改进的测定方法技术

本发明专利技术针对用于改进结合测定法中的测定特异性和性能的方法

【技术实现步骤摘要】
改进的测定方法
[0001]本申请是基于申请日为
2014
年3月
12
日，优先权日为
2013
年3月
13
日，申请号为
201910588439.3
，专利技术名称为：“改进的测定方法”的专利申请的分案申请
。
[0002]对相关申请的交叉引用
[0003]对分别于
2013
年3月
13
日提交的美国临时申请系列号
61/779,050
和
2013
年
12
月
23
日提交的
61/919,887
进行引用，其各自公开通过引用以其整体并入本文
。
专利

[0004]本专利技术涉及用于进行免疫分析的改进的方法
。
所述方法经设计以在免疫分析中放大信号并锚定其中采用的免疫分析复合物
。
[0005]专利技术背景
[0006]已经开发了大量关于采用结合反应的技术的文献，例如抗原抗体反应，核酸杂交和受体配体反应，用于对样品中感兴趣的分析物的灵敏测量
。
许多生物化学结合系统的高度特异性导致了在各种市场中许多有价值的分析方法和系统，包括基础研究，人用和兽用诊断，环境监控以及工业测试
。
可以通过直接测量在结合反应中分析物的参与来测量感兴趣的分析物的存在
。
在一些方法中，可以通过测量附接到一种或多种结合材料的可观察标记物来指示该参与
。
[0007]虽然夹心法免疫分析
(sandwich immunoassay)
形式在许多应用中提供了极好的灵敏度和特异性，一些分析物以过低的浓度存在无法通过传统的免疫分析技术检测
。
夹心法免疫分析的进行也可能因为检测抗体的非特异性结合以及包含高解离率抗体的夹心法混合物的不稳定性而被限制
。
然而，修改传统方法来改进灵敏度和特异性的努力通常导致更加复杂，劳动密集的方案，其可能由每一步的低效率而被阻碍，可能极大的影响分析的灵敏度和特异性
。
例如，在要求多个结合事件和
/
或反映的复杂分析中，如果任意一个事件或反应不太理想，整体分析的灵敏度和特异性可能变差
。
对于通过改进灵敏度，减少非特异性结合和改进夹心法复合物的稳定性改进夹心法免疫分析表现的新技术有需要
。
[0008]专利技术简述
[0009]本专利技术考虑以下的具体实施方案
。
不脱离本专利技术的精神和范围，由本领域的技术人员可以对本文所述的实施方案进行多种修改，增加和改变
。
这些修改，增加和改变意在落入权利要求的范围内
。
[0010]实施方案
(1)
一种在样品中检测感兴趣的分析物的方法，包含：使所述分析物结合到：
(i)
表面上的捕捉试剂，所述表面包含所述用于所述分析物的捕捉试剂，以及锚定试剂；和
(ii)
用于所述分析物的检测试剂，其与核酸探针相连；从而在所述表面上形成包含所述捕捉试剂，分析物和检测试剂的复合物；延伸所述探针以形成延伸的序列，其包含结合到锚定试剂的锚定区；将所述延伸的序列结合到所述锚定试剂；以及测量结合到所述表面的延伸序列的量
。
[0011]在实施方案
(1)
中，所述捕捉试剂可以是抗体，抗原，配体，受体，寡核苷酸，半抗原，表位，模拟位
(mimitope)
，或适体
(aptamer)。
在具体的实施方案中，所述捕捉试剂是抗
体
。
所述检测试剂可以是抗体，抗原，配体，受体，寡核苷酸，半抗原，表位，模拟位，或适体
。
在具体的实施方案中，所述检测试剂是抗体
。
在实施方案
(1)
的一个具体实施例中，所述捕捉和检测试剂是针对分析物的抗体
。
所述锚定试剂可以包括寡核苷酸序列，适体，适体配体，抗体，抗原，配体，受体，半抗原，表位，或模拟位；以及可选的，所述锚定区可以包括适体而所述锚定试剂可以包括适体配体
。
所述锚定区可以包含核酸序列而所述锚定试剂可以包括
DNA
结合蛋白
。
所述锚定试剂可以包括寡核苷酸序列而所述锚定试剂可以包括互补的寡核苷酸序列
。
所述锚定区可以包括单链寡核苷酸序列或双链寡核苷酸序列
。
[0012]实施方案
(1)
的结合步骤可以进一步包括所述锚定区和所述锚定试剂之间形成三螺旋
。
所述方法还可以进一步包含所述锚定区的变性，以在结合步骤之前暴露单链序列；在结合步骤之前将锚定区暴露于螺旋酶活性；和
/
或在结合步骤之前将所述锚定区暴露于核酸酶处理
。
在这一实施方案中，所述锚定区可以包含一个或多个半抗原修饰的碱基和所述锚定试剂可以包括一个或多个对于所述半抗原特异性的抗体；和
/
或所述锚定区可以包括一个或多个修饰的碱基而所述锚定试剂可以包括一个或多个对于所述配体特异性的受体
。
所述延伸的序列可以进一步包含一个或多个检测序列而测量步骤可以包括使所述延伸的序列与多个标记的探针接触，所述标记的探针与所述一个或多个检测序列互补；所述延伸的序列可以包括一个或多个修饰的碱基而测量步骤可以包括使所述延伸的序列与多个可检测的部分接触，所述可检测的部分能够结合所述一个或多个修饰的碱基；和
/
或所述延伸的序列可以包含一个或多个标记的碱基而测量步骤可以进一步包括检测所述一个或多个标记的碱基的存在
。
在这一实施方案中，所述一个或多个修饰的碱基包含适体，适体配体，抗体，抗原，配体，受体，半抗原，表位，或模拟位，而所述多个可检测的部分每一个包含所述一个或多个修饰的碱基的结合伴侣以及可检测标记物
。
所述一个或多个修饰的碱基可以包含链霉亲合素而所述多个可检测的部分每一个包含生物素和可检测标记物；和
/
或所述一个或多个修饰的碱基可以包含生物素而所述多个可检测的部分每一个包含链霉亲合素和可检测的标记物；和
/
或所述一个或多个修饰的碱基可以包含亲合素而所述多个可检测的部分每一个包含生物素和可检测标记物；和
/
或所述一个或多个修饰的碱基可以包含生物素而所述多个可检测的部分每一个包含亲合素和可检测标记物
。
[0013]实施方案
(1)
的第一个步骤可以包含使分析物以以下顺序结合到以下种类：
(i)
表面上的捕捉试剂；和
(ii)
用于所述分析物的检测试剂；或实施方案
(1)
的第一个步骤可以包含使分析物以以下顺序结合到以下种类：...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
用于检测样品中感兴趣的分析物的试剂盒，其在一个或多个管形瓶，容器或隔室中包含：
a.
表面，所述表面包含
(i)
用于所述分析物的捕捉试剂，和
(ii)
包含锚定序列的锚定试剂；和
b.
用于所述分析物的检测试剂，其中所述检测试剂连接到核酸探针
。2.
权利要求1的试剂盒，其中所述捕捉试剂，所述检测试剂或两者包含抗体，抗原，配体，受体，寡核苷酸，半抗原，表位，模拟位或适体
。3.
权利要求2的试剂盒，其中所述捕捉试剂包含抗体
。4.
权利要求2的试剂盒，其中所述检测试剂包含抗体
。...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：中尺度技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：