【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生化检测，特别是涉及一种g6pd酶活检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
1、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（g6pd）缺乏症是一种遗传性疾病，是由于红细胞膜的g6pd缺陷，导致红细胞戊糖磷酸途径中谷胱甘肽还原酶的辅酶——还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（nadph）生成减少，使得维持红细胞膜稳定性的还原型谷胱甘肽生成减少进而不能抵抗氧化损伤，患者在感染、氧化应激、食物或药物诱发等情况下，可发生急性溶血性贫血、高胆红素血症，严重者可致核黄疸，甚至危及生命。
2、目前，g6pd酶活检测通常采用荧光定量分析法，其也是目前新生儿g6pd筛查的推荐方法，但是这种方法的结果读取依赖于仪器设备，对于基础设施差的地区，想要开展g6pd筛查将会面临硬件和技术上的问题，例如cn201110394189.3公开方法依赖于荧光激发，需要配套设备读取荧光。尽管雅培的binaxnow® g6pd test试剂盒可以直接读取，但是血液的颜色和底物的反应的颜色混合在一起，不利于结果的判读。而access bio公司的产品carestart™和专利us9575056中，g6pd的酶与底物在层析过程中反应，均通过层析法将血液和反应产物逐渐分离，反应产物被稀释成长条状，且分布不匀，不利于判读；并且，血液样本和层析液体需要分别加入不同的孔内，相对于液体中的反应，层析过程中的反应没有液体反应可靠性高。此外，在临床上，针对疑似缺陷的样本，往往还需要通过核酸检测做基因型鉴定，然而现有技术的检测后的反应产物会被当废弃物处理，反应物不能用于二次检测。
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技术实现思路
1、本申请的目的是提供一种g6pd酶活检测试剂盒及其制备方法。
2、本申请采用了以下技术方案：
3、本申请的一方面公开了一种g6pd酶活的检测试剂盒，包括：反应管和检测卡，所述反应管内含有检测试剂，所述检测试剂包含d-葡萄糖-6-磷酸二钠盐、烟酰胺腺嘌呤双核苷酸磷酸盐、吩嗪硫酸甲酯和四氮唑蓝，所述检测卡包括依次层叠设置的面板、结合垫、吸附垫和底板，所述面板还设有加样孔且所述加样孔位于所述结合垫上方，其中，所述结合垫配置为拦截反应后的显色物质和待测样本中的核酸，所述吸附垫配置为吸附液体和所述待测样本中的血红蛋白。
4、需要说明的是，本申请的检测试剂盒中，通过将待测血液样本加至反应管中与检测试剂接触，若待测血液样本中的g6pd酶活正常，则d-葡萄糖-6-磷酸二钠盐和烟酰胺腺嘌呤双核苷酸磷酸盐（napd+）会通过酶的作用生成nadph，nadph作为电子供体，吩嗪硫酸甲酯能够作为电子穿梭载体，接受从nadph传递过来的电子，并进一步将这些电子传递给四氮唑蓝，进而使四氮唑蓝生成蓝紫色结晶物质（也即显色物质）。将反应后的样品滴加至检测卡的加样孔中，其中可溶性的血红蛋白能够穿透结合垫并被吸附垫所吸附，而显色物质无法通过结合垫并保留在结合垫上，由此能够减少或消除血红蛋白对显色结果的视觉干扰，进而能够通过肉眼直接读取结果，无需紫外照射或依赖于仪器设备来读取结果。此外，待测血液样本中的核酸被结合垫拦截，由此，能够从结合垫中取样用于核酸检测，避免二次采样或血液样本的保存。
5、本申请的一种实现方式中，所述结合垫所述结合垫为尼龙膜，孔径为0.4μm至1.2μm。需要说明的是，尼龙膜是较理想的核酸固相支持物，核酸是长链高分子，容易与膜结合；该孔径的尼龙膜能够拦截显色物质并使血红蛋白通过。
6、本申请的一种实现方式中，所述吸附垫的吸水性参数≥3000g/m2。需要说明的是，在这种情况下，能够较好地吸附液体进而有利于显色物质的显色。
7、本申请的一种实现方式中，所述底板设有卡槽，所述卡槽用于固定所述吸附垫。需要说明的是，在这种情况下，能够提高检测卡的稳固性。
8、本申请的一种实现方式中，所述检测试剂通过使含有所述检测试剂的溶液添加至试剂垫中进行干燥而制得，或者通过对含有所述检测试剂的溶液进行冻干而制得。需要说明的是，在这种情况下，能够提高检测试剂的稳定性，在检测试剂盒常温保存的情况下，也能够长久地保持检测的稳定性，也即检测试剂盒能够在常温进行保存，减少运输和保存成本。
9、本申请的一种实现方式中，所述检测试剂通过使含有所述检测试剂的溶液涂布至玻璃纤维纸上再进行干燥而制得，或者通过对含有所述检测试剂的溶液添加聚乙二醇至终浓度为0.01g/ml再进行冻干而制得。
10、本申请的一种实现方式中，所述检测试剂包括由第一溶液经干燥或冻干获得的第一干试剂和由第二溶液经干燥或冻干获得的第二干试剂，所述第一溶液含有吩嗪硫酸甲酯、氯化镁、d-葡萄糖-6-磷酸二钠盐、烟酰胺腺嘌呤双核苷酸磷酸盐和海藻糖，所述第二溶液含有四氮唑蓝和皂素。需要说明的是，将检测试剂分为第一干试剂和第二干试剂，能够进一步提高试剂的稳定性，具体来说，两种试剂混合在一起，在受潮或者有电子供体的情况下会反应进而导致试剂的有效期缩短失效，拆分为两个干试剂可以避免试剂间的反应，提高试剂在室温下的稳定性。其中，氯化镁的镁离子能够激活和促进g6pd酶发挥作用，促进反应进行；海藻糖能够提高干燥后试剂的稳定性，从而提高酶活性检测的准确性；皂素能够有利于裂解红细胞，并增加干试剂的水溶性和分散性，进而促进反应的进行，并提高检测准确性。
11、本申请的一种实现方式中，所述第一溶液中含有0.1至1mg/ml的吩嗪硫酸甲酯、1.5mm至20mm的氯化镁、1至15mg/ml的d-葡萄糖-6-磷酸二钠盐、1至20mg/ml的烟酰胺腺嘌呤双核苷酸磷酸盐和质量分数1%至6%的海藻糖，所述第二溶液含有0.4至10mg/ml的四氮唑蓝和质量分数0.1%至5%的皂素。需要说明的是，在这种情况下，能够有利于提供适宜含量的检测试剂，进而有利于反应的进行，并提高检查准确性。还需要说明的是，本申请中，质量分数是指质量体积比（w/v），例如质量分数为1%，是指浓度为1g/100ml。
12、本申请的一种实现方式中，所述第一溶液中含有0.5mg/ml的吩嗪硫酸甲酯、5mm的氯化镁、5mg/ml的d-葡萄糖-6-磷酸二钠盐、7mg/ml的烟酰胺腺嘌呤双核苷酸磷酸盐和质量分数4%的海藻糖，所述第二溶液含有4mg/ml的四氮唑蓝和质量分数1%的皂素。
13、本申请的另一方面公开了一种g6pd酶活的检测试剂盒的制备方法，包括将检测试剂置于反应管中，以及使面板、结合垫、吸附垫和底板依次层叠设置得到检测卡，其中，所述检测试剂包含d-葡萄糖-6-磷酸二钠盐、烟酰胺腺嘌呤双核苷酸磷酸盐、吩嗪硫酸甲酯和四氮唑蓝，所述面板设有加样孔且所述加样孔位于所述结合垫上方，所述结合垫配置为拦截反应后的显色物质和待测样本中的核酸，所述吸附垫配置为吸附液体和所述待测样本中的血红蛋白。
14、需要说明的是，本申请的制备方法制备得到的检测试剂盒，通过将待测血液样本加至反应本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测试剂盒，所述检测试剂盒用于检测待测血液样本中的G6PD酶活，其特征在于，包括：反应管和检测卡，所述反应管内含有检测试剂，所述检测试剂包含D-葡萄糖-6-磷酸二钠盐、烟酰胺腺嘌呤双核苷酸磷酸盐、吩嗪硫酸甲酯和四氮唑蓝，所述检测卡包括依次层叠设置的面板、结合垫、吸附垫和底板，所述面板还设有加样孔且所述加样孔位于所述结合垫上方，其中，所述结合垫配置为拦截反应后的显色物质和所述待测血液样本中的核酸，所述吸附垫配置为吸附液体和所述待测血液样本中的血红蛋白。
2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述结合垫为尼龙膜，孔径为0.4μm至1.2μm。
3.根据权利要求1或2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述吸附垫的吸水性参数≥3000g/m2。
4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述底板设有卡槽，所述卡槽用于固定所述吸附垫。
5.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂通过使含有所述检测试剂的溶液添加至试剂垫中进行干燥而制得，或者通过对含有所述检测试剂的溶液进行冻干而制得。
6.根据权
7.根据权利要求5或6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂包括由第一溶液经干燥或冻干获得的第一干试剂和由第二溶液经干燥或冻干获得的第二干试剂，所述第一溶液含有吩嗪硫酸甲酯、氯化镁、D-葡萄糖-6-磷酸二钠盐、烟酰胺腺嘌呤双核苷酸磷酸盐和海藻糖，所述第二溶液含有四氮唑蓝和皂素。
8.根据权利要求7所述的检测试剂盒，其特征在于，所述第一溶液含有0.1至1mg/mL的吩嗪硫酸甲酯、1.5mM至20mM的氯化镁、1至15mg/mL的D-葡萄糖-6-磷酸二钠盐、1至20mg/mL的烟酰胺腺嘌呤双核苷酸磷酸盐和质量分数1%至6%的海藻糖，所述第二溶液含有0.4至10mg/mL的四氮唑蓝和质量分数0.1%至5%的皂素。
9.根据权利要求7所述的检测试剂盒，其特征在于，所述第一溶液含有0.5mg/mL的吩嗪硫酸甲酯、5mM的氯化镁、5mg/mL的D-葡萄糖-6-磷酸二钠盐、7mg/mL的烟酰胺腺嘌呤双核苷酸磷酸盐和4%的海藻糖，所述第二溶液含有4mg/mL的四氮唑蓝和1%的皂素。
10.一种G6PD酶活的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括将检测试剂置于反应管中，以及使面板、结合垫、吸附垫和底板依次层叠设置得到检测卡，其中，所述检测试剂包含D-葡萄糖-6-磷酸二钠盐、烟酰胺腺嘌呤双核苷酸磷酸盐、吩嗪硫酸甲酯和四氮唑蓝，所述面板还设有加样孔且所述加样孔位于所述结合垫上方，所述结合垫配置为拦截反应后的显色物质和待测血液样本中的核酸，所述吸附垫配置为吸附液体和所述待测血液样本中的血红蛋白。
...【技术特征摘要】
1.一种检测试剂盒，所述检测试剂盒用于检测待测血液样本中的g6pd酶活，其特征在于，包括：反应管和检测卡，所述反应管内含有检测试剂，所述检测试剂包含d-葡萄糖-6-磷酸二钠盐、烟酰胺腺嘌呤双核苷酸磷酸盐、吩嗪硫酸甲酯和四氮唑蓝，所述检测卡包括依次层叠设置的面板、结合垫、吸附垫和底板，所述面板还设有加样孔且所述加样孔位于所述结合垫上方，其中，所述结合垫配置为拦截反应后的显色物质和所述待测血液样本中的核酸，所述吸附垫配置为吸附液体和所述待测血液样本中的血红蛋白。
2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述结合垫为尼龙膜，孔径为0.4μm至1.2μm。
3.根据权利要求1或2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述吸附垫的吸水性参数≥3000g/m2。
4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述底板设有卡槽，所述卡槽用于固定所述吸附垫。
5.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂通过使含有所述检测试剂的溶液添加至试剂垫中进行干燥而制得，或者通过对含有所述检测试剂的溶液进行冻干而制得。
6.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂通过使含有所述检测试剂的溶液涂布至玻璃纤维纸上再进行干燥而制得，或者通过对含有所述检测试剂的溶液添加聚乙二醇至终浓度为0.01g/ml再进行冻干而制得。
7.根据权利要求5或6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄玉斌，王金苹，廖生赟，危梅娟，
申请(专利权)人：深圳市亿立方生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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