基于CRISPR/Cas12a和AuNBPs形貌变化的肿瘤标志物多色可视化检测方法技术

本发明专利技术提出一种基于CRISPR/Cas12a和AuNBPs形貌变化的肿瘤标志物多色可视化检测方法，该方法包含以下步骤：(1)酶连报告探针的制备；(2)CRISPR/Cas12a非特异切割；(3)多色彩可视化分析。本发明专利技术结合CRISPR/Cas12a和贵金属纳米材料局域表面等离子体共振特性，构建了一种快速便携式诊断肿瘤标志物的检测方法。本方法检测成本低，操作简单，无需复杂检测设备，重现性和稳定性好，能够直接通过肉眼对癌症生物标志物进行半定量分析，有望在生命科学和临床检验等领域得到广泛应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分析化学领域，涉及一种基于crispr/cas12a和aunbps形貌变化的肿瘤标志物多色可视化检测方法。

技术介绍

1、簇状规则间隔的短回文重复序列/crispr相关蛋白(crispr/cas)系统，一种革命性的基因编辑技术，已经从最初的基因治疗领域应用扩展到了疾病诊断领域。在众多的crispr/cas系统中，crispr/cas12a成为了一个引人注目的分支，它因能被特定靶序列激活后对单链寡核苷酸实施非特异性切割而广受关注。这意味着，通过设计与目标dna序列互补的crrna，可以在目标链存在的情况下激活cas12a，对目标链进行顺式切割，并对周围非特异性单链dna进行任意切割。这种所谓的“剪切转移”效应，可以显著放大信号，使得即使是极低丰度的dna也能被有效检测。这种特性使得crispr/cas12a在低浓度肿瘤生物标志物检测方面显示出巨大潜力，为肿瘤的早期诊断和治疗提供了新的可能性。此外，快速响应能力也是crispr/cas12a显著优点之一。比如，当crispr/cas12a被单链dna激活时，其催化速率约为3次/秒，催化效率(kca本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于CRISPR/Cas12a和AuNBPs形貌变化的肿瘤标志物多色可视化检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的基于CRISPR/Cas12a和AuNBPs形貌变化的肿瘤标志物多色可视化检测方法，其特征在于，AuNBPs溶液的制备过程如下：

3.根据权利要求1或2所述的基于CRISPR/Cas12a和AuNBPs形貌变化的肿瘤标志物多色可视化检测方法，其特征在于，CRISPR/Cas12a复合物采用1.5-3.5μL 10×NE Buffer、1.2-2.8μL/0.42μM crRNA、0.3-0.7μL/2.5μM Ca...

【技术特征摘要】

1.一种基于crispr/cas12a和aunbps形貌变化的肿瘤标志物多色可视化检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的基于crispr/cas12a和aunbps形貌变化的肿瘤标志物多色可视化检测方法，其特征在于，aunbps溶液的制备过程如下：

3.根据权利要求1或2所述的基于crispr/cas12a和aunbps形貌变化的肿瘤标志物多色可视化检测方法，其特征在于，crispr/cas12a复合物采用1.5-3.5μl 10×ne buffer、1.2-2.8μl/0.42μm crrna、0.3-0.7μl/2.5μm cas12a酶为和12-28μl depc水预混合形成。

4.根据权利要求3所述的基于crispr/cas12a和aunbps形貌变化的肿瘤标志物多色可视化检测方法，其特征在于，将生物素-rp-生物素与mb--链霉亲和素进行第一次孵育过程中，生物素-rp-生物素为1.75-10.5μl/10 μm，mb-链霉亲和素为15-90μl，1mg/ml，反应温度为30-40℃，反应时间为0.5-2小时。

5.根据权利要求4所述的基于crispr/cas12a和aunbps形貌变化的肿瘤标志物多色可视化检测方法，其特征在于，洗涤所用液体为1×pbs，其ph为7.4，其中含有100mm nacl和0.05％tween20，第一次洗涤次数为3次，第二次洗涤次数为5次；

6.根据权利要求5所述的基于crispr/...

【专利技术属性】
技术研发人员：许梢华，赵喆，邓筱羽，陶映州，李志新，
申请(专利权)人：江西中医药大学，
类型：发明
国别省市：