【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学和生物，进一步涉及乳蛋白的表达调控，具体的涉及苜蓿mtr-mir159a在奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白积累调节过程中的应用。
技术介绍
1、牛奶通常被认为是人类饮食中蛋白质的重要来源。乳蛋白是牛奶的主要营养成分，是牛奶品质的重要指标。乳蛋白主要包括酪蛋白(包括αs1-酪蛋白、αs2-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白)，约占乳蛋白的80％，乳清蛋白(包括α-乳白蛋白和β-乳球蛋白)，约占20％。因此，了解日粮影响酪蛋白合成的分子机制对于优化反刍动物乳的营养含量以及提高乳制品的乳蛋白含量至关重要，提高牛奶中乳蛋白含量已成为当前奶牛育种工作的重要目标之一。
2、优质牧草作为奶牛日粮的的重要组成部分，种类繁多。其中苜蓿可消化纤维含量高，饲喂牛羊等反刍动物有较佳的反馈效果。近年来的研究表明，在全混合日粮中添加一定比例的优质苜蓿青干草，不仅能改善和维持奶牛相对良好的健康状况，还能提高奶牛生产性能、改善乳品质。此外，苜蓿mirna(mtr-mirna)已被证明具有跨界调节功能，jia等(2023)发现苜蓿mir168b对奶牛乳腺上皮细胞(bmec)中可以调控脂滴和甘油三酯的生成，表明苜蓿mirna对乳成分的合成及分泌存在调控作用，为解析奶牛乳腺乳成分代谢奠定了理论基础。
3、mirnas是一种非编码的单链rna，长度约为20-25个核苷酸。mirna在有机体中参与调控多种生命活动，包括细胞分化与凋亡、机体生长发育、脂类、蛋白质代谢等多种生理生化反应及新陈代谢过程。一个mirna可以结合一个或多个靶基因的
4、因此，对于苜蓿rna跨界调控奶牛乳腺乳蛋白代谢通路中相关非编码rna的进一步研究，有助于更好地利用苜蓿mirna调控牛奶的乳蛋白成分，对奶牛产业发展具有重要的应用价值。
技术实现思路
1、为解决现有技术中的问题，本专利技术的目的在于提供一种苜蓿mtr-mir159a在奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白积累调节过程中的应用，旨在解决如何调节乳腺细胞中乳蛋白含量的问题。mirna作为一种新型的调控分子，其优点在于：1)一个mirna可能结合多个靶基因，调控蛋白表达过程中的多个途径；2)mirna的形成不需要翻译过程，调节更加方便快捷。在奶牛乳腺上皮细胞中过表达mtr-mir159a，能调节乳腺细胞中乳蛋白含量。
2、本专利技术提供了一种调节奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白积累的方法，所述乳蛋白为β-酪蛋白、α-酪蛋白和κ-酪蛋白，通过干扰ptprf基因表达降低乳腺上皮细胞中β-酪蛋白的含量，提高α-酪蛋白和κ-酪蛋白的含量。本专利技术所述的α-酪蛋白包括αs1-酪蛋白、αs2-酪蛋白，本专利技术通过qrt-pcr证明了αs1-酪蛋白、αs2-酪蛋白编码基因在mrna水平表达量的提高，通过elisa检测证明了α-酪蛋白整体蛋白含量的提高。
3、优选的是，通过外源核苷酸干扰ptprf基因表达，降低ptprf基因的表达量。
4、上述任一项优选的是，苜蓿mtr-mir159a干扰ptprf基因表达，所述外源核苷酸为苜蓿mtr-mir159a，所述苜蓿mtr-mir159a核苷酸序列为如seq id no：1所示的rna序列。所述苜蓿mtr-mir159a通过结合胰岛素信号通路中的ptprf基因3’utr，从而实现降低ptprf基因的表达量，ptprf基因3’utr的序列如seq id no：6所示。
5、上述任一项优选的是，mtr-mir159a基因的前体rna序列长度为166bp，如seq idno：2所示。所述mtr-mir159a基因的成熟体长度为21bp，所述苜蓿mtr-mir159a基因的成熟体的核苷酸序列如seq id no：1所示，即为本申请所述苜蓿mtr-mir159a。
6、上述任一项优选的是，苜蓿mtr-mir159a干扰ptprf基因表达，所述外源核苷酸为苜蓿mtr-mir159a模拟物，所述苜蓿mtr-mir159a模拟物包括由seq id no：1所示的rna序列。
7、上述任一项优选的是，所述苜蓿mtr-mir159a模拟物为双链rna分子，由seq idno：1所示的苜蓿mtr-mir159a核苷酸序列和seq id no：3所示的苜蓿mtr-mir159a互补序列组成。
8、上述任一项优选的是，苜蓿mtr-mir159a模拟物为单链rna分子，核苷酸序列如seqid no：1所示。
9、单链mtr-mir159a模拟物与双链mtr-mir159a模拟物乳腺上皮细胞中具有相同的生物学功能，在本专利技术中能够起到相同的技术效果。由于商业化制备过程中，双链mirna更有利于保存和运输，因此，在本领域现有技术中，商业化产品也采用双链mirna的形式替代单链mirna。
10、上述任一项优选的是，将所述苜蓿mtr-mir159a模拟物转染至乳腺上皮细胞。
11、上述任一项优选的是，将40～50nm的所述苜蓿mtr-mir159a模拟物转染至乳腺上皮细胞，所述苜蓿mtr-mir159a模拟物为双链rna分子。进一步优选的，将40、43、47、50nm及其间范围的所述苜蓿mtr-mir159a模拟物转染至乳腺上皮细胞。
12、上述任一项优选的是，所述外源核苷酸为ptprf基因干扰片段，所述ptprf基因干扰片段上游核苷酸序列为如seq id no：4所示的rna序列，所述ptprf基因干扰片段下游核苷酸序列为如seq id no：5所示的rna序列。
13、上述任一项优选的是，将所述ptprf基因干扰片段转染至乳腺上皮细胞。
14、上述任一项优选的是，将80nm的所述ptprf基因干扰片段转染至乳腺上皮细胞。
15、ptprf基因干扰片段的量为80nm时，既不浪费基因干扰片段又能得到良好的转染效率。
16、基因干扰片段合成方便，能迅速发挥其调控作用。
17、本专利技术还提供了一种调节奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白积累的方法，所述乳蛋白为β-酪蛋白、α-酪蛋白和κ-酪蛋白，苜蓿mtr-mir159a基因通过过表达实现降低乳腺上皮细胞中β-酪蛋白的含量，提高α-酪蛋白和κ-酪蛋白的含量。
18、优选的，通过在奶牛乳腺上皮细胞中增加mtr-mir159a的量实现mtr-mir159a基因过表达。
19、上述任一项优选的是，苜蓿mtr-mir159a的核苷酸序列如seq id no：1所示，通过增加所述苜蓿mtr-mir159a的表达量实现mtr-mir159a基因过表达。
20、上述任一项优选的是，在奶牛乳腺上皮细胞中增加mtr-mir本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种调节奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白积累的方法，所述乳蛋白为β-酪蛋白、α-酪蛋白和κ-酪蛋白，其特征在于，通过干扰PTPRF基因表达降低乳腺上皮细胞中β-酪蛋白的含量，提高α-酪蛋白和κ-酪蛋白的含量。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，通过外源核苷酸干扰PTPRF基因表达，降低PTPRF基因的表达量。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，苜蓿mtr-miR159a干扰PTPRF基因表达，所述外源核苷酸为苜蓿mtr-miR159a，所述苜蓿mtr-miR159a核苷酸序列为如SEQ ID NO：1所示的RNA序列。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，苜蓿mtr-miR159a干扰PTPRF基因表达，所述外源核苷酸为苜蓿mtr-miR159a模拟物，所述苜蓿mtr-miR159a模拟物为双链RNA分子，由SEQ ID NO：1所示的苜蓿mtr-miR159a核苷酸序列和SEQ ID NO：3所示的苜蓿mtr-miR159a互补序列组成。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，将40～50nM的所述苜蓿mtr-miR1
6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述外源核苷酸为PTPRF基因干扰片段，所述PTPRF基因干扰片段包括PTPRF基因干扰片段上游核苷酸序列和PTPRF基因干扰片段下游核苷酸序列，所述PTPRF基因干扰片段上游核苷酸序列为如SEQ ID NO：4所示的RNA序列，所述PTPRF基因干扰片段下游核苷酸序列为如SEQ ID NO：5所示的RNA序列。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，将80nM的所述PTPRF基因干扰片段转染至乳腺上皮细胞。
8.一种调节奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白积累的方法，所述乳蛋白为β-酪蛋白、α-酪蛋白和κ-酪蛋白，其特征在于，苜蓿mtr-miR159a通过过表达实现降低乳腺上皮细胞中β-酪蛋白的含量，提高α-酪蛋白和κ-酪蛋白的含量。
9.mtr-miR159a或PTPRF基因干扰片段在调节牛奶中乳蛋白含量中的应用，其特征在于，mtr-miR159a或PTPRF基因干扰片段通过干扰PTPRF基因表达降低乳腺上皮细胞中β-酪蛋白的含量，提高α-酪蛋白和κ-酪蛋白的含量。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述苜蓿mtr-miR159a核苷酸序列为如SEQID NO：1所示的RNA序列；所述PTPRF基因干扰片段由SEQ ID NO：4所示的PTPRF基因干扰片段上游核苷酸序列和SEQ ID NO：5所示的PTPRF基因干扰片段下游核苷酸序列组成。
...【技术特征摘要】
1.一种调节奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白积累的方法，所述乳蛋白为β-酪蛋白、α-酪蛋白和κ-酪蛋白，其特征在于，通过干扰ptprf基因表达降低乳腺上皮细胞中β-酪蛋白的含量，提高α-酪蛋白和κ-酪蛋白的含量。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，通过外源核苷酸干扰ptprf基因表达，降低ptprf基因的表达量。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，苜蓿mtr-mir159a干扰ptprf基因表达，所述外源核苷酸为苜蓿mtr-mir159a，所述苜蓿mtr-mir159a核苷酸序列为如seq id no：1所示的rna序列。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，苜蓿mtr-mir159a干扰ptprf基因表达，所述外源核苷酸为苜蓿mtr-mir159a模拟物，所述苜蓿mtr-mir159a模拟物为双链rna分子，由seq id no：1所示的苜蓿mtr-mir159a核苷酸序列和seq id no：3所示的苜蓿mtr-mir159a互补序列组成。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，将40～50nm的所述苜蓿mtr-mir159a模拟物转染至乳腺上皮细胞。
6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述外源核苷酸为ptprf基因干扰片段，所述ptprf基因干扰片...
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