【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物菌种及其应用，特别是指一种枯草芽孢杆菌、利用其制备的微生物菌剂、生物有机肥及应用。
技术介绍
1、随着社会的发展和人口的增加，对耕地资源的需求越来越多。盐碱地是重要的潜在耕地资源。因不合理耕作和施肥用药，菜田普遍次生盐渍化，发生土壤退化。盐碱地和退化土壤生产性能低下，导致病害加剧，产量、品质下降，影响产业竞争力和消费者健康。加强盐碱地综合利用是实现耕地扩容和提高土地质量的有力措施，也是保障国家粮食安全和端牢中国饭碗的重要手段。我国盐碱地面积大、类型多、分布广，部分地区耕地盐碱化趋势加剧。目前可利用生物有机肥进行盐碱地的改良与利用，这种方式具有投资少，见效快，效益高的特点，并且可以促进养殖粪便的还田利用，促进种养循环，从而实现盐碱地耕地质量和产能提升。
2、芽孢杆菌易存活，抗逆性强，广泛分布在各类土壤、植物。目前已经有许多具有促生抗病的菌株制作成微生物肥料或微生物农药，但主要应用于常规土壤生产上，有机肥的载体多数为鸡粪，牛粪为载体的生物有机肥，特别是适用于盐碱地的优良芽胞杆菌生物有机肥还很少，亟待加强相应研发工作，挖掘应用潜力。
3、申请号为202211572815.8的专利技术专利申请中公开了一种碱蓬内生贝莱斯芽孢杆菌及其应用，菌种保藏编号为cctcc no.m20221277，该专利技术的贝莱斯芽孢杆菌对化学杀菌剂和盐具有较好的耐受性，能够显著降低土壤中的盐碱含量，并对番茄灰霉病菌、花生白绢病菌、番茄枯萎病菌、黄瓜枯萎病菌、草莓根腐病菌等病菌具有防治效果，抑制率在54.3％～65.7
技术实现思路
1、本专利技术的目的之一是提供一种具有高耐盐、促进植物生长，减少植物疾病的盐碱地应用的枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)cgmcc no.29028。
2、本专利技术中的菌种从河北省海兴县中度盐碱土壤(0.58％，ph＝8.28)苦菜根际分离得到。该菌株于2023年11月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类名为枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)，保藏编号为cgmcc no.29208，保藏机构的地址位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所(简称cgmcc)。
3、该菌种的菌落形态及生理生化特性如下：
4、该菌株菌落呈不规则圆形，白色不透明，菌落褶皱，无荚膜，通过革兰氏染色显微观察，为革兰氏阳性、杆状。通过菌株形态学特征，生理生化特征和16srrna序列分析将该菌株鉴定为枯草芽孢杆菌。可形成内生芽孢，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。
5、该菌株耐盐度为5％。
6、在自然条件下，该菌株可定殖于多种植物根际，能溶磷，固氮，产嗜铁素、iaa和accd促进植物生长以及抑制病原真菌的物质。
7、该菌株的培养：使用lb培养基(酵母粉5克，胰蛋白胨10克，氯化钠5克，琼脂15克，蒸馏水1000毫升)。
8、该菌株的扩培方法：
9、1、斜面菌种培养：将该菌株接入试管斜面，培养温度为30℃～35℃，ph值＝6.8～7.2，培养时间1～2天，用无菌水振荡30分钟后，10倍稀释后用血球计数板计数，活菌数≥109cfu/ml。
10、2、摇瓶培养：按照0.5％～2％的接种量将斜面菌种接种到装有培养基的三角瓶中，在温度为30℃～35℃，ph值＝6.8～7.2、转速200转/分钟的条件下培养24～48小时，使活菌数达到109cfu/ml。
11、上述培养基为：酵母粉5.0克；胰蛋白胨1.0克；葡萄糖2.0克；磷酸氢二钾0.5克；硫酸镁0.5克；蒸馏水1000毫升；ph＝6.8～7.2。
12、3、发酵：按照10％～30％的装液量在三角瓶内置入灭菌后的发酵培养基，按照接种量为1％～5％、温度30℃～35℃的条件培养24～48小时；或按40％～80％的装量在发酵罐内置入灭菌后的发酵培养基，按照种子液的接种量为2％～10％、温度为30℃～35℃，通气量0.4～0.6立方米/小时，搅拌速度150～200转/分钟，溶氧70％～75％，采用硅类消泡剂或食用豆油消泡，培养36～48小时，使活菌数达到1010cfu/ml。
13、发酵培养基由如下原料组成：氮源5克～15克，碳源5克～15克，mgso41克～5克，磷酸二氢钾1克～5克，nacl 1克g～5克，水1000毫升，ph＝6.8～7.2。氮源选用豆粕粉、胰蛋白胨、酵母浸膏中的一种或其结合，碳源选用玉米淀粉，玉米浆，糖蜜中的一种或其结合。
14、本专利技术的目的之二是提供含有枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)cgmccno.29208的微生物菌剂。
15、本专利技术的目的之三是提供含有枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)cgmccno.29208的生物有机肥。
16、本专利技术的目的之四是提供含有枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)cgmccno.29208，含有其的发酵液、微生物菌剂或生物有机肥在促进盐碱地植物生长中的应用。
17、本专利技术的目的之五是提供含有枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)cgmccno.29208，含有其的发酵液、微生物菌剂或生物有机肥在防控植物病害中的应用，所述植物病害的病原菌为腐霉菌、镰刀菌、弯孢菌、小斑菌和疫霉菌。
18、具体地，所述的粮食作物选用粮食作物和牧草。
19、具体地，是将牛粪及蔗糖渣混合均匀后腐熟，将枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)cgmcc no.29028的菌悬液或含有其的发酵液与腐熟物料混合均匀，制成含活菌数达到2×108cfu/g的生物有机肥。
20、具体地，所述的生物有机肥是牛粪与蔗糖渣按7：3混合后充分腐熟，将枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)cgmcc no.29208的菌悬液或含有其的发酵液与腐熟后的物料混合均匀，制成活菌数≥2×108cfu/g的生物有机肥，用于调控盐碱地粮食作物和牧草的生长。
21、本专利技术所具备的实质性特点和取得的显著技术进步在于：
22、本专利技术筛选获得了一株可广泛应用于盐碱地多种植物的枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)cgmcc no.29208，该菌株耐盐度为5％，经申请人实验证实，该菌种具有较高的溶磷、固氮、产嗜铁素、iaa和accd能力，对镰刀菌(fusarium)、小斑菌(bipolaria maydis)、腐霉菌(pythium)、弯孢菌(curvularia lunata)均有较强的拮抗作用，适于具有防病、促生、抗盐碱等多功能生物肥料的生产，应用于盐碱地粮食作物和牧草的生产上，其促进出苗、根系发育、防控根部病害、提高作物产量等效果显著，可减少化肥农药的使用，同时促进了养殖粪便的还田利用，应用前景广阔。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，其保藏编号为CGMCC No.29028。
2.含有权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CGMCC No.29028的微生物菌剂。
3.含有权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CGMCC No.29028的生物有机肥。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于生物有机肥是将牛粪及蔗糖渣混合均匀后腐熟，将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CGMCC No.29028的菌悬液或含有其的发酵液与腐熟物料混合均匀，制成含活菌数达到2×108cfu/g的生物有机肥。
5.如含有权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CGMCCNo.29028或含有其的发酵液或权利要求2所述的微生物菌剂或权利要求3所述的生物有机肥在促进盐碱地植物生长中的应用。
6.如含有权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CGMCCNo.29028或含有其的发酵液或权利要求2
7.根据权利要求4～6中任一项所述的应用，其特征在于所述的植物为粮食作物及牧草。
8.根据权利要求4～6中任一项所述的应用，其特征在于所述的含有枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CGMCC No.29028的发酵液是将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CGMCC No.29028接种于灭菌后且含有碳源、氮源及无机盐的培养基中通气发酵后获得，培养基中的氮源选用豆粕粉、胰蛋白胨、酵母浸膏、酵母粉中的一种或其结合，碳源选用玉米淀粉、玉米浆、糖蜜、葡萄糖、酵母膏、酵母粉中的一种或其结合。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于所述的培养条件如下：按照10％～30％的装量在三角瓶内放入灭菌后的发酵培养基，按照接种量为1％～5％、温度30℃～35℃的条件培养24～48小时；或按照40％～80％的装量在发酵罐内放入灭菌后的发酵培养基，按照种子液的接种量为2％～10％，温度为30℃～35℃，搅拌速度150～200转/分钟，溶氧70％～75％，培养36～48小时，使活菌数达到1010cfu/ml。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于所述的发酵罐培养中通气量为培养过程中通气量0.4～0.6立方米/小时，培养过程中采用食用油或硅类消泡剂消泡。
...【技术特征摘要】
1.一种枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)，其保藏编号为cgmcc no.29028。
2.含有权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)cgmcc no.29028的微生物菌剂。
3.含有权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)cgmcc no.29028的生物有机肥。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于生物有机肥是将牛粪及蔗糖渣混合均匀后腐熟，将枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)cgmcc no.29028的菌悬液或含有其的发酵液与腐熟物料混合均匀，制成含活菌数达到2×108cfu/g的生物有机肥。
5.如含有权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)cgmccno.29028或含有其的发酵液或权利要求2所述的微生物菌剂或权利要求3所述的生物有机肥在促进盐碱地植物生长中的应用。
6.如含有权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)cgmccno.29028或含有其的发酵液或权利要求2所述的微生物菌剂或权利要求3所述的生物有机肥在防控植物病害中的应用，所述植物病害的病原菌为腐霉菌、镰刀菌、弯孢菌、小斑菌和疫霉菌。<...
【专利技术属性】
技术研发人员：韩冰，胡栋，彭杰丽，杜艳雷，宇文立波，李腾飞，陈惠，
申请(专利权)人：河北润农欣生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。