【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及酶检测领域，具体涉及一种核酸酶检测探针及其应用。
技术介绍
1、核酸酶，包括脱氧核糖核酸酶(dnase)和核糖核酸酶(rnase)，是一类可以将聚核苷酸链的磷酸二酯键切断从而降解dna和rna分子的水解酶。核酸酶可分为：核酸外切酶与核酸内切酶。核酸外切酶从dna或rna链的一端逐个水解下单核苷酸。核酸内切酶则水解多核苷酸内部的磷酸二酯键。核酸酶广泛存在于环境、物料和耗材表面，在一些如离心管、96孔板、移液器枪头等生物材料中更是以相对较高的浓度存在，常见的分子生物学试剂，如反应缓冲液、rna/dna纯化和储存的缓冲液、逆转录酶和rna聚合酶等工具酶中同样存在rnase/dnase污染问题。生物制品生产过程中，也大量存在核酸酶的残留和污染的可能性，包括生物样品中含有的内源性rnase污染，存在于环境中的水，缓冲液，耗材表面以及环境微生物和人等外源性污染。此外，部分生物制品生产过程中会额外使用核酸酶，因而有很大可能造成核酸酶的残留。
2、核酸酶通常具有极强的活性，微量的dnase/rnase污染可以造成大量dna/rna的降解，对实验和生产工艺造成显著影响。残留核酸酶作为杂质，如果跟随生物制品进入人体内，有可能引发高强度的免疫原性等反应，引起较严重的安全性风险。因此需要对核酸酶的残留进行准确的分析检测，使之控制在安全范围内，成为生物制品生产质控的关注点之一。
3、因此，对于这样一个在药物研发及生产各个环节都有可能引入且会对生物制品安全性造成严重影响的常见杂质，需要在药物研发和生产过程中进行严格的质
4、传统的核酸酶检测方法包括探针法、高效液相色谱(hplc)或酶联免疫吸附试验(elisa)等。然而，上述方法普遍存在灵敏度不高、检测耗时对以及仪器设备要求高等缺点。为解决上述问题，比色法、电化学方法等技术被开发出来。比色法是基于dnase i裂解底物产生的短dna片段可被凝胶电泳或分光光度法检测，该法虽然操作简单、成本低，但灵敏度较低；在电化学方法中，二茂铁基寡核苷酸被用于dna酶检测；二茂铁是电化学活性的信号分子，dna酶i使二茂铁从电极释放，电流下降，从而可利用伏安法检测dna酶i活性。该法虽能达到较低的检测限，但其结果受电极修饰、操作环境等影响大，难以作为一种常规的检测技术。
5、经调研，目前市场上仅有针对单一dnase污染检测或单一rnase污染检测的解决方案，无一管同时可检测dnase和rnase的同类产品及相关解决方案。此外这类相关商品的价格普遍昂贵，并不适合于大批量的生物检测领域，且仅为定性检测方案，并不包括定量检测方案。
技术实现思路
1、本专利技术在于提供一种简单、快捷、高灵敏度的可同时检测dna酶和rna酶残留的方案，用于检测生物制品、试剂、实验室环境(如实验台，容器、仪器表面等)中的核酸酶等，确保研究的准确性和生产的稳定性。
2、基于此，本专利技术的第一方面提供了一种核酸酶检测探针，该核酸酶检测探针为dna探针或rna探针，如图1所示，该探针具有螺旋环状结构，即探针的5’端沿5’到3’端方向的若干核苷酸与和3’端沿5’到3’端方向的若干核苷酸互补。其中，5’端连接有荧光基团，3’端连接有淬灭基团，距离5’端若干核苷酸位置连接有中间淬灭基团。
3、本专利技术的第二方面提供了一种核酸酶检测试剂盒，包括上述第一方面的探针。在本申请的一种具体实施方式中，上述试剂盒包括至少一条本专利技术第一方面提供的dna探针和至少一条本专利技术第一方面提供的rna探针。
4、本专利技术基于现有荧光探针法，通过对探针结构设计以及修饰基团上的改进，使得探针结构稳定性高，可以实现多重体系，不易降解，能大幅提高了检测灵敏度，使得较低浓度的核酸酶也能检测到，避免了假阴性结果的产生。
5、同时，本专利技术进一步公开了采用上述探针的核酸酶检测试剂盒，该试剂盒中用于检测核酸酶时，整个检测体系反应时间短，操作简单，能实现多重检测。
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1.一种核酸酶检测探针，其特征在于，所述核酸酶检测探针为DNA探针或RNA探针，所述探针具有螺旋环状结构，所述探针的5’端沿5’到3’端方向的若干核苷酸与所述探针的3’端沿5’到3’端方向的若干核苷酸互补；
2.如权利要求1所述的检测探针，其特征在于，所述互补的核苷酸序列长度为4-9个核苷酸；
3.如权利要求1所述的检测探针，其特征在于，所述中间淬灭基团连接在距离所述探针5’端8-10个核苷酸的位置上；
4.如权利要求1所述的检测探针，其特征在于，所述荧光基团包括FAM、ROX、HEX、JOE、VIC、Cy5或Texas Red-X；所述淬灭基团包括MGB、BHQ系列或TAMRA；
5.如权利要求1所述的检测探针，其特征在于，所述中间淬灭基团为ZEN或TAO；
6.一种核酸酶检测试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1-5中任一项所述的核酸酶检测探针。
7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括至少一条DNA探针和至少一条RNA探针，所述DNA探针和所述RNA探针具有不同的荧光基团；
8
9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述反应buffer包括Buffer X、甜菜碱、BSA以及无酶水。
10.如权利要求8或9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于对待测检材进行核酸酶检测时：所述待测检材为液体检材时，直接提取适量液体检材加入探针和反应buffer得到反应液；所述待测检材为固体检材时，以无酶水对固体检材进行清洗，收集清洗检材后的无酶水加入反应buffer得到反应液；
...【技术特征摘要】
1.一种核酸酶检测探针，其特征在于，所述核酸酶检测探针为dna探针或rna探针，所述探针具有螺旋环状结构，所述探针的5’端沿5’到3’端方向的若干核苷酸与所述探针的3’端沿5’到3’端方向的若干核苷酸互补；
2.如权利要求1所述的检测探针，其特征在于，所述互补的核苷酸序列长度为4-9个核苷酸；
3.如权利要求1所述的检测探针，其特征在于，所述中间淬灭基团连接在距离所述探针5’端8-10个核苷酸的位置上；
4.如权利要求1所述的检测探针，其特征在于，所述荧光基团包括fam、rox、hex、joe、vic、cy5或texas red-x；所述淬灭基团包括mgb、bhq系列或tamra；
5.如权利要求1所述的检测探针，其特征在于，所述中间淬灭基团为zen或tao；
6.一种核酸酶检测试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1-5中任一项所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：唐美芳，吴亚，姜丹，吴平，葛建敬，
申请(专利权)人：深圳华大医学检验实验室，
类型：发明
国别省市：
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