【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于测定信号扩增的方法、组合物和试剂盒。本文还提供了信号扩增试剂，其中所述信号扩增试剂是抗体或其抗原结合片段。
技术介绍
1、免疫测定，例如夹心免疫测定通常用于检测样品中的分析物。典型的免疫测定通常不够灵敏，不足以准确地检测样品中的低丰度分析物，或者测定仪器本身在检测低信号水平方面受到限制。用于提高测定灵敏度的方法通常涉及复杂的优化程序，这可能是一个耗时耗力的过程。此外，经优化的测定可能需要更长的运行时间和/或复杂的分析方法。
技术实现思路
1、在实施例中，本专利技术提供了一种检测样品中的所关注的分析物的方法，所述方法包括：
2、(a)使包括(a)第一可检测标记和(b)所述所关注的分析物的第一复合物与以下接触，其中所述第一可检测标记是电化学发光(ecl)标记：(i)信号扩增试剂，所述信号扩增试剂与所述第一可检测标记特异性结合并且包括结合部分，以及(ii)可检测部分，所述可检测部分包括(1)所述结合部分的结合配偶体，以及(2)第二可检测标记中的一个或多个第二可检测标记；以及(b)测量(i)所述第二可检测标记或(ii)所述第一可检测标记和所述第二可检测标记，由此检测所述所关注的分析物；
3、或者
4、(c)使包括(a)第一可检测标记和(b)所述所关注的分析物的第一复合物与以下接触，其中所述第一可检测标记是ecl标记：(i)信号扩增试剂，所述信号扩增试剂与所述第一可检测标记特异性结合并且包括酶，以及(ii)所述酶的底物；以及(d)测量酶活
5、或者
6、(e)使包括(a)第一可检测标记和(b)所述所关注的分析物的第一复合物与信号扩增试剂接触，其中所述第一可检测标记是ecl标记，所述信号扩增试剂与所述第一可检测标记特异性结合并且任选地包括第二可检测标记；以及(f)测量(i)所述第一可检测标记；(ii)所述第二可检测标记；或(iii)所述第一可检测标记和所述第二可检测标记，由此检测所述所关注的分析物；
7、或者
8、(g)使包括(a)第一可检测标记和(b)所述所关注的分析物的第一复合物与信号扩增试剂接触，其中所述第一可检测标记是电化学发光(ecl)标记，所述信号扩增试剂与所述第一可检测标记特异性结合，其中所述信号扩增试剂包括信号扩增(sa)核酸探针，由此形成包括所述第一复合物和所述信号扩增试剂的第二复合物；(h)延伸所述核酸探针以形成经延伸的序列；以及(i)测量经延伸的序列的量，由此检测所述所关注的分析物。在实施例中，第一复合物在表面上。
9、在实施例中，信号扩增试剂包括核酸探针，并且表面包括固定于其上的锚定试剂。在实施例中，信号扩增试剂包括核酸探针，并且所述方法进一步包括将锚定试剂固定在表面上。在实施例中，在所述方法的步骤(h)之前或期间，将锚定试剂固定在表面上。在实施例中，锚定试剂与经延伸的序列的锚定区结合，并且测量包括测量通过锚定试剂与表面结合的经延伸的序列的量。
10、在实施例中，本专利技术提供了一种试剂盒，其用于检测样品中的所关注的分析物，所述试剂盒包括在一个或多个小瓶、容器或隔室中的以下各项：(a)捕获试剂，所述捕获试剂与所述分析物特异性结合；(b)检测试剂，所述检测试剂与所述分析物特异性结合，其中所述检测试剂包括第一可检测标记，其中所述第一可检测标记是ecl标记；以及(c)信号扩增试剂，所述信号扩增试剂与所述第一可检测标记特异性结合。在实施例中，试剂盒进一步包括表面。
11、在实施例中，本专利技术提供了一种检测样品中的所关注的分析物的方法，所述方法包括(a)在表面上形成第一复合物，所述第一复合物包括所述所关注的分析物；捕获试剂，所述捕获试剂与所述分析物特异性结合，其中所述捕获试剂固定在所述表面上，或者其中所述捕获试剂能够固定到所述表面；以及检测试剂，所述检测试剂与所述分析物特异性结合并且包括第一核酸探针；(b)延伸所述第一核酸探针以形成包括第一锚定区的第一经延伸的序列，其中所述第一锚定区与固定在所述表面上的第一锚定试剂结合；(c)将所述第一经延伸的序列与包括第一可检测标记的第一标记探针结合，其中所述第一可检测标记是ecl标记；以及：
12、(d)使与所述第一经延伸的序列结合的所述第一标记探针与以下接触：(i)信号扩增试剂，所述信号扩增试剂与所述第一可检测标记特异性结合并且包括结合部分，以及(ii)可检测部分，所述可检测部分包括(1)所述结合部分的结合配偶体，以及(2)第二可检测标记中的一个或多个第二可检测标记；以及(e)测量所述表面上的(i)所述第二可检测标记或(ii)所述第一可检测标记和所述第二可检测标记，由此检测所述所关注的分析物；
13、或者
14、(f)使与所述第一经延伸的序列结合的所述第一标记探针与以下接触：(i)信号扩增试剂，所述信号扩增试剂与所述第一可检测标记特异性结合并且包括酶，以及(ii)所述酶的底物；以及(g)测量酶活性，由此检测所述所关注的分析物；
15、或者
16、(h)使与所述第一经延伸的序列结合的所述第一标记探针与信号扩增试剂接触，所述信号扩增试剂与所述第一可检测标记特异性结合并且任选地包括第二可检测标记；以及(i)测量(i)所述第一可检测标记；(ii)所述第二可检测标记；或(iii)所述第一可检测标记和所述第二可检测标记，由此检测所述所关注的分析物；
17、或者
18、(j)使与所述第一经延伸的序列结合的所述第一标记探针与信号扩增试剂接触，所述信号扩增试剂与所述第一可检测标记特异性结合，其中所述信号扩增试剂包括第二核酸探针，由此形成包括所述信号扩增试剂和所述第一标记探针的第二复合物；(k)延伸所述第二核酸探针以形成包括第二锚定区的第二经延伸的序列，其中所述第二锚定区与固定在所述表面上的第二锚定试剂结合；以及(l)测量与所述表面结合的(i)所述第二经延伸的序列或(ii)所述第一经延伸的序列和所述第二经延伸的序列的量，由此检测所述所关注的分析物。
19、在实施例中，本专利技术提供了一种试剂盒，其用于检测样品中的所关注的分析物，所述试剂盒包括在一个或多个小瓶、容器或隔室中的以下各项：(a)捕获试剂，所述捕获试剂与所述分析物特异性结合；(b)检测试剂，所述检测试剂与所述分析物特异性结合，其中所述检测试剂包括第一核酸探针；(c)第一标记探针，所述第一标记探针包括第一可检测标记，其中所述第一可检测标记是ecl标记；以及(d)信号扩增试剂，所述信号扩增试剂与所述第一可检测标记特异性结合。在实施例中，试剂盒进一步包括表面。
20、在实施例中，本专利技术提供了包括对ecl标记具有特异性的抗原结合结构域的抗体或其抗原结合片段。
21、在实施例中，本专利技术提供了包括对以下具有特异性的抗原结合结构域的抗体或其抗原结合片段：ecl标记和缀合接头。
22、在实施例中，本专利技术提供了一种组合物，其包括：(a)本文所提供的抗体或其抗原结合片段本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测样品中的所关注的分析物的方法，所述方法包括
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一复合物在表面上。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述第一复合物包括：捕获试剂，所述捕获试剂与所述分析物特异性结合，其中所述捕获试剂固定在所述表面上，或者其中所述捕获试剂能够固定到所述表面；以及检测试剂，所述检测试剂与所述分析物特异性结合并且包括所述第一可检测标记。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述检测试剂是第一检测试剂，并且其中所述第一复合物进一步包括与所述分析物特异性结合的第二检测试剂，其中所述第二检测试剂包括第一可检测标记，其中所述信号扩增试剂能够与所述第一检测试剂上的所述第一可检测标记和与所述第二检测试剂上的所述第一可检测标记同时结合。
5.根据权利要求3或4所述的方法，其中所述捕获试剂固定在所述表面上。
6.根据权利要求3或4所述的方法，其中所述捕获试剂能够固定到所述表面，并且其中所述方法包括在(a)、(c)、(e)或(g)的所述接触之前将所述捕获试剂固定到所述表面。
7.根据权利要求1至6中任
8.根据权利要求7所述的方法，其中(b)的所述测量包括测量所述第二可检测标记；或者其中(b)的所述测量包括测量所述第一可检测标记和所述第二可检测标记。
9.根据权利要求7或8所述的方法，其中所述第一复合物首先与所述信号扩增试剂接触，然后与所述可检测部分接触；或者
10.根据权利要求7至9中任一项所述的方法，其中(a)的所述接触包括：(I)形成包括所述信号扩增试剂和所述可检测部分的信号扩增复合物；以及(II)使所述第一复合物与所述信号扩增复合物接触。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述可检测部分包括所述结合部分的多个结合位点，和/或所述结合部分包括所述可检测部分的多个结合位点，其中所述信号扩增复合物包括多种信号扩增试剂，并且其中每种信号扩增试剂与一个或多个可检测部分结合。
12.根据权利要求7至11中任一项所述的方法，其中所述结合部分和所述可检测部分包括互补寡核苷酸、受体-配体对、抗原-抗体对、半抗原-抗体对、表位-抗体对、模拟表位-抗体对、适体-靶分子对或嵌入剂-靶分子对。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述结合部分包括寡核苷酸，并且所述可检测部分包括互补寡核苷酸以及第二可检测标记中的一个或多个第二可检测标记；或者
14.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述第一复合物与以下接触：(I)信号扩增试剂，所述信号扩增试剂与所述第一可检测标记特异性结合并且包括所述酶；以及(II)所述酶的底物。
15.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述第一复合物与信号扩增试剂接触，所述信号扩增试剂与所述第一可检测标记特异性结合，并且(f)的所述测量包括测量所述第一可检测标记。
16.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述第一复合物与信号扩增试剂接触，所述信号扩增试剂与所述第一可检测标记特异性结合，并且(f)的所述测量包括测量所述第一可检测标记、所述第二可检测标记或两者。
17.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述第一复合物与信号扩增试剂接触，所述信号扩增试剂与所述第一可检测标记特异性结合并且包括核酸探针，由此形成包括所述第一复合物和所述信号扩增试剂的第二复合物。
18.根据权利要求17所述的方法，其中(h)的所述延伸包括聚合酶链式反应(PCR)、连接酶链式反应(LCR)、链置换扩增(SDA)、自我维持合成反应(3SR)、等温扩增或其组合。
19.根据权利要求17或18所述的方法，其中(h)的所述延伸包括将所述核酸探针与模板寡核苷酸结合，并且通过PCR延伸所述核酸探针；或者
20.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述第一复合物包括至少两个第一可检测标记；
21.根据权利要求20所述的方法，其中(h)的所述延伸包括将所述第一信号扩增试剂和所述第二信号扩增试剂的所述核酸探针中的一个或两个核酸探针与模板寡核苷酸结合，从而形成环状模板，并且通过RCA延伸一个或两个核酸探针。
22.根据权利要求20或21所述的方法，其中(h)的所述延伸包括：将每个核酸探针与不同的模板寡核苷酸结合；从而由...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种检测样品中的所关注的分析物的方法，所述方法包括
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一复合物在表面上。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述第一复合物包括：捕获试剂，所述捕获试剂与所述分析物特异性结合，其中所述捕获试剂固定在所述表面上，或者其中所述捕获试剂能够固定到所述表面；以及检测试剂，所述检测试剂与所述分析物特异性结合并且包括所述第一可检测标记。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述检测试剂是第一检测试剂，并且其中所述第一复合物进一步包括与所述分析物特异性结合的第二检测试剂，其中所述第二检测试剂包括第一可检测标记，其中所述信号扩增试剂能够与所述第一检测试剂上的所述第一可检测标记和与所述第二检测试剂上的所述第一可检测标记同时结合。
5.根据权利要求3或4所述的方法，其中所述捕获试剂固定在所述表面上。
6.根据权利要求3或4所述的方法，其中所述捕获试剂能够固定到所述表面，并且其中所述方法包括在(a)、(c)、(e)或(g)的所述接触之前将所述捕获试剂固定到所述表面。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述第一复合物与以下接触：(i)信号扩增试剂，所述信号扩增试剂与所述第一可检测标记特异性结合并且包括结合部分；以及(ii)可检测部分，所述可检测部分包括(1)所述结合部分的结合配偶体，以及(2)第二可检测标记中的一个或多个第二可检测标记。
8.根据权利要求7所述的方法，其中(b)的所述测量包括测量所述第二可检测标记；或者其中(b)的所述测量包括测量所述第一可检测标记和所述第二可检测标记。
9.根据权利要求7或8所述的方法，其中所述第一复合物首先与所述信号扩增试剂接触，然后与所述可检测部分接触；或者
10.根据权利要求7至9中任一项所述的方法，其中(a)的所述接触包括：(i)形成包括所述信号扩增试剂和所述可检测部分的信号扩增复合物；以及(ii)使所述第一复合物与所述信号扩增复合物接触。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述可检测部分包括所述结合部分的多个结合位点，和/或所述结合部分包括所述可检测部分的多个结合位点，其中所述信号扩增复合物包括多种信号扩增试剂，并且其中每种信号扩增试剂与一个或多个可检测部分结合。
12.根据权利要求7至11中任一项所述的方法，其中所述结合部分和所述可检测部分包括互补寡核苷酸、受体-配体对、抗原-抗体对、半抗原-抗体对、表位-抗体对、模拟表位-抗体对、适体-靶分子对或嵌入剂-靶分子对。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述结合部分包括寡核苷酸，并且所述可检测部分包括互补寡核苷酸以及第二可检测标记中的一个或多个第二可检测标记；或者
14.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述第一复合物与以下接触：(i)信号扩增试剂，所述信号扩增试剂与所述第一可检测标记特异性结合并且包括所述酶；以及(ii)所述酶的底物。
15.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述第一复合物与信号扩增试剂接触，所述信号扩增试剂与所述第一可检测标记特异性结合，并且(f)的所述测量包括测量所述第一可检测标记。
16.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述第一复合物与信号扩增试剂接触，所述信号扩增试剂与所述第一可检测标记特异性结合，并且(f)的所述测量包括测量所述第一可检测标记、所述第二可检测标记或两者。
17.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述第一复合物与信号扩增试剂接触，所述信号扩增试剂与所述第一可检测标记特异性结合并且包括核酸探针，由此形成包括所述第一复合物和所述信号扩增试剂的第二复合物。
18.根据权利要求17所述的方法，其中(h)的所述延伸包括聚合酶链式反应(pcr)、连接酶链式反应(lcr)、链置换扩增(sda)、自我维持合成反应(3sr)、等温扩增或其组合。
19.根据权利要求17或18所述的方法，其中(h)的所述延伸包括将所述核酸探针与模板寡核苷酸结合，并且通过pcr延伸所述核酸探针；或者
20.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述第一复合物包括至少两个第一可检测标记；
21.根据权利要求20所述的方法，其中(h)的所述延伸包括将所述第一信号扩增试剂和所述第二信号扩增试剂的所述核酸探针中的一个或两个核酸探针与模板寡核苷酸结合，从而形成环状模板，并且通过rca延伸一个或两个核酸探针。
22.根据权利要求20或21所述的方法，其中(h)的所述延伸包括：将每个核酸探针与不同的模板寡核苷酸结合；从而由每个模板寡核苷酸形成环状模板；并且通过rca延伸每个核酸探针。
23.根据权利要求20或21所述的方法，其中(h)的所述延伸包括：
24.根据权利要求20至23中任一项所述的方法，其中所述第一信号扩增试剂和所述第二信号扩增试剂的所述核酸探针包括相同的序列或由其组成。
25.根据权利要求17至24中任一项所述的方法，其中所述第一复合物在表面上，并且其中所述方法进一步包括将锚定试剂固定在所述表面上，其中所述锚定试剂与所述经延伸的序列的锚定区结合，并且其中(i)的所述测量包括测量通过所述锚定试剂与所述表面结合的经延伸的序列的量。
26.根据权利要求17至24中任一项所述的方法，其中所述第一复合物在表面上，并且其中所述表面包括经固定的锚定试剂，其中所述锚定试剂与所述经延伸的序列的锚定区结合，并且其中(i)的所述测量包括测量通过所述锚定试剂与所述表面结合的经延伸的序列的量。
27.根据权利要求26所述的方法，其中在(h)的所述延伸之前或期间，将所述锚定试剂固定到所述表面。
28.根据权利要求17至27中任一项所述的方法，其中所述第一复合物在表面上，并且其中所述第二复合物在所述延伸之后与所述表面结合。
29.根据权利要求25至28中任一项所述的方法，其中所述锚定试剂和所述锚定区包括互补寡核苷酸。
30.根据权利要求25至29中任一项所述的方法，其中所述经延伸的序列在距所述表面上的所述第二复合物小于100μm的位置处与所述锚定试剂结合。
31.根据权利要求17至30中任一项所述的方法，其中(i)的所述测量包括将所述经延伸的序列与包括第二可检测标记的标记探针结合，并且测量所述表面上的(i)所述第二可检测标记或(ii)所述第一可检测标记和所述第二可检测标记的量。
32.根据权利要求31所述的方法，其包括测量所述表面上的所述第二可检测标记的量；或者测量所述表面上的所述第一可检测标记和所述第二可检测标记的量。
33.根据权利要求31或32所述的方法，其中所述经延伸的序列和所述标记探针包括互补寡核苷酸。
34.根据权利要求3至33中任一项所述的方法，其中所述第一可检测标记通过缀合接头与所述检测试剂连接。
35.根据权利要求4至34中任一项所述的方法，其中所述第一可检测标记通过缀合接头与所述第二检测试剂连接。
36.根据权利要求2至35中任一项所述的方法，其中所述表面包括颗粒，或者其中所述表面包括多孔板的孔。
37.根据权利要求25至36中任一项所述的方法，其中所述第一复合物包括捕获试剂，并且其中所述表面包括多个不同结合结构域，并且所述捕获试剂和所述锚定试剂位于所述表面上的两个不同结合结构域上；或者其中所述捕获试剂和所述锚定试剂位于所述表面上的相同结合结构域上。
38.根据权利要求25至37中任一项所述的方法，其中所述第一复合物包括捕获试剂，并且其中所述捕获试剂距所述表面上的所述锚定试剂小于1μm。
39.根据权利要求2至38中任一项所述的方法，其中所述表面包括电极，并且所述测量进一步包括向所述电极施加电压形式以产生电化学发光信号。
40.根据权利要求39所述的方法，其中所述表面包括颗粒，并且所述方法进一步包括在电极上收集所述颗粒，并且所述测量进一步包括向所述电极施加电压波形以产生电化学发光信号。
41.根据权利要求1至40中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括在(a)、(c)、(e)或(g)的所述接触之前，检测所述第一复合物。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述检测第一复合物包括测量所述第一可检测标记的量。
43.一种检测样品中的所关注的分析物的方法，所述方法包括
44.根据权利要求43所述的方法，其中所述捕获试剂固定在所述表面上。
45.根据权利要求43所述的方法，其中所述捕获试剂能够固定到所述表面，并且其中所述方法包括在步骤(a)之前或期间将所述捕获试剂固定到所述表面。
46.根据权利要求43至45所述的方法，其中(b)的所述延伸包括聚合酶链式反应(pcr)、连接酶链式反应(lcr)、链置换扩增(sda)、自我维持合成反应(3sr)、等温扩增或其组合。
47.根据权利要求43至46中任一项所述的方法，其中(b)的所述延伸包括将所述第一核酸探针与模板寡核苷酸结合，并且通过pcr延伸所述第一核酸探针；或者
48.根据权利要求43至47中任一项所述的方法，其中在(b)的所述延伸之后，所述第一复合物与所述表面结合。
49.根据权利要求43至48中任一项所述的方法，其进一步包括在步骤(b)之前或期间将所述第一锚定试剂固定到所述表面。
50.根据权利要求43至49中任一项所述的方法，其中所述第一锚定试剂和所述第一锚定区包括互补寡核苷酸。
51.根据权利要求43至50中任一项所述的方法，其中所述第一经延伸的序列和所述第一标记探针包括互补寡核苷酸。
52.根据权利要求43至51中任一项所述的方法，其中与所述第一经延伸的序列结合的所述第一标记探针与以下接触：(i)信号扩增试剂，所述信号扩增试剂与所述第一可检测标记特异性结合并且包括结合部分，以及(ii)可检测部分，所述可检测部分包括(1)所述结合部分的结合配偶体，以及(2)第二可检测标记中的一个或多个第二可检测标记。
53.根据权利要求52所述的方法，其中与所述第一经延伸的序列结合的所述第一标记探针首先与所述信号扩增试剂接触，然后与所述可检测部分接触；或者
54.根据权利要求52或53中任一项所述的方法，其中(d)的所述接触包括：(i)形成包括所述信号扩增试剂和所述可检测部分的信号扩增复合物；以及(ii)使与所述第一经延伸的序列结合的所述第一标记探针与所述信号扩增复合物接触。
55.根据权利要求54所述的方法，其中所述可检测部分包括所述结合部分的多个结合位点，和/或所述结合部分包括所述可检测部分的多个结合位点，其中所述信号扩增复合物包括多种信号扩增试剂，并且其中每种信号扩增试剂与一个或多个可检测部分结合。
56.根据权利要求52至55中任一项所述的方法，其中所述结合部分和所述可检测部分包括互补寡核苷酸、受体-配体对、抗原-抗体对、半抗原-抗体对、表位-抗体对、模拟表位-抗体对、适体-靶分子对或嵌入剂-靶分子对。
57.根据权利要求56所述的方法，其中所述结合部分包括寡核苷酸，并且所述可检测部分包括互补寡核苷酸以及第二可检测标记中的一个或多个第二可检测标记；或者
58.根据权利要求43至51中任一项所述的方法，其中与所述第一经延伸的序列结合的所述第一标记探针与以下接触：(i)信号扩增试剂，所述信号扩增试剂与所述第一可检测标记特异性结合并且包括酶；以及(ii)所述酶的底物。
59.根据权利要求43至51中任一项所述的方法，其中与所述第一经延伸的序列结合的所述第一标记探针与信号扩增试剂接触，所述信号扩增试剂与所述第一可检测标记特异性结合，并且(i)的所述测量包括测量所述第一可检测标记。
60.根据权利要求43至51中任一项所述的方法，其中与所述第一经延伸的序列结合的所述第一标记探针与信号扩增试剂接触，所述信号扩增试剂与所述第一可检测标记特异性结合，并且(i)的所述测量包括测量所述第一可检测标记、所述第二可检测标记或两者。
61.根据权利要求43至51中任一项所述的方法，其中与所述第一经延伸的序列结合的所述第一标记探针与信号扩增试剂接触，所述信号扩增试剂与所述第一可检测标记特异性结合并且包括第二核酸探针，由此形成包括所述信号扩增试剂和所述第一标记探针的第二复合物。
62.根据权利要求61所述的方法，其中(k)的所述延伸包括聚合酶链式反应(pcr)、连接酶链式反应(lcr)、链置换扩增(sda)、自我维持合成反应(3sr)、等温扩增或其组合。
63.根据权利要求61或62所述的方法，其中(k)的所述延伸包括将次级核酸探针与模板寡核苷酸结合，并且通过pcr延伸所述次级核酸探针；或者
64.根据权利要求61至63中任一项所述的方法，其进一步包括在(k)的所述延伸之前或期间将所述第二锚定试剂固定到所述表面。
65.根据权利要求61至64中任一项所述的方法，其中在(k)的所述延伸之后，所述第二复合物与所述表面结合。
66.根据权利要求61至65中任一项所述的方法，其中所述第二锚定试剂和所述第二锚定区包括互补寡核苷酸。
67.根据权利要求61至66中任一项所述的方法，其中所述第一锚定区和所述第二锚定区包括相同的寡核苷酸序列，或者其中所述第一锚定区和所述第二锚定区包括不同的寡核苷酸序列。
68.根据权利要求61至67中任一项所述的方法，其中(l)的所述测量包括将所述第二经延伸的序列与包括第二可检测标记的第二标记探针结合，并且测量所述表面上的(i)所述第二可检测标记或(ii)所述第一可检测标记和所述第二可检测标记的量。
69.根据权利要求68所述的方法，其中所述第二经延伸的序列和所述第二标记探针包括互补寡核苷酸。
70.根据权利要求69所述的方法，其中所述第一标记探针和所述第二标记探针包括相同的寡核苷酸序列，或者其中所述第一标记探针和所述第二标记探针包括不同的寡核苷酸序列。
71.根据权利要求43至70中任一项所述的方法，其中所述第一可检测标记通过缀合接头与所述第一标记探针连接。
72.根据权利要求43至71中任一项所述的方法，其中所述表面包括颗粒；或者其中所述表面包括多孔板的孔。
73.根据权利要求43至72中任一项所述的方法，其中所述表面包括多个不同结合结构域，并且所述捕获试剂和所述第一锚定试剂位于所述表面上的两个...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·肯坦，G·西加尔，A·K·塔克施瓦兹，
申请(专利权)人：中尺度技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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