药基因的微流体芯片检测方法的应用。
7、因此，建立一种针对多种致病性大肠杆菌、沙门菌和耐药基因的微流体芯片检测方法，以期进一步提高诊断效率与准确性，为临床动物疫病诊断、流行病学调查等工作提供更为有效的检测途径，对提升畜禽产品质量安全和公共卫生安全风险监控能力也具有重要意义。
技术实现思路
1、一方面，本专利技术提供了成套引物，包括25套引物组合；
2、引物组合1由seq id no：1和2所示的引物组成；
3、引物组合2由seq id no：3和4所示的引物组成；
4、引物组合3由seq id no：5和6所示的引物组成；
5、引物组合4由seq id no：7和8所示的引物组成；
6、引物组合5由seq id no：9和10所示的引物组成；
7、引物组合6由seq id no：11和12所示的引物组成；
8、引物组合7由seq id no：13和14所示的引物组成；
9、引物组合8由seq id no：15和16所示的引物组成；
10、引物组合9由seq id no：17和18所示的引物组成；
11、引物组合10由seq id no：19和20所示的引物组成；
12、引物组合11由seq id no：21和22所示的引物组成；
13、引物组合12由seq id no：23和24所示的引物组成；
14、引物组合13由seq id no：25和26所示的引物组成；
15、引物组合14由seq id no：27和28所示的引物组成；
16、引物组合15由seq id no：29和30所示的引物组成；
17、引物组合16由seq id no：31和32所示的引物组成；
18、引物组合17由seq id no：33和34所示的引物组成；
19、引物组合18由seq id no：35和36所示的引物组成；
20、引物组合19由seq id no：37和38所示的引物组成；
21、引物组合20由seq id no：39和40所示的引物组成；
22、引物组合21由seq id no：41和42所示的引物组成；
23、引物组合22由seq id no：43和44所示的引物组成；
24、引物组合23由seq id no：45和46所示的引物组成；
25、引物组合24由seq id no：47和48所示的引物组成；
26、引物组合25由seq id no：49和50所示的引物组成。
27、在一些实施方案中，所述成套引物中的正向引物5’端还具有通用标签序列。在一些具体的实施方式中，所述通用标签序列与荧光标记的通用序列一致；更具体地，与pcr反应master mix 中fam荧光标记的通用序列一致。
28、在一些实施方案中，本专利技术提供了所述的成套引物的应用，为以下a1-a6中的任意一种：
29、a1.鉴别12种病原鉴定基因和13种耐药基因；
30、a2.制备用于鉴别12种病原鉴定基因和13种耐药基因的产品；
31、a3.鉴定待测病原是否具有1本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.成套引物，包括25套引物组合；
2.如权利要求1所述的成套引物，其特征在于，所述成套引物中的正向引物5’端还具有通用标签序列。
3.如权利要求1或2所述的成套引物的应用，为以下a1-a6中的任意一种：
4.一种含有权利要求1或2所述的成套引物的试剂盒，所述试剂盒的用途为以下b1-b3中的任意一种：
5.如权利要求4所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括将各条引物单独包装的步骤。
6.一种微流体芯片，其特征在于，所述芯片上固定有权利要求1或2所述的成套引物。
7.如权利要求6所述的微流体芯片的应用，为以下a1-a6中的任意一种：
8.一种鉴定待测样本是否感染了具有12种病原鉴定基因中的一种或多种的病原中的至少一种，或所述待测样本是否感染了具有13种耐药基因中的一种或多种的病原中的至少一种的方法，其特征在于，包括以下步骤：
9.一种鉴定待测样本是否感染了具有12种病原鉴定基因中的一种或多种的病原中的至少一种，或所述待测样本是否感染了具有13种耐药基因中的一种或多种的病原中的至少一种的
10.如权利要求9所述的检测系统，所述数据处理构件被配置为：
...【技术特征摘要】
1.成套引物，包括25套引物组合；
2.如权利要求1所述的成套引物，其特征在于，所述成套引物中的正向引物5’端还具有通用标签序列。
3.如权利要求1或2所述的成套引物的应用，为以下a1-a6中的任意一种：
4.一种含有权利要求1或2所述的成套引物的试剂盒，所述试剂盒的用途为以下b1-b3中的任意一种：
5.如权利要求4所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括将各条引物单独包装的步骤。
6.一种微流体芯片，其特征在于，所述芯片上固定有权利要求1或2所述的成套引物。
7.如权利要求6所...
【专利技术属性】
技术研发人员：傅彩霞，张启龙，刘海莹，栗云鹏，周德刚，张玮，
申请(专利权)人：北京市动物疫病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：
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