【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药原料制备，具体涉及一种从红法夫酵母发酵液中同步制备不同几何构型虾青素的方法。
技术介绍
1、虾青素(astaxanthin，c40h52o4)，是一种天然的酮式类胡萝卜素，在自然界中广泛存在，具有极强的抗氧化性、抑制肿瘤生长、抗紫外线、促进色素形成、提高机体免疫力等功能。根据虾青素分子所含双键的线性不同进而影响其几何构型，分为全反式虾青素和9-顺式、13-顺式、15-顺式、9,13-顺式、13,15-顺式、9,15-顺式和9,13,15-顺式等多种几何异构体。天然的虾青素主要存在于虾蟹壳、雨生红球藻、佐夫色绿藻、红法夫酵母等。合成虾青素需要经过多步化学和生物催化反应，难免引入杂质化学物，因而应用范围有限。虾青素和红法夫酵母均是农业农村部《饲料添加剂品种目录(2013)》规定的用于水产养殖动物和犬猫的着色剂。实际养殖生产中，渔民对天然的红法夫酵母的需求要高于合成虾青素，因虾青素遇热不稳定，决定了红法夫酵母只能拌料投喂，但存在流失大、生物利用度不高等，限制了其在生产上的应用。因此，红法夫酵母中的虾青素的提取和应用技术引起了越来越多的关注。
2、研究表明顺式虾青素尤其是9-顺式虾青素(3s,3's-9顺式)在抗氧化效果要明显优于反式虾青素，反式虾青素尤其是3s,3's-虾青素的对于小鼠脾脏细胞的增殖作用和对巨噬细胞的吞噬能力的免疫活性优于顺式虾青素。因此，顺/反式虾青素的可控提取将进一步明确和扩大虾青素的应用范围。
3、中国专利技术专利cn202011052257.3公开了一种从红法夫酵母提取
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种从红法夫酵母发酵液中同步提取顺反式虾青素的方法，从而弥补现有技术的不足。
2、本专利技术所提供的一种从红法夫酵母发酵液中同步提取顺反式虾青素的方法，包括如下的步骤：
3、1)制备红法夫酵母发酵菌泥
4、将红法夫酵母发酵液进行离心获得菌泥备用；
5、2)提取顺式虾青素粗提取液
6、将菌泥加入到8-10倍质量的丙酮中，于50-55℃孵育5-10min，加入同等体积二氯甲烷，8000-10000r/min下均质破碎，超声波提取后，于4000r/min离心1-2min，留取上清橙红色液体，为顺式虾青素粗提液；
7、3)提取反式虾青素粗提取液
8、将菌泥加入8-10倍质量的二甲基亚砜(dmso)中，在50-55℃孵育5-10min，加入同等体积丙酮和1倍体积甲基叔丁基醚，8000-10000r/min下均质破碎1-2min，采用28-40khz的超声波提取3-5min，于4000r/min离心1-2min，留取上清橙红色液体为反式虾青素粗提液；
9、4)纯化顺式虾青素
10、采用100目硅胶干法装层析柱，径高比为1:10-15，使用1：1(v:v)的丙酮和二氯甲烷混合液平衡硅胶柱3-5个体积待用；取100目硅胶与顺式虾青素粗提液按1:1质量比混合，在40～45℃、真空度0.1mpa下旋蒸，得顺式虾青素硅胶干粉；将顺式虾青素硅胶干粉按照1-3％的体积比上样，进行硅胶柱层析；洗脱液为4％甲醇水溶液：丙酮：二氯甲烷
11、＝4:100:100(v:v:v)，收取红色部分洗脱液为顺式虾青素精制液，在40～45℃、真空度0.1mpa下避光旋蒸，得顺式虾青素；
12、5)纯化反式虾青素
13、采用100目硅胶干法装层析柱，径高比为1:10-15，使用4：81：15(v：v：v)的1％甲酸溶液：甲醇：甲基叔丁基醚平衡硅胶柱3-5个体积待用；取100目硅胶与反式虾青素粗提液按1:1质量比混合，在40～45℃、真空度0.1mpa下旋蒸，得反式虾青素硅胶干粉；取上述干粉按照1-3％的体积比上样，进行硅胶柱层析；洗脱液为4：81：15(v：v：v)的1％甲酸溶液：甲醇：甲基叔丁基醚，避光收取红色部分洗脱液为反式虾青素精制液，在40～45℃、真空度0.1mpa下避光旋蒸，得反式虾青素。
14、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
15、本专利技术通过控制萃取、提炼条件，实现了不同几何构型虾青素的同步制备，能满足不同生理活性产品对虾青素的要求；通过控制干法上样柱层析分离纯化条件，得到高纯顺式和反式虾青素，顺式虾青素纯度可达到92％(hplc纯)以上，反式虾青素纯度可达99％(hplc纯)以上，进而应用于生物医药、功能制品领域。
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1.一种从红法夫酵母发酵液中同步提取顺反式虾青素的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的2)中是将菌泥加入到8-10倍质量的丙酮中。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的2)中是加入丙酮等体积的二氯甲烷。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的2)中进行离心，是在4000r/min进行离心。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的3)中是将菌泥加入8-10倍质量的二甲基亚砜中，加入同等体积丙酮和1倍体积甲基叔丁基醚。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的3)中在8000-10000r/min均质破碎，采用28-40KHZ的超声波提取3-5min，于4000r/min离心1-2min。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的4)中的洗脱液，其中4％甲醇水溶液：丙酮：二氯甲烷的体积比为4:100:100。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的4)或5)中的层析柱，其径高比为1:10-15。>
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的5)中的洗脱液，其中1％甲酸溶液：甲醇：甲基叔丁基醚的体积比为4：81：15。
...【技术特征摘要】
1.一种从红法夫酵母发酵液中同步提取顺反式虾青素的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的2)中是将菌泥加入到8-10倍质量的丙酮中。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的2)中是加入丙酮等体积的二氯甲烷。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的2)中进行离心，是在4000r/min进行离心。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的3)中是将菌泥加入8-10倍质量的二甲基亚砜中，加入同等体积丙酮和1倍体积甲基叔丁基醚。
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【专利技术属性】
技术研发人员：刘天红，王颖，李红艳，纪蕾，孙元芹，
申请(专利权)人：山东省海洋科学研究院青岛国家海洋科学研究中心，
类型：发明
国别省市：
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