【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗体，更具体地，涉及一种特异性识别并结合mmp7的分离的抗体、其融合蛋白、前体肽及其应用。
技术介绍
1、基质金属蛋白酶7（matrix metalloproteinase，mmp7），也被称为基质蛋白7，是锌离子依赖性的肽链内切酶，其酶切活力调控主要是通过酶原的激活与内源性抑制剂的抑制作用，是一种可以降解细胞外基质和许多非基质蛋白的蛋白酶。mmp7对细胞外基质成分（iv型胶原蛋白、层粘连蛋白、弹性蛋白、纤维连接蛋白、明胶和骨桥蛋白）具有广泛的底物亲和力。
2、研究表明，mmp7与人类纤维化疾病的进展有关。mmp7在肺上皮细胞、单核吞噬细胞和纤维细胞中表达。通过对人纤维化肺的基因表达分析，发现mmp7作为促纤维化介质在肺纤维化发展中的作用。特发性肺纤维化（ipf）患者血清中mmp7的产生上调113%，事实上，mmp7已被验证为特发性肺纤维化的血清生物标志物。mmp7在健康的成熟肾脏中几乎不表达，但在迄今为止研究的几乎所有肾脏疾病中都上调，它是肾脏疾病中表征最好的mmp之一。在adpkd、狼疮性肾炎、糖尿病肾病、iga肾病、血栓性微血管病和局灶节段性肾小球硬化等的人肾病中已检测到肾脏mmp7过表达。而且mmp7与肝脏炎症、纤维化分级均显著相关，作为中介效应分子介导了炎症导致肝纤维化快速进展的过程，即炎症反应导致mmp7大量分泌，肝内大量堆积的mmp7进而导致了肝纤维化的快速进展。
3、此外，mmp7在人多系统肿瘤中特异性表达，如消化系统肿瘤、泌尿系统肿瘤和生殖系统肿瘤。mmp7在多种癌肿瘤细胞
4、鉴于mmp7在多种疾病的发生和发展中的相关性，临床上进行mmp7的检测以及采用mmp7的抗体进行疾病的治疗都非常有意义。因此，设计出能够靶向结合mmp7且亲和度高、稳定性好、特异性强的抗体分子，有助于更有效检测血液及组织中mmp7的表达水平，也有助于精准对mmp7高表达病灶进行成像或给药，对肾病、肿瘤疾病、纤维化疾病等多种疾病的诊断、治疗及科学研究具有重大意义。
技术实现思路
1、专利技术人通过杂交瘤技术结合高通量表达的平台，筛选出了靶向mmp7的抗体。所述抗体具有亲和力高、稳定性高、特异性强等优势，由此完成了本专利技术。此外，还进一步提供了制备所述抗体的方法，以及基于上述抗体的检测试剂和药物组合物，从而能够以高灵敏度实现对样本中的mmp7含量的准确检测和对疾病的治疗。
2、在一个方面，本申请提供了一种特异性结合mmp7的分离的抗体或其抗原结合片段，包括：
3、（1）hcdr1，其包含如seq id no:1或seq id no:41所示的氨基酸序列或与其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的序列，或与所述氨基酸序列相比具有一个或多个（优选1个、2个或3个或以上）保守氨基酸突变（优选置换、插入或缺失）的氨基酸序列，或由所述氨基酸序列组成；
4、（2）hcdr2，其包含如seq id no:2或seq id no:42所示的氨基酸序列或与其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的序列，或与所述氨基酸序列相比具有一个或多个（优选1个、2个或3个或以上）保守氨基酸突变（优选置换、插入或缺失）的氨基酸序列，或由所述氨基酸序列组成；和
5、（3）hcdr3，其包含如seq id no:3或seq id no:43所示的氨基酸序列或与其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的序列，或与所述氨基酸序列相比具有一个或多个（优选1个、2个或3个或以上）保守氨基酸突变（优选置换、插入或缺失）的氨基酸序列，或由所述氨基酸序列组成。
6、在一些实施方案中，所述特异性结合mmp7的分离的抗体或其抗原结合片段进一步包括：
7、（1）lcdr1，其包含如seq id no:13或seq id no:44所示的氨基酸序列或与其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的序列，或与所述氨基酸序列相比具有一个或多个（优选1个、2个或3个或以上）保守氨基酸突变（优选置换、插入或缺失）的氨基酸序列，或由所述氨基酸序列组成；
8、（2）lcdr2，其包含如seq id no:14或seq id no:45所示的氨基酸序列或与其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的序列，或与所述氨基酸序列相比具有一个或多个（优选1个、2个或3个或以上）保守氨基酸突变（优选置换、插入或缺失）的氨基酸序列，或由所述氨基酸序列组成；和
9、（3）lcdr3，其包含如seq id no:15或seq id no:46所示的氨基酸序列或与其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的序列，或与所述氨基酸序列相比具有一个或多个（优选1个、2个或3个或以上）保守氨基酸突变（优选置换、插入或缺失）的氨基酸序列，或由所述氨基酸序列组成。
10、在一个方面，本专利技术提供了一种特异性结合mmp7的分离的抗体或其抗原结合片段，包括：
11、(a)hcdr1，其包含如seq id no:1或seq id no:4或seq id no:7或seq id no:10中任一项所示的氨基酸序列，与所述氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的氨基酸序列，或与所述氨基酸序列相比具有一个或多个（优选1个、2个或3个或以上）保守氨基酸突变（优选置换、插入或缺失）的氨基酸序列，或由所述氨基酸序列组成；
12、(b)hcdr2，其包含如seq id no:2或seq id no:5或seq id no:8或seq id no:11中任一项所示的氨基酸序列，与所述氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种特异性结合MMP7的分离的抗体或其抗原结合片段，包括：
2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，包括：
3.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，包括：
4.如权利要求3所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段还包含具有如SEQ ID NO: 47所示的氨基酸序列的重链恒定区、和/或具有如SEQ ID NO: 48所示的氨基酸序列的轻链恒定区。
5.如权利要求1-4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，包括：
6.如权利要求1-4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗原结合片段选自：Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、dAb、Fab/c、互补决定区、单链抗体、双链抗体、单域抗体、或minibody。
7.如权利要求1-4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体为单克隆抗体、多克隆抗体、单特异性抗体、多特异性抗体、鼠源抗体、嵌合抗体或人源化抗体。
8.一种融合蛋白，其含有权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
9.一
10.一种分离的核酸分子，其包含编码权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、或权利要求8所述的融合蛋白、或权利要求9所述的前体肽的核苷酸序列。
11.一种重组表达载体，所述表达载体包含权利要求10所述的分离的核酸分子。
12.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求10所述的核酸分子或权利要求11所述的重组表达载体。
13.如权利要求12所述的宿主细胞，其中，所述宿主细胞为真核细胞。
14.如权利要求12或13所述的宿主细胞，其中，所述宿主细胞为哺乳动物细胞。
15.一种制备权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的方法，包括：在使得所述的抗体、其抗原结合片段表达的条件下，培养权利要求12-14中任一项所述的宿主细胞。
16.一种检测试剂，包括权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
17.如权利要求16所述的检测试剂，其中，所述检测试剂还包括一种或多种酶联免疫检测试剂组分。
18.如权利要求17所述的检测试剂，其中，所述酶联免疫检测试剂组分选自阳性对照液、样品稀释液、阴性对照液、酶标试剂、酶底物溶液、显色试剂、洗涤液、封闭液、和/或终止液。
19.如权利要求16所述的检测试剂，其中，所述检测试剂还包括一种或多种化学发光免疫检测组分。
20.如权利要求19所述的检测试剂，其中，所述化学发光免疫检测组分包括磁性微球溶液、生物素化抗体溶液、发光标记物，以及任选的MMP7校准品和MMP7质控品。
21.如权利要求16-20中任一项所述的检测试剂，其中，所述检测试剂进一步包含选自如下的诊断指标的检测剂：铁离子、铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1、乳铁蛋白受体ITLN1、铁调素、游离胆红素、胆绿素、γ-谷氨酰转移酶、或BAFF。
22.权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求8所述的融合蛋白、权利要求9所述的前体肽、或权利要求16-21中任一项所述的检测试剂在制备用于检测样品中MMP7含量的试剂或产品、用于对MMP7相关疾病进行诊断的试剂或产品、或者用于对MMP7相关疾病进行预防和/或治疗的药物中的用途。
23.如权利要求22所述的用途，其中，所述MMP7相关疾病为炎性疾病、自身免疫性疾病、癌症、纤维化疾病、心血管疾病、神经病症、眼部疾病、肺部疾病、肝胆疾病、或肾病。
24.如权利要求22或23所述的用途，其中，所述MMP7相关疾病选自胆道闭锁、黄疸、胆管炎、胆汁淤积、肝纤维化、肾纤维化、慢性肾病、肝内胆管细胞癌、坏死性小肠结肠炎或败血症、卵巢癌、疼痛、膀胱炎、关节炎、干眼症、肝炎、非酒精性脂肪肝、巨结肠、红斑狼疮、急性呼吸窘迫综合征、肺动脉高压、特发性肺纤维化。
25.如权利要求24所述的用途，其中，所述肝纤维化为胆道闭锁引起的肝纤维化，所述黄疸为梗阻性黄疸。
26.一种药物组合物，包含：权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求8所述的融合蛋白或权利要求9所述的前体肽，以及药学上可接受的载体。
...【技术特征摘要】
1.一种特异性结合mmp7的分离的抗体或其抗原结合片段，包括：
2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，包括：
3.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，包括：
4.如权利要求3所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段还包含具有如seq id no: 47所示的氨基酸序列的重链恒定区、和/或具有如seq id no: 48所示的氨基酸序列的轻链恒定区。
5.如权利要求1-4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，包括：
6.如权利要求1-4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗原结合片段选自：fab、fab'、f(ab')2、fd、fv、dab、fab/c、互补决定区、单链抗体、双链抗体、单域抗体、或minibody。
7.如权利要求1-4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体为单克隆抗体、多克隆抗体、单特异性抗体、多特异性抗体、鼠源抗体、嵌合抗体或人源化抗体。
8.一种融合蛋白，其含有权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
9.一种前体肽，其含有权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或者由其生成权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
10.一种分离的核酸分子，其包含编码权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、或权利要求8所述的融合蛋白、或权利要求9所述的前体肽的核苷酸序列。
11.一种重组表达载体，所述表达载体包含权利要求10所述的分离的核酸分子。
12.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求10所述的核酸分子或权利要求11所述的重组表达载体。
13.如权利要求12所述的宿主细胞，其中，所述宿主细胞为真核细胞。
14.如权利要求12或13所述的宿主细胞，其中，所述宿主细胞为哺乳动物细胞。
15.一种制备权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的方法，包括：在使得所述的抗体、其抗原结合片段表达的条件下，培养权利要求12-14中任一项所述的宿主细胞。
16.一种检测试剂，包括权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
【专利技术属性】
技术研发人员：陈振埕，陈佳煊，韩杨，王银德，朱永华，
申请(专利权)人：智泽童康广州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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