【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及血液疾病和基因检测领域，更具体地，本专利技术提供一种靶向pml-rarg融合基因的多核苷酸及其应用。
技术介绍
1、急性早幼粒细胞白血病(apl)是一种特殊类型的急性髓系白血病，其特点是白血病细胞中存在特定的染色体易位。在apl中最常见的遗传标志是pml-rara融合基因，由15号染色体上的pml基因和17号染色体上的rara基因融合所致。然而，除了pml-rara融合外，还存在其他罕见的融合变体，如pml-rarg融合基因，目前已经报道的pml-rarg融合基因由15号染色体上的pml基因和17号染色体上的rarg基因融合所致，pml基因的断裂连接点在3号外显子旁边的内含子区域，rarg基因的断裂连接点在1号或2号外显子旁边的内含子区域。
2、现有文献报道，98％以上的apl具有经典的pml-rara融合基因，伴有pml-rara融合基因的apl患者通过常规的维甲酸联合砷剂的靶向治疗得到了较高的缓解率和治愈率，而其它变异型的apl，包括pml-rarg对维甲酸联合砷剂可能耐药。因此，这些罕见变体的检测对于白血病的精确诊断和治疗选择至关重要。
技术实现思路
1、申请人发现，pml-rarg融合基因除已报道的融合变体外，还存在其他亚型：如图1所示，本专利技术发现的pml-rarg融合基因亚型的断裂连接点位于pml基因6号外显子右侧的内含子区域以及rarg基因4号外显子左侧的内含子区域；而含有该亚型pml-rarg融合基因无法采用已报道的pml-rarg融合基
2、本专利技术提供的技术方案具体如下：
3、第一方面，本专利技术提供一种靶向pml-rarg融合基因的多核苷酸，所述pml-rarg融合基因由pml基因6号外显子以及rarg基因4号外显子融合而成；所述多核苷酸包含配置为与所述pml-rarg融合基因断裂连接点附近的基因组dna杂交的第一序列，所述第一序列为ggaggcagcggtggaga(seq id no:1)。
4、第二方面，本专利技术提供上述靶向pml-rarg融合基因的多核苷酸在制备检测pml-rarg融合基因的组合物中的用途。
5、第三方面，本专利技术提供一种用于检测上述pml-rarg融合基因的组合物，包含上述靶向pml-rarg融合基因的多核苷酸作为探针。
6、在本专利技术提供的一些实施方式中，所述组合物还包括用于扩增pml-rarg融合基因的引物对：
7、正向引物为：gagccccgtcataggaagtg(seq id no:2)；
8、反向引物为：gcagccttcacaagagctgac(seq id no:3)。
9、在本专利技术提供的一些实施方式中，所述多核苷酸两端分别连接荧光报告基团和荧光淬灭基团。
10、在本专利技术提供的一些优选的实施方式中，荧光报告基团为5'-fam(fitc)、dt-fam(fitc)、3'-fam(fitc)、5'-tet、3'-tet、5'-joe、5'-hex、dt-hex、3'-hex、5'-vic、5'-tamra、dt-tamra、3'-tamra、3'-cy3、5'-cy3、5'-quasar 570、3'-quasar 570、5'-rox、dt-rox、3'-rox、5'-cy5、3'-cy5、5'-quasar 670、dt-quasar 670、3'-quasar 670、5'-sima、5'、3'cy5.5中的一种；荧光淬灭基团为3'-dabcyl、dt-dabcyl、5'-dabcyl、5'bhq1、dt-bhq1、3'-bhq-1、5'-bhq2、dt-bhq2、3'-bhq-2、3'-bhq3、3'eclipse、3'-mgb中的一种。
11、在本专利技术提供的一些更优选的实施方式中，所述多核苷酸两端分别连接fam和mgbnfq。
12、在本专利技术提供的一些实施方式中，所述组合物还包括内参基因及其正反向引物。
13、在本专利技术提供的一些优选的实施方式中，所述内参基因为abl基因；
14、abl基因的正向引物为：
15、gtggagataacactctaagcataactaaaggt(seq id no:4)；
16、abl基因的反向引物为：
17、tgatgtagttgcttgggaccca(seq id no:5)。
18、第四方面，本专利技术提供一种试剂盒，包含上述用于检测pml-rarg融合基因的组合物。
19、在本专利技术提供的一些实施方式中，所述试剂盒还包含用于ddpcr检测的试剂。
20、在本专利技术提供的一些实施方式中，所述用于ddpcr检测的试剂包括dntp混合物、热启动taq酶、rna酶抑制剂、逆转录引物、逆转录酶中的至少一种。
21、第五方面，本专利技术提供pml-rarg融合基因在制备编辑pml-rarg融合基因的基因编辑工具中的用途，所述pml-rarg融合基因由pml基因6号外显子以及rarg基因4号外显子融合而成。
22、在本专利技术提供的一些实施方式中，所述基因编辑工具为crispr/cas系统。
23、第六方面，本专利技术提供pml-rarg融合基因在制备用于治疗急性早幼粒细胞白血病的药物中的用途，所述pml-rarg融合基因由pml基因6号外显子以及rarg基因4号外显子融合而成；所述pml-rarg融合基因包含
24、aacagcaaccacgtggccagtggcgccggggaggcagcgg tggagacacagagcaccagctcagaggagatggt(seq id no:10)。
25、与现有技术相比，本专利技术具有如下优点：
26、本专利技术发现了新的pml-rarg融合基因亚型，据此设计出能靶向pml-rarg融合基因的多核苷酸，利用该多核苷酸开发出急性早幼粒细胞白血病的疾病诊断试剂，以便于对急性早幼粒细胞白血病患者进行精准治疗。
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1.一种靶向PML-RARG融合基因的多核苷酸，其特征在于：所述PML-RARG融合基因由PML基因6号外显子以及RARG基因4号外显子融合而成；所述多核苷酸包含配置为与所述PML-RARG融合基因断裂连接点附近的基因组DNA杂交的第一序列，所述第一序列为GGAGGCAGCGGTGGAGA。
2.权利要求1所述的靶向PML-RARG融合基因的多核苷酸在制备检测PML-RARG融合基因的组合物中的用途。
3.一种用于检测PML-RARG融合基因的组合物，其特征在于：包含权利要求1所述的靶向PML-RARG融合基因的多核苷酸作为探针。
4.根据权利要求3所述的用于检测PML-RARG融合基因的组合物，其特征在于：所述组合物还包括用于扩增PML-RARG融合基因的引物对：
5.根据权利要求3所述的用于检测PML-RARG融合基因的组合物，其特征在于：所述多核苷酸两端分别连接荧光报告基团和荧光淬灭基团。
6.根据权利要求3所述的用于检测PML-RARG融合基因的组合物，其特征在于：所述组合物还包括内参基因及其正反向引物。
...【技术特征摘要】
1.一种靶向pml-rarg融合基因的多核苷酸，其特征在于：所述pml-rarg融合基因由pml基因6号外显子以及rarg基因4号外显子融合而成；所述多核苷酸包含配置为与所述pml-rarg融合基因断裂连接点附近的基因组dna杂交的第一序列，所述第一序列为ggaggcagcggtggaga。
2.权利要求1所述的靶向pml-rarg融合基因的多核苷酸在制备检测pml-rarg融合基因的组合物中的用途。
3.一种用于检测pml-rarg融合基因的组合物，其特征在于：包含权利要求1所述的靶向pml-rarg融合基因的多核苷酸作为探针。
4.根据权利要求3所述的用于检测pml-rarg融合基因的组合物，其特征在于：所述组合物还包括用于扩增pml-rarg融合基因的引物对：
5.根据权利要求3所述的用于检测pml-rarg融合基因的组合物，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴三云，喻亚兰，周媛媛，周芙玲，刘晓燕，梁钧铭，牟郑颐，李怡萱，何莉，肖晖，刘亚楠，罗萍，沈辉，张岘，张冬雷，
申请(专利权)人：武汉大学中南医院，
类型：发明
国别省市：
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