【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程和酶工程，具体涉及黄素蛋白单加氧酶及其编码基因与应用。
技术介绍
1、靛玉红(c16h10n2o2)为一双吲哚类抗肿瘤药物，且临床已证明了其作为治疗白血病的有效性，例如：靛玉红片。除此以外，它还具有其他多种生物活性，包括抗菌、抗真菌、抗病毒、抗炎和神经保护等，可作为治疗肿瘤、炎症、神经病变和细菌感染的潜在药物。由于靛玉红对多种疾病显著的治疗效果，且副作用较小，不会破坏人体内原有的免疫系统，使生产靛玉红及其衍生物作为抗癌剂在制药行业引起了广泛的兴趣，从而对制药行业产生了重大影响，而这些发现也促使靛玉红的制备尤其是生物合成对于很多药企具有很大的吸引力。
2、黄素蛋白单加氧酶(flavin-containing monooxygenase，fmo，ec1.14.13.8)是一组依赖于黄素腺嘌呤二核苷酸(fad，flavin adeninedinucleotide)、还原型辅酶ii(nadph，nicotinamide adenine dinucleotide phosphate)和分子氧的单组分加氧酶。它属于黄素氧化酶家族，是一种独特的不含亚铁血红素的单加氧酶。
3、来源于菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶可用于靛蓝的合成，但其合成靛玉红的研究还比较少。
技术实现思路
1、本专利技术旨在针对现有技术的不足，提供菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶及其编码基因与应用。
2、本专利技术还提供了含有上述编码基因的重组载体、宿主细胞。
3、本专
4、本专利技术的具体技术方案为：
5、菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶，其氨基酸序列含有seq id no.4-6任一种所示的序列。
6、进一步地，菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶，其氨基酸序列如seq id no.4-6任一种所示。
7、上述菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶分别来自isatis indigotica fort.、isatisviolascens bunge.和isatis cappadocica，用iifmo、ivfmo和icfmo表示。
8、菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶基因，为编码上述菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶的核苷酸序列。
9、菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶基因含有seq id no.1-3所示的一种核苷酸序列。
10、进一步，所述菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶基因核苷酸序列如seq id no.1-3任一所示。
11、本专利技术还提供了一种含有上述编码基因的重组载体。
12、优选地，所述重组载体为pet32a或者pet28a。
13、本专利技术还提供一种含有上述编码基因或含有上述重组载体的宿主细胞，能够表达上述菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶。
14、优选的，所述宿主细胞为大肠杆菌，如大肠杆菌b21或trans5α。
15、上述菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶、菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶基因、重组载体或宿主细胞可用于制备靛玉红。
16、本专利技术还提供了一种制备靛玉红的方法，以上述菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶、菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶基因、重组载体或宿主细胞为催化剂，以半胱氨酸和吲哚作为原料，生成靛玉红。
17、一种制备靛玉红的方法，能够表达色氨酸酶和上述菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶的宿主细胞，加入半胱氨酸和色氨酸，经培养发酵，生成靛玉红。
18、本专利技术的有益效果在于：从三种不同来源的菘蓝属植物中获得了黄素蛋白单加氧酶iifmo、icfmo与ivfmo及其编码的基因，为通过合成生物学生产靛玉红提供催化元件；并且将菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶基因转化到工程菌中，利用微生物如大肠杆菌等所表达的色氨酸酶，以色氨酸原料，将色氨酸转化为吲哚，在半胱氨酸作用下，生成靛玉红。本专利技术有望建立大规模生产靛玉红的细胞工厂，为靛玉红资源的可持续奠定基础，具有较高的实际应用价值和经济价值。
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1.菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶，其特征在于，其氨基酸序列含有SEQ ID NO.4-6中任一种所示的序列。
2.如权利要求1所述的菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4-6中的任一种所示。
3.菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶基因，其特征在于，为编码权利要求1或2所述的菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶的核苷酸序列。
4.菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶基因，其特征在于，含有SEQ ID NO.1-3任一种所示的核苷酸序列。
5.一种重组载体，其特征在于，含有权利要求3或4所述的菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶编码基因。
6.一种宿主细胞，其特征在于，含有权利要求3或4所述的菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶编码基因或含有权利要求5所述重组载体。
7.权利要求1或2所述菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶、权利要求3或4所述的菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶基因、权利要求5所述的重组载体或权利要求6所述的宿主细胞在制备靛玉红方面的应用。
8.一种制备靛玉红的方法，其特征在于，步骤包括，以权利要求1或2所述菘蓝
9.一种制备靛玉红的方法，其特征在于，能够表达色氨酸酶的权利要求6所述的宿主细胞，加入色氨酸与半胱氨酸，经培养发酵，生成靛玉红。
...【技术特征摘要】
1.菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶，其特征在于，其氨基酸序列含有seq id no.4-6中任一种所示的序列。
2.如权利要求1所述的菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶，其特征在于，其氨基酸序列如seq id no.4-6中的任一种所示。
3.菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶基因，其特征在于，为编码权利要求1或2所述的菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶的核苷酸序列。
4.菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶基因，其特征在于，含有seq id no.1-3任一种所示的核苷酸序列。
5.一种重组载体，其特征在于，含有权利要求3或4所述的菘蓝属植物黄素蛋白单加氧酶编码基因。
6.一种宿主细胞，其特征在于，含有权利要求3或4所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖莹，李蓉蓉，陈万生，陈军峰，黄豆豆，夏雯雯，
申请(专利权)人：上海中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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