【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种重配呼肠孤病毒科病毒的制备方法及其载体文库。本专利申请为2021年7月6日提交的韩国专利申请第10-2021-0088575号要求优先权，并且所述专利申请的公开内容通过引用并入本文。
技术介绍
1、呼肠孤病毒科(reoviridae)病毒为以双链rna为基因组的病毒家族之一，其基因组片段包装在多层衣壳内，不包括含脂质的外壳，具有尺寸约为70nm至85nm的多面体形状。所述呼肠孤病毒科分为光滑呼肠孤病毒(sedoreovirinae)和刺突呼肠孤病毒(spinareovirinae)亚科，其感染主要影响消化或呼吸器官。轮状病毒(human rotavirus，hrv)是引起婴幼儿腹泻的主要病毒，据了解，韩国及世界各地95％的5岁以下儿童至少感染过一次，约占全球每年发生的腹泻病例的40％。轮状病毒感染症由轮状病毒显性感染所致，主要传播途径为粪-口感染，潜伏期约为24小时至72小时。这种疾病会引起呕吐、发烧和血性水样腹泻，从而导致脱水，主要发生于婴幼儿或儿童，但偶尔在老年病房发生群体性暴发。
2、轮状病毒具有由1...
【技术保护点】
1.一种重配呼肠孤病毒科病毒的制备方法，其包括：用含有外源基因的表达载体文库转染已引入RNA聚合酶基因的第一细胞系；
2.根据权利要求1所述的重配呼肠孤病毒科病毒的制备方法，其中，所述呼肠孤病毒科病毒选自轮状病毒属、卡多呼肠孤病毒属、米莫呼肠孤病毒属、环状病毒属、植物呼肠弧病毒属、东南亚十二节段RNA病毒属、水产呼肠孤病毒属、科罗拉多壁蝨热病毒属、质型多角体病毒属、迪诺维纳病毒属、斐济病毒属、昆虫非包涵体病毒属、真菌呼肠孤病毒属、正呼肠孤病毒属和水稻病毒属中的任一病毒。
3.根据权利要求1所述的重配呼肠孤病毒科病毒的制备方法，其中，所述RNA聚...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种重配呼肠孤病毒科病毒的制备方法，其包括：用含有外源基因的表达载体文库转染已引入rna聚合酶基因的第一细胞系；
2.根据权利要求1所述的重配呼肠孤病毒科病毒的制备方法，其中，所述呼肠孤病毒科病毒选自轮状病毒属、卡多呼肠孤病毒属、米莫呼肠孤病毒属、环状病毒属、植物呼肠弧病毒属、东南亚十二节段rna病毒属、水产呼肠孤病毒属、科罗拉多壁蝨热病毒属、质型多角体病毒属、迪诺维纳病毒属、斐济病毒属、昆虫非包涵体病毒属、真菌呼肠孤病毒属、正呼肠孤病毒属和水稻病毒属中的任一病毒。
3.根据权利要求1所述的重配呼肠孤病毒科病毒的制备方法，其中，所述rna聚合酶为t7 rna聚合酶、t3 rna聚合酶、sp6 rna聚合酶或线粒体聚合酶。
4.根据权利要求1所述的重配呼肠孤病毒科病毒的制备方法，其中，所述第一细胞系为bhk21细胞系、hek293细胞系、hela细胞系、cho细胞系、lncap细胞系、a549细胞系或hepg2细胞系。
5.根据权利要求1所述的重配呼肠孤病毒科病毒的制备方法，其中，所述第二细胞系为ma104细胞系、vero细胞系、hek细胞系、人肠上皮细胞、ht-29细胞系、caco2细胞系、llc-mk2细胞系、frhl-2细胞系、cv-1细胞系、cos-7细胞系、bsc-1细胞系或bgm细胞系。
6.根据权利要求1所述的重配呼肠孤病毒科病毒的制备方法，其中，在所述培养第二培养物中，转染后6小时至12小时将所述第二细胞系添加到第一培养物。
7.根据权利要求1所述的重配呼肠孤病毒科病毒的制备方法，其中，在所述培养第三培养物中，转染后36小时至48小时将所述胰蛋白酶添加到第二培养物。
8.根据权利要求1所述的重配呼肠孤病毒科病毒的制备方法，其中，所述胰蛋白酶以0.1ug/ml至1ug/ml的浓度添加。
9.根据权利要求1所述的重配呼肠孤病毒科病毒的制备方法，其中，所述启动子为t7启动子、sp6启动子或cmv启动子。
10.根据权利要求1所述的重配呼肠孤病毒科病毒的制备方法，其中，所述表达载体文库的总dna重量为每1ⅹ104至1ⅹ106个细胞1ug至20ug。
11.根据权利要求1所述的重配呼肠孤病毒科病毒的制备方法，其中，所述表达载体文库还包括针对编码加帽酶的d1r或d12l的表达载体。
12.根据权利要求1所述的重配呼肠孤病毒...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐基元，权泰佑，郑舒娟，朴敏廷，李建世，李泫周，
申请(专利权)人：SK生物科学株式会社，
类型：发明
国别省市：
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