【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及细胞培养基领域，具体而言，本专利技术涉及用于 df-1细胞培养的低血清培养基、其制备方法及其用于扩增生产鸡法氏囊病毒的用途。
技术介绍
1、鸡成纤维细胞(df-1细胞)为一种可传代细胞，是一种稳定的、无肿瘤基因、自发无限增值的细胞系。该细胞来源于鸡胚胎，无禽白血病病毒、肉瘤病毒内源性基因，同时在形态上呈纤维状。目前被广泛用于动物病毒研究、疫苗研制、癌症研究等诸多领域。
2、鸡传染性法氏囊病(infectious bursal disease，ibd)是由鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus，ibdv)引起的鸡和火鸡的一种急性、高度接触性、免疫抑制性传染病。而法氏囊病病毒 1.在外界环境中极为稳定，能在鸡舍中长期存在，保持感染能力可持续 122天；2.对紫外线、乙酸、氯制剂、强酸强碱都具有抵抗力；3.耐热， 56℃下30分钟、30℃下5小时内病毒不被灭活；4.在0.5％的碳酸溶液中病毒不受影响。
3、对此，鸡场一般采用注射疫苗来进行防控。现有技术以df-1 细胞来生产抗ibdv疫苗。目前对于df-1细胞的培养基是用基础培养基，例如杜氏改良伊格尔培养基(dulbecco′smodified eagle medium，dmem)，添加入10％血清进行细胞的传代培养。在扩增生产ibdv阶段，当细胞达到一定密度后进行接毒，采用基础培养基添加入2％血清进行维持培养，来获得病毒。高浓度血清的使用不仅会造成批次差异、带入外源性的污染，而且价格昂贵，不易于工业化
4、专利申请cn106282098a公开了适合df-1细胞培养的低血清培养基，但需要逐步训化细胞以降低血清含量，需要花较多的时间和精力。
5、为此，亟待提出改进的用于df-1细胞的低血清培养基，以期解决或缓解上述技术问题。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了用于df-1细胞培养的低血清培养基、其制备方法、其用于扩增生产鸡法氏囊病毒的用途，从而解决或者至少缓解了现有技术中存在的上述问题和其它方面的问题中的一个或多个。
2、为实现前述目的，根据本专利技术的第一方面提供一种用于 df-1细胞培养的低血清培养基，按终浓度计，所述培养基为由以下组分组成的水溶液：
3、
4、
5、
6、根据本专利技术的第二方面提供根据如前所述的培养基用于扩增生产鸡法氏囊病毒的用途。
7、在如前所述的用途中，可选地，在df-1细胞培养阶段，使用如前所述的培养基外加3％小牛血清对df-1细胞进行培养，在接种病毒后，单独使用如前所述的培养基作为维持液。
8、根据本专利技术的第三方面提供制备如前所述的培养基的方法，所述方法由以下步骤组成：
9、a.将所需配制总体积95％的20℃至30℃的注射用水加入混合容器中；
10、b.在搅拌下加入除碳酸氢钠以外根据如前所述的培养基中的所有组分，搅拌混匀；
11、c.在搅拌下添加5m氢氧化钠，将ph调至6.8，再搅拌 15-30分钟使所述组分溶解；
12、d.每升最终培养基加入3.2g碳酸氢钠，搅拌至溶解；
13、e.在搅拌下添加1m氢氧化钠或盐酸，调整ph值至7.0-7.2；
14、f.加注射用水至所需总体积，搅拌10-30分钟，将容器密闭；
15、g.立即用0.2μm孔径滤膜过滤至无菌容器中。
16、在如前所述的方法中，可选地，所述混合容器的体积比配制总体积大5％-10％。
17、在采用上述技术方案的情况下，本专利技术在细胞传代培养阶段使用低血清浓度，在扩增生产ibdv阶段，不加血清进行维持，既减少了外源污染的带入又节约了成本；使用本专利技术的低血清培养基，无需对df-1 细胞进行驯化，且细胞可稳定传代；用本专利技术的低血清培养基传代20代的df-1细胞生产ibdv，收获的病毒滴度是使用传统基础培养基加10％血清培养的df-1细胞的接近10倍。
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1.一种用于DF-1细胞培养的低血清培养基，按终浓度计，所述培养基为由以下组分组成的水溶液：
2.根据权利要求1所述的培养基用于扩增生产鸡法氏囊病毒的用途。
3.根据权利要求2所述的用途，其中，在DF-1细胞培养阶段，使用所述培养基加3％小牛血清对DF-1细胞进行培养，在接种病毒后，单独使用所述培养基作为维持液。
4.制备根据权利要求1所述的培养基的方法，其特征在于，所述方法由以下步骤组成：
5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述混合容器的体积比配制总体积大5-10％。
【技术特征摘要】
1.一种用于df-1细胞培养的低血清培养基，按终浓度计，所述培养基为由以下组分组成的水溶液：
2.根据权利要求1所述的培养基用于扩增生产鸡法氏囊病毒的用途。
3.根据权利要求2所述的用途，其中，在df-1细胞培养阶段，使用所述培养基加3％...
【专利技术属性】
技术研发人员：方芳，陈杰，
申请(专利权)人：上海源培生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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