【技术实现步骤摘要】
【】本专利技术涉及生物制品，具体而言，本专利技术涉及一种用于鸡胚成纤维细胞高密度培养的补料培养基及高密度培养鸡胚成纤维细胞的方法。
技术介绍
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技术介绍
1、人造肉是一种体外细胞培养的生物技术。体外模拟细胞生长、细胞分化过程，培养动物组织用于肉类生产。为了减轻养殖业和环保的压力，以及出于食品安全的考虑，人造肉越来越多得到投资界的重视，人造肉技术也取得了多方面的进步。主要用到肌细胞、成骨细胞、成纤维细胞、脂肪细胞等。以生产人造肉为目的的体外细胞培养的难点在于不但要求培养基安全、实现细胞的高密度培养，还要大幅降低成本，尽量接近市场肉类销售价格。
2、现有的细胞培养技术都是基于有血清培养，血清的使用会带来外源因子污染的风险，同时无法实现高密度培养。源培有商业化的cef 无血清培养基可用于鸡胚成纤维细胞培养，但不足以支持超高密度培养。如果通过持续换液，必然导致生产成本高昂。故如何实现鸡胚成纤维细胞的高密度培养，同时降低成本是亟待解决的问题。
技术实现思路
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技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了一种用于鸡胚成纤维细胞高密度培养的补料培养基及高密度培养鸡胚成纤维细胞的方法，从而解决或者至少缓解了现有技术中存在的上述问题和其它方面的问题中的一个或多个。
2、为实现前述目的，根据本专利技术的第一个方面提供了一种用于鸡胚成纤维细胞高密度培养的补料培养基，该补料培养基配合源培cef无血清培养基h5e0kj来使用，包括50mg/l-20
3、在如前所述的补料培养基中，可选地，包括55mg/l的甘氨酸； 50mg/l的丙氨酸；850mg/l的精氨酸；380mg/l的天冬酰胺；190 mg/l的天冬氨酸；145mg/l的半胱氨酸；270mg/l的胱氨酸；240mg/l 的谷氨酸；380mg/l的组氨酸；610mg/l的异亮氨酸；730mg/l的亮氨酸；780mg/l的赖氨酸；730mg/l的甲硫氨酸；430mg/l的苯丙氨酸；690mg/l的脯氨酸；620mg/l的丝氨酸；600mg/l的苏氨酸；520mg/l的色氨酸；280mg/l的酪氨酸；540mg/l的缬氨酸；60000mg/l的葡萄糖；0.3mg/l的生物素；40mg/l的氯化胆碱；2mg/l 的泛酸钙；3mg/l的叶酸；1mg/l的核黄素；1mg/l的vb12；10mg/l 的肌醇；3mg/l的盐酸吡哆醇；5mg/l的盐酸吡哆醛；3mg/l的烟酰胺；200mg/l的氯化钙；80mg/l的硫酸镁；400mg/l的氯化钾； 2200mg/l的碳酸氢钠；500mg/l的氯化钠；1000mg/l的谷氨酰胺和余量的水。
4、在如前所述的补料培养基中，可选地，所述水为注射用水。
5、根据本专利技术的另一个方面提供一种高密度培养鸡胚成纤维细胞的方法，包括以下步骤：
6、用胰蛋白酶消化鸡胚，制成鸡胚原代细胞单细胞悬液；
7、将上述单细胞悬液按1×106个细胞/ml的接种量接种入伴有搅拌的、含有源培cef无血清培养基h5e0kj和微载体的生物反应器中，以开始高密度细胞批式培养；
8、每日检测细胞培养介质中葡萄糖和乳酸的含量各一次，当葡萄糖含量低于1.5g/l时一次性补加5％如权利要求1至3中任一项所述的补料培养基，当乳酸浓度达到6g/l时用上述源培cef无血清培养基 h5e0kj进行微载体沉降换液70％；
9、每日检测细胞密度，当所述反应器内细胞密度停止增长后结束培养。
10、在如前所述的高密度培养鸡胚成纤维细胞的方法中，可选地，所述胰蛋白酶是重组胰蛋白酶。
11、在如前所述的高密度培养鸡胚成纤维细胞的方法中，可选地，所述微载体是cytiva1的cytodex 1。
12、在如前所述的高密度培养鸡胚成纤维细胞的方法中，可选地，所述生物反应器中所述微载体的含量为25g/l。
13、在如前所述的高密度培养鸡胚成纤维细胞的方法中，可选地，控制鸡胚成纤维细胞在所述生物反应器内的生长温度为36.8℃、溶氧为40％、ph为7.1、反应器搅拌速度为100rpm。
14、本专利技术的用于鸡胚成纤维细胞高密度培养的补料培养基搭配cef 无血清培养基，通过特定的细胞培养方法，实现了鸡胚成纤维细胞的安全、高密度培养，将细胞密度相比单纯无血清培养基培养提高30 倍，并大大降低了人造肉的生产成本。
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1.一种用于鸡胚成纤维细胞高密度培养的补料培养基，其特征在于，所述补料培养基配合源培CEF无血清培养基H5E0KJ来使用，包括50mg/L-200mg/L的甘氨酸；45mg/L-200mg/L的丙氨酸；500mg/L-1200mg/L的精氨酸；300mg/L-500mg/L的天冬酰胺；100mg/L-300mg/L的天冬氨酸；50mg/L-150mg/L的半胱氨酸；200mg/L-300mg/L的胱氨酸；200mg/L-300mg/L的谷氨酸；300mg/L-500mg/L的组氨酸；400mg/L-700mg/L的异亮氨酸；500mg/L-750mg/L的亮氨酸；500mg/L-800mg/L的赖氨酸；450mg/L-800mg/L的甲硫氨酸；300mg/L-450mg/L的苯丙氨酸；600mg/L-820mg/L的脯氨酸；400mg/L-650mg/L的丝氨酸；600mg/L-760mg/L的苏氨酸；480mg/L-600mg/L的色氨酸；200mg/L-350mg/L的酪氨酸；380mg/L-600mg/L的缬氨酸；60000mg/L-80000mg/L的葡萄糖；0.2mg/
2.如权利要求1所述的补料培养基，其中，包括55mg/L的甘氨酸；50mg/L的丙氨酸；850mg/L的精氨酸；380mg/L的天冬酰胺；190mg/L的天冬氨酸；145mg/L的半胱氨酸；270mg/L的胱氨酸；240mg/L的谷氨酸；380mg/L的组氨酸；610mg/L的异亮氨酸；730mg/L的亮氨酸；780mg/L的赖氨酸；730mg/L的甲硫氨酸；430mg/L的苯丙氨酸；690mg/L的脯氨酸；620mg/L的丝氨酸；600mg/L的苏氨酸；520mg/L的色氨酸；280mg/L的酪氨酸；540mg/L的缬氨酸；60000mg/L的葡萄糖；0.3mg/L的生物素；40mg/L的氯化胆碱；2mg/L的泛酸钙；3mg/L的叶酸；1mg/L的核黄素；1mg/L的VB12；10mg/L的肌醇；3mg/L的盐酸吡哆醇；5mg/L的盐酸吡哆醛；3mg/L的烟酰胺；200mg/L的氯化钙；80mg/L的硫酸镁；400mg/L的氯化钾；2200mg/L的碳酸氢钠；500mg/L的氯化钠；1000mg/L的谷氨酰胺和余量的水。
3.如权利要求1或2所述的补料培养基，其中，所述水为注射用水。
4.一种高密度培养鸡胚成纤维细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.如权利要求4所述的高密度培养鸡胚成纤维细胞的方法，其中，所述胰蛋白酶是重组胰蛋白酶。
6.如权利要求4所述的高密度培养鸡胚成纤维细胞的方法，其中，所述微载体是Cytiva公司的Cytodex 1。
7.如权利要求6所述的高密度培养鸡胚成纤维细胞的方法，其中，所述生物反应器中所述微载体的含量为25g/L。
8.如权利要求4所述的高密度培养鸡胚成纤维细胞的方法，其中，控制鸡胚成纤维细胞在所述生物反应器内的生长温度为36.8℃、溶氧为40％、pH为7.1、反应器搅拌速度为100rpm。
...【技术特征摘要】
1.一种用于鸡胚成纤维细胞高密度培养的补料培养基，其特征在于，所述补料培养基配合源培cef无血清培养基h5e0kj来使用，包括50mg/l-200mg/l的甘氨酸；45mg/l-200mg/l的丙氨酸；500mg/l-1200mg/l的精氨酸；300mg/l-500mg/l的天冬酰胺；100mg/l-300mg/l的天冬氨酸；50mg/l-150mg/l的半胱氨酸；200mg/l-300mg/l的胱氨酸；200mg/l-300mg/l的谷氨酸；300mg/l-500mg/l的组氨酸；400mg/l-700mg/l的异亮氨酸；500mg/l-750mg/l的亮氨酸；500mg/l-800mg/l的赖氨酸；450mg/l-800mg/l的甲硫氨酸；300mg/l-450mg/l的苯丙氨酸；600mg/l-820mg/l的脯氨酸；400mg/l-650mg/l的丝氨酸；600mg/l-760mg/l的苏氨酸；480mg/l-600mg/l的色氨酸；200mg/l-350mg/l的酪氨酸；380mg/l-600mg/l的缬氨酸；60000mg/l-80000mg/l的葡萄糖；0.2mg/l-0.5mg/l的生物素；25mg/l-50mg/l的氯化胆碱；1mg/l-3mg/l的泛酸钙；2mg/l-4mg/l的叶酸；0.5mg/l-1mg/l的核黄素；0.5mg/l-1.2mg/l的vb12；6mg/l-10mg/l的肌醇；3mg/l-4mg/l的盐酸吡哆醇；4.2mg/l-5mg/l的盐酸吡哆醛；2.2mg/l-3.5mg/l的烟酰胺；100mg/l-200mg/l的氯化钙；40mg/l-80mg/l的硫酸镁；300mg/l-400mg/l的氯化钾；2000mg/l-3000mg/l的碳酸氢钠；350mg/l-500mg/l的氯化钠；800mg/l-1200mg/l的谷氨酰胺和余量的水。
2.如...
【专利技术属性】
技术研发人员：李智力，孙奇威，方芳，刘园园，贾晓俊，
申请(专利权)人：上海源培生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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