【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及质谱分析，具体为一种液态样品中有机硒与无机硒的有机质谱分析用试剂包及检测方法。
技术介绍
1、硒元素是人体所必须的微量元素之一。硒元素以有机硒与无机硒的形式存在于自然界中。越来越多研究表明，相较于有机硒，无机硒的生物利用度更低，毒性更大。世界卫生组织推荐健康成年人每天硒的摄入量为50～200μg，可耐受的最高摄入量为400μg。随着人们生活水平的提高，人们对健康食品的追求更加强烈，富硒食品也越来越多的出现在人们的生活中。如何准确的检测富硒食品中硒的形态与含量对人体健康十分重要，因此需要开发一种能够快速检测样品中有机硒与无机硒含量的方法。
2、目前，硒的检测方法分为总硒含量检测、有机硒含量检测以及无机硒含量检测，其中氢化物原子荧光法、荧光分光光度法、电感耦合等离子体质谱法、原子吸收光谱法、紫外分光光度法都属于总硒含量检测法，上述方法虽然能够实现样品中硒的总含量测定，却无法一次检测出样品中有机硒与无机硒的含量，随着检测技术的发展，仪器联用技术逐渐被用于硒形态的检测中，其中高效液相色谱-电感耦合等离子质谱联用法、气相色谱质谱联用法、高效液相色谱-氢化物发生-原子荧光联用法较为常见。气相色谱质谱联用法更适用于易挥发化合物分析，因此在分析硒代氨基酸等极性化合物时需要进行柱前衍生以提高其挥发性。高效液相色谱-电感耦合等离子质谱联用法在分析硒元素时需要添加全氟羧酸，因此存在对色谱柱损耗过高的缺点。以上方法虽然灵敏度高、精密度好，但是都存在样品制备复杂且分析时间长的缺点。
技术实现思路>
1、(一)解决的技术问题
2、针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种便携式试剂包及在线检测方法，该检测方法能够同时完成液态样品中有机硒与无机硒的定量分析，并且该方法灵敏度高、重复性好、分析速度快，且无需样品预处理，解决了上述
技术介绍
中提出的问题。
3、(二)技术方案
4、为实现以上目的，本专利技术通过以下技术方案予以实现：
5、优选的，一种液态样品中有机硒与无机硒的有机质谱分析用试剂包，该液态样品中有机硒与无机硒的有机质谱分析用试剂包包括有邻苯二胺0.01g，一水合柠檬酸0.14g；
6、优选的，一种液态样品中有机硒与无机硒的有机质谱分析方法，该液态样品中有机硒与无机硒的有机质谱分析方法如下：
7、步骤s1：使用试剂包配制反应试剂溶液，配制混合标准品梯度溶液，准备萃取剂；
8、步骤s2：将所需要进行检测的样品液体直接取出,装入洁净容器封,标明标记；
9、步骤s3：将超纯水作为空白溶剂分别与反应试剂溶液通入三通管的两侧，然后通过加热反应装置进行在线反应生成混合反应液，混合反应液通入氮气产生样品液滴与带电萃取剂液滴发生碰撞后直接进入质谱，即可得空白溶液中目标化合物子离子响应值；
10、步骤s4：将步骤s3中空白溶剂更换为步骤s1配制的标准品梯度溶液，分析方式与步骤s3相同，即可得到标准品梯度溶液中目标化合物子离子的响应值；
11、步骤s5：将步骤s3中的空白溶剂更换为液态样品，分析方式与步骤s3相同，即可得液态样品中目标化合物子离子响应值；
12、步骤s6：根据步骤s4中标准梯度溶液的硒化合物响应值绘制标准曲线，并将步骤s5中得到的样品响应值分别带入标准曲线进行计算，即可对所检测的样品中所存在的有机硒和无机硒所存在量进行分别展示。
13、优选的，所述步骤s1中标准品液制备方法为：分别称取硒代蛋氨酸、l-硒代胱氨酸标准品各约10mg，五水合亚硒酸钠约15mg于10ml容量瓶中用60℃水溶液稀释定容，配制成含硒代蛋氨酸、l-硒代胱氨酸、亚硒酸钠1mg/ml的混合标准溶液，取上述混合溶液100μl用甲醇稀释至10ml配置成10mg/l的混合标准品溶液作为母液备用，取母液1ml用甲醇稀释至100ml配置成100μg/l的混合标准品溶液，分别吸取100μg/l的混合标准品溶液5000μl、2500μl、1250μl、750μl、500μl、50μl，用甲醇稀释定容至10ml混匀后得到50.0μg/l、25.0μg/l、12.5μg/l、7.5μg/l、5.0μg/l、0.5μg/l的混合标准品溶液。
14、优选的，所述步骤s1中反应试剂溶液配置方法为：用1ml甲醇将试剂包溶解，后用超纯水定容至10ml。
15、优选的，所述步骤s2中样品于常温下保存，在抽样及制样的操作过程中,应防止样品受到污染。
16、优选的，所述步骤s3中加热反应装置设置为45℃，质谱检测采用电喷雾萃取电离线性离子阱质谱，萃取剂采用纯甲醇，萃取剂流速为10μl/min，质谱离子传输管离子传输管温度为180℃，离子传输管电压为35v，透镜电压为110v，喷雾电压为4kv，其它检测参数由质谱离子传输管ltq-tune系统自动优化得到，谱图在正离子模式下获取，二级质谱母离子的隔离宽度为±5da，碰撞时间为30ms，二级质谱图通过碰撞诱导解离获取，质谱扫描范围m/z50～500，质谱数据在软件thermo xcalibur roadmap 2.0上分析。
17、优选的，所述步骤s3中在线加热反应样品溶液流速为5μl/min，反应试剂流速为10μl/min。
18、优选的，所述步骤s4中硒代蛋氨酸、硒代胱氨酸、亚硒酸钠三种目标化合物的子离子分别为m/z 109、m/z 248、m/z 159。
19、优选的，所述步骤s5中无机形态硒在酸性条件下加热与反应试剂反应转化为有机态，然后与样品中其它有机态硒化合物一起进行质谱检测。
20、(三)有益效果
21、本专利技术提供了一种液态样品中有机硒与无机硒的有机质谱分析用试剂包及方法。具备以下有益效果：
22、1.本方案通过实验条件的优化，设计出了一种较优配比的试剂包，优化了样品前处理步骤。
23、2.本方案检测方法通过在电喷雾萃取电离质谱前端搭建一个加热反应装置实现了液体样品中有机硒与无机硒的同时快速在线检测，该方法灵敏度高、重复性好，整个分析过程可在几分钟之内完成。
24、3.本方案检测方法可以对液态样品中其特异性物质进行表征。
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1.一种液态样品中有机硒与无机硒的有机质谱分析用试剂包，其特征在于：该液态样品中有机硒与无机硒的有机质谱分析用试剂包包括有邻苯二胺0.01g，一水合柠檬酸0.14g，所述试剂包为在线分析时配制反应试剂所用。
2.一种液态样品中有机硒与无机硒的有机质谱分析方法，其特征在于：使用权利要求1所述试剂包，其分析方法如下：
3.根据权利要求2所述的一种液态样品中有机硒与无机硒的有机质谱分析方法，其特征在于：所述步骤S1中标准品液制备方法为：分别称取硒代蛋氨酸、L-硒代胱氨酸标准品各约10mg，五水合亚硒酸钠约15mg于10mL容量瓶中，用60℃水溶液稀释定容，配制成含硒代蛋氨酸、L-硒代胱氨酸、亚硒酸钠1mg/mL的混合标准溶液，取上述混合溶液100μL用甲醇稀释至10mL配置成10mg/L的混合标准品溶液作为母液备用，取母液1mL用甲醇稀释至100mL配置成100μg/L的混合标准品溶液，分别吸取100μg/L的混合标准品溶液5000μL、2500μL、1250μL、750μL、500μL、50μL，用甲醇稀释定容至10mL混匀后得到50.0μg/L、25.0μg
4.根据权利要求2所述的一种液态样品中有机硒与无机硒的有机质谱分析方法，其特征在于：所述步骤S1中反应试剂溶液配置方法为：用1mL甲醇将试剂包溶解，后用超纯水定容至10mL。
5.根据权利要求2所述的一种液态样品中有机硒与无机硒的有机质谱分析方法，其特征在于：所述步骤S2中样品于常温下保存，在抽样及制样的操作过程中,应防止样品受到污染。
6.根据权利要求2所述的一种液态样品中有机硒与无机硒的有机质谱分析方法，其特征在于：所述步骤S3中加热反应装置设置为45℃，质谱检测采用电喷雾萃取电离线性离子阱质谱，萃取剂采用纯甲醇，萃取剂流速为10μL/min，质谱离子传输管离子传输管温度为180℃，离子传输管电压为35V，透镜电压为110V，喷雾电压为4kV，其它检测参数由质谱离子传输管LTQ-Tune系统自动优化得到，谱图在正离子模式下获取，二级质谱母离子的隔离宽度为±5Da，碰撞时间为30ms，二级质谱图通过碰撞诱导解离获取，质谱扫描范围m/z 50～500，质谱数据在软件Thermo Xcalibur Roadmap 2.0上分析。
7.根据权利要求2所述的一种液态样品中有机硒与无机硒的有机质谱分析方法，其特征在于：所述步骤S3中在线加热反应样品溶液流速为5μL/min，反应试剂流速为10μL/min。
8.根据权利要求2所述的一种液态样品中有机硒与无机硒的有机质谱分析方法，其特征在于：所述步骤S4中硒代蛋氨酸、硒代胱氨酸、亚硒酸钠三种目标化合物的子离子分别为m/z 109、m/z 248、m/z 159。
9.根据权利要求2所述的一种液态样品中有机硒与无机硒的有机质谱分析方法，其特征在于：所述步骤S5中无机形态硒在酸性条件下加热与反应试剂反应转化为有机态，然后与样品中其它有机态硒化合物一起进行质谱检测。
...【技术特征摘要】
1.一种液态样品中有机硒与无机硒的有机质谱分析用试剂包，其特征在于：该液态样品中有机硒与无机硒的有机质谱分析用试剂包包括有邻苯二胺0.01g，一水合柠檬酸0.14g，所述试剂包为在线分析时配制反应试剂所用。
2.一种液态样品中有机硒与无机硒的有机质谱分析方法，其特征在于：使用权利要求1所述试剂包，其分析方法如下：
3.根据权利要求2所述的一种液态样品中有机硒与无机硒的有机质谱分析方法，其特征在于：所述步骤s1中标准品液制备方法为：分别称取硒代蛋氨酸、l-硒代胱氨酸标准品各约10mg，五水合亚硒酸钠约15mg于10ml容量瓶中，用60℃水溶液稀释定容，配制成含硒代蛋氨酸、l-硒代胱氨酸、亚硒酸钠1mg/ml的混合标准溶液，取上述混合溶液100μl用甲醇稀释至10ml配置成10mg/l的混合标准品溶液作为母液备用，取母液1ml用甲醇稀释至100ml配置成100μg/l的混合标准品溶液，分别吸取100μg/l的混合标准品溶液5000μl、2500μl、1250μl、750μl、500μl、50μl，用甲醇稀释定容至10ml混匀后得到50.0μg/l、25.0μg/l、12.5μg/l、7.5μg/l、5.0μg/l、0.5μg/l的混合标准品溶液。
4.根据权利要求2所述的一种液态样品中有机硒与无机硒的有机质谱分析方法，其特征在于：所述步骤s1中反应试剂溶液配置方法为：用1ml甲醇将试剂包溶解，后用超纯水定容至10ml。
5.根据权利要求2所述的一种液态样品中有机硒与无机硒的有...
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