【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
1.本公开内容一般性地涉及分子生物学领域。更具体地，其涉及抗体或多肽的位点特异性递送的方法。2.相关技术基于抗体的治疗在30多年前进入临床并且已成为患有恶性病1,2、感染性疾病3,4和移植排斥5的患者的主流治疗剂选择。与传统化学治疗相比，这些生物治疗剂优先靶向呈递肿瘤相关抗原的细胞，导致治疗结局改善以及副作用降低6,7,8,9。尽管它们对肿瘤抗原具有高亲和力，但肿瘤组织穿透差以及治疗性抗体在脑和骨中的不均匀分布显著限制了它们在这些组织中治疗疾病的效力。无法在这些组织中的整个肿瘤中递送有效的抗体剂量不仅导致治疗失败，还导致获得性药物抗性的发生10。已表明，暴露于亚治疗性抗体水平促进了逃避抗体介导之杀伤的肿瘤细胞能力11,12。此外，试图确保抗体在肿瘤生态位(niche)中的有效浓度通常导致在其他组织中的高浓度，从而导致不良全身性副作用，所述副作用可限制治疗剂的使用或将其排除。因此，为了优化这些药剂的临床潜力，需要改善在全身递送之后抗体在特定组织中的分布和肿瘤穿透的策略。尽管5年存活率大于90％，但20％至40％的乳腺癌幸存者将最终经历向远隔器官(distant organ)的转移，甚至在初始治疗之后数年经历13。骨是乳腺癌转移的最常见的组织14,15。由于血管化密度相对低以及针对穿透存在物理障碍，因此对骨微环境给药已被证明是困难的。基于抗体的治疗由于这些药剂的大分子尺寸而面临特殊的分布困难。因此，对原发性乳腺肿瘤表现出优异效力的治疗性抗体在患有骨转移的患者中仅产生次优响应。例如，在原发性乳腺肿瘤中成功靶向人表皮生长因子受体2(human epiderma
技术介绍
技术实现思路
1、在某些实施方案中，本公开内容提供用于骨靶向多肽或蛋白质(例如，抗体)的方法，所述骨靶向多肽或蛋白质经改造以包含与骨羟基磷灰石(ha)选择性结合的至少一种骨归巢肽。在一个实施方案中，本公开内容提供用于骨靶向抗体的方法，所述骨靶向抗体经改造以包含与骨羟基磷灰石(ha)选择性结合的至少一种骨归巢肽。在另一个实施方案中，本公开内容提供了一种或更多种骨靶向多肽，所述骨靶向多肽经改造以包含与骨ha选择性结合的至少一种骨归巢肽。
2、在一些方面中，至少一种骨归巢肽插入在抗体的允许内部位点(permissiveinternal site)处。在某些方面中，至少一种骨归巢肽插入在抗体的轻链(light chain，lc)、重链(heavy chain，ch1)和/或c端(c-terminus，ct)处。
3、在一些方面中，至少一种骨归巢肽插入在一种或更多种多肽的c端或n端处。
4、在某些方面中，抗体或多肽包含两种、三种或四种骨归巢肽。在一些具体方面中，骨归巢肽是l-asp3、l-asp4、l-asp5、l-asp6、l-asp7、l-asp8、l-asp9或l-asp10。在一些方面中，骨归巢肽包含至少连续三个天冬氨酸，例如至少四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个天冬氨酸。在一些具体方面中，骨归巢肽是l-asp6。
5、在一些方面中，抗体是单克隆抗体、双特异性抗体、fab’、f(ab’)2、f(ab’)3、单价scfv、二价scfv、单结构域抗体或纳米抗体。在一些具体方面中，抗体是免疫检查点抑制剂。在一些方面中，抗体是抗her2抗体、抗cd99抗体、抗igf-ir抗体、抗pd-l1、抗pd-1、抗ctla4抗体、抗siglec-2抗体、抗siglec-3抗体、抗siglec-5抗体、抗siglec-6抗体、抗siglec-7抗体、抗siglec-8抗体、抗siglec9抗体、抗siglec-10抗体、抗siglec-11抗体、抗siglec-15抗体、抗rankl抗体、抗egfr抗体、抗vegfr抗体、抗cd20抗体、抗cd22抗体、抗cd52抗体、抗trop-2抗体、抗cd30抗体、抗cd152抗体、抗il-6r抗体、抗gd2抗体或抗tgfβ抗体。在一些方面，抗体是抗cd99抗体。
6、在一些方面中，一种或更多种多肽包含肾上腺素能激动剂、抗凋亡因子、凋亡抑制剂、细胞因子受体、细胞因子、细胞毒素、红细胞生成剂、谷氨酸脱羧酶、糖蛋白、生长因子、生长因子受体、激素、激素受体、干扰素、白介素、白介素受体、激酶、激酶抑制剂、神经生长因子、netrin、神经活性肽、神经活性肽受体、神经源性因子、神经源性因子受体、神经毡蛋白(neuropilin)、神经营养因子(neurotrophic factor)、神经营养因子(neurotrophin)、神经营养因子受体、n-甲基-d-天冬氨酸拮抗剂、丛蛋白(plexin)、蛋白酶、蛋白酶抑制剂、蛋白脱羧酶、蛋白激酶、蛋白激酶抑制剂、蛋白水解蛋白、蛋白水解蛋白抑制剂、脑信号蛋白(semaphorin)、脑信号蛋白受体、血清素(serotonin)转运蛋白、血清素摄取抑制剂、血清素受体、丝酶抑制蛋白(serpin)、丝酶抑制蛋白受体或肿瘤抑制物。在一些具体方面中，多肽包含细胞因子。在一些具体方面中，细胞因子是il-6。在一些具体方面中，il-6在c端处包含骨归巢肽。
7、在另一些方面中，抗体或多肽与药物缀合。在一些方面中，药物是单甲基奥瑞他汀e(monomethyl auristatin e，mmae)、奥唑米星(ozogamicin)、tiuxetan、vedotin、pasudotoxtdfx、vedotin、mafodotin、加利车霉素(calicheamicin)、美登素(maytansine)或德卢替康(deruxtecan)。在一些具体方面中，药物是抗有丝分裂药物，例如单甲基奥瑞他汀e(mmae)。
8、在一些方面中，抗体是抗her2抗体。例如，抗体是曲妥珠单抗(赫赛汀)、帕妥珠单抗(pertuzumab)(perjeta)或阿替利珠单抗(atezolizumab)。在一些具体方面中，抗体是曲妥珠单抗，例如曲妥珠单抗与mmae缀合。在一些具体方面中，骨归巢肽插入在曲妥珠单抗的残基a153、a165和/或g449处。
9、在某些方面中，抗体具有与tras-lc(seq id no:3至4)、tras-ch1(seq id no:5至6)、tras-ct(seq id no:7至8)、tras-lc/ch1(seq id no:9至10)、tras-lc/ct(seq id no:11至12)、tras-ch1/ct(seq id no:13至14)或tras-lc/ch1/ct(seq id no:15至16)具有至少90％(例如，91％、92％、93％、94％、95本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.骨靶向抗体，其经改造以包含与骨羟基磷灰石(HA)选择性结合的至少一种骨归巢肽。
2.权利要求1所述的抗体，其中所述至少一种骨归巢肽插入在所述抗体的允许内部位点处。
3.权利要求1或2所述的抗体，其中所述至少一种骨归巢肽插入在所述抗体的轻链(LC)、重链(CH1)和/或C端(CT)处。
4.权利要求1至3中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含两种、三种或四种骨归巢肽。
5.权利要求1至4中任一项所述的抗体，其中所述骨归巢肽是L-Asp3、L-Asp4、L-Asp5、L-Asp6、L-Asp7、L-Asp8、L-Asp9或L-Asp10。
6.权利要求1至4中任一项所述的抗体，其中所述骨归巢肽是L-Asp6。
7.权利要求1至6中任一项所述的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体、双特异性抗体、Fab’、F(ab’)2、F(ab’)3、单价scFv、二价scFv、单结构域抗体或纳米抗体。
8.权利要求1至7中任一项所述的抗体，其中所述抗体是免疫检查点抑制剂。
9.权利要求1至8中任一项所述的抗体
10.权利要求1至8中任一项所述的抗体，其中所述抗体是抗CD99抗体。
11.权利要求1至9中任一项所述的抗体，其中所述抗体与药物缀合。
12.权利要求11所述的抗体，其中所述药物是单甲基奥瑞他汀E(MMAE)、奥唑米星、tiuxetan、vedotin、pasudotoxtdfx、vedotin、mafodotin、加利车霉素、美登素或德卢替康。
13.权利要求11所述的抗体，其中所述药物是抗有丝分裂药物。
14.权利要求13所述的抗体，其中所述抗有丝分裂药物是单甲基奥瑞他汀E(MMAE)。
15.权利要求1至9中任一项所述的抗体，其中所述抗体是抗HER2抗体。
16.权利要求1至15中任一项所述的抗体，其中所述抗体是曲妥珠单抗(赫赛汀)、帕妥珠单抗(Perjeta)或阿替利珠单抗。
17.权利要求1至16中任一项所述的抗体，其中所述抗体是曲妥珠单抗。
18.权利要求17所述的抗体，其中所述曲妥珠单抗与MMAE缀合。
19.权利要求1至17中任一项所述的抗体，其中所述骨归巢肽插入在曲妥珠单抗的残基A153、A165和/或G449处。
20.权利要求1至19中任一项所述的抗体，其中所述抗体具有与Tras-LC(SEQ ID NO:3至4)、Tras-CH1(SEQ ID NO:5至6)、Tras-CT(SEQ ID NO:7至8)、Tras-LC/CH1(SEQ ID NO:9至10)、Tras-LC/CT(SEQ ID NO:11至12)、Tras-CH1/CT(SEQ ID NO:13至14)或Tras-LC/CH1/CT(SEQ ID NO:15至16)具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
21.权利要求1至20中任一项所述的抗体，其中所述抗体具有与Tras-LC(SEQ ID NO:3至4)、Tras-CH1(SEQ ID NO:5至6)、Tras-CT(SEQ ID NO:7至8)、Tras-LC/CH1(SEQ ID NO:9至10)、Tras-LC/CT(SEQ ID NO:11至12)、Tras-CH1/CT(SEQ ID NO:13至14)或Tras-LC/CH1/CT(SEQ ID NO:15至16)具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。
22.权利要求1至21中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含Tras-LC(SEQ ID NO:3至4)、Tras-CH1(SEQ ID NO:5至6)、Tras-CT(SEQ ID NO:7至8)、Tras-LC/CH1(SEQ ID NO:9至10)、Tras-LC/CT(SEQ ID NO:11至12)、Tras-CH1/CT(SEQ ID NO:13至14)或Tras-LC/CH1...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.骨靶向抗体，其经改造以包含与骨羟基磷灰石(ha)选择性结合的至少一种骨归巢肽。
2.权利要求1所述的抗体，其中所述至少一种骨归巢肽插入在所述抗体的允许内部位点处。
3.权利要求1或2所述的抗体，其中所述至少一种骨归巢肽插入在所述抗体的轻链(lc)、重链(ch1)和/或c端(ct)处。
4.权利要求1至3中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含两种、三种或四种骨归巢肽。
5.权利要求1至4中任一项所述的抗体，其中所述骨归巢肽是l-asp3、l-asp4、l-asp5、l-asp6、l-asp7、l-asp8、l-asp9或l-asp10。
6.权利要求1至4中任一项所述的抗体，其中所述骨归巢肽是l-asp6。
7.权利要求1至6中任一项所述的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体、双特异性抗体、fab’、f(ab’)2、f(ab’)3、单价scfv、二价scfv、单结构域抗体或纳米抗体。
8.权利要求1至7中任一项所述的抗体，其中所述抗体是免疫检查点抑制剂。
9.权利要求1至8中任一项所述的抗体，其中所述抗体是抗her2抗体、抗cd99抗体、抗igf-ir抗体、抗pd-l1、抗pd-1、抗ctla4抗体、抗siglec-2抗体、抗siglec-3抗体、抗siglec-5抗体、抗siglec-6抗体、抗siglec-7抗体、抗siglec-8抗体、抗siglec9抗体、抗siglec-10抗体、抗siglec-11抗体、抗siglec-15抗体、抗rankl抗体、抗egfr抗体、抗vegfr抗体、抗cd20抗体、抗cd22抗体、抗cd52抗体、抗trop-2抗体、抗cd30抗体、抗cd152抗体、抗il-6r抗体、抗gd2抗体或抗tgfβ抗体。
10.权利要求1至8中任一项所述的抗体，其中所述抗体是抗cd99抗体。
11.权利要求1至9中任一项所述的抗体，其中所述抗体与药物缀合。
12.权利要求11所述的抗体，其中所述药物是单甲基奥瑞他汀e(mmae)、奥唑米星、tiuxetan、vedotin、pasudotoxtdfx、vedotin、mafodotin、加利车霉素、美登素或德卢替康。
13.权利要求11所述的抗体，其中所述药物是抗有丝分裂药物。
14.权利要求13所述的抗体，其中所述抗有丝分裂药物是单甲基奥瑞他汀e(mmae)。
15.权利要求1至9中任一项所述的抗体，其中所述抗体是抗her2抗体。
16.权利要求1至15中任一项所述的抗体，其中所述抗体是曲妥珠单抗(赫赛汀)、帕妥珠单抗(perjeta)或阿替利珠单抗。
17.权利要求1至16中任一项所述的抗体，其中所述抗体是曲妥珠单抗。
18.权利要求17所述的抗体，其中所述曲妥珠单抗与mmae缀合。
19.权利要求1至17中任一项所述的抗体，其中所述骨归巢肽插入在曲妥珠单抗的残基a153、a165和/或g449处。
20.权利要求1至19中任一项所述的抗体，其中所述抗体具有与tras-lc(seq id no:3至4)、tras-ch1(seq id no:5至6)、tras-ct(seq id no:7至8)、tras-lc/ch1(seq id no:9至10)、tras-lc/ct(seq id no:11至12)、tras-ch1/ct(seq id no:13至14)或tras-lc/ch1/ct(seq id no:15至16)具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
21.权利要求1至20中任一项所述的抗体，其中所述抗体具有与tras-lc(seq id no:3至4)、tras-ch1(seq id no:5至6)、tras-ct(seq id no:7至8)、tras-lc/ch1(seq id no:9至10)、tras-lc/ct(seq id no:11至12)、tras-ch1/ct(seq id no:13至14)或tras-lc/ch1/ct(seq id no:15至16)具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。
22.权利要求1至21中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含tras-lc(seq id no:3至4)、tras-ch1(seq id no:5至6)、tras-ct(seq id no:7至8)、tras-lc/ch1(seq id no:9至10)、tras-lc/ct(seq id no:11至12)、tras-ch1/ct(seq id no:13至14)或tras-lc/ch1/ct(seq id no:15至16)。
23.权利要求1至22中任一项所述的抗体，其中与不包含所述骨归巢肽的抗体相比，所述骨靶向抗体具有提高的对ha的结合亲和力。
24.权利要求1至23中任一项所述的抗体，其中所述骨靶向抗体对ha的结合亲和力是不包含所述骨归巢肽的抗体的两倍至三倍高。
25.在对象中治疗或预防骨病的方法，其包括向所述对象施用有效量的权利要求1至23中任一项所述的骨靶向抗体。
26.权利要求25所述的方法，其中所述对象患有骨癌或骨转移。
27.权利要求26所述的方法，其中所述骨癌是尤因肉瘤、骨肉瘤或软骨肉瘤。
28.权利要求26所述的方法，其中所述骨转移来自乳腺癌、骨髓瘤、肾癌、肺癌、前列腺癌、甲状腺癌或膀胱癌。
29.权利要求25至28中任一项所述的方法，其中所述乳腺癌是三阴性乳腺癌。
30.权利要求28至29中任一项所述的方法，其中所述乳腺癌是her2阴性乳腺癌。
31.权利要求28至30中任一项所述的方法，其中所述乳腺癌是her2阳性乳腺癌。
32.权利要求25至31中任一项所述的方法，其中所述骨病是：其中所述骨病是骨质疏松症、骨软化症、牙周炎、类风湿性关节炎、代谢性骨病、甲状旁腺病症、类固醇诱导的骨质疏松、化学治疗诱导的骨质丢失、绝经前骨质丢失、脆性和复发性骨折、肾性骨营养不良、骨感染或佩吉特病。
33.权利要求25至34中任一项所述的方法，其中所述骨靶向抗体导致治疗性抗体在骨肿瘤生态位处的浓度提高、抑制骨中的癌症发生和/或限制向其他器官的继发性转移。
34.权利要求25至32中任一项所述的方法，其中所述骨靶向抗体导致微转移诱导的溶骨性病变减少。
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