【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种adc定向进化及用于β-丙氨酸合成的方法，包括2种活性和稳定性显著提高的adc优势突变体，以及增加adc的催化效率和催化稳定性的蛋白质工程策略，属于生物。
技术介绍
1、β-丙氨酸作为自然界中唯一一种β型氨基酸，在生物体内泛酸、辅酶a、酰基载体蛋白等合成过程中发挥重要作用。β-丙氨酸广泛应用于医药、化工、食品、环境等领域，尤其是泛酸钙、肌肽、丙烯酰胺的合成，是一种重要的工业合成原料。adc催化l-天冬氨酸脱羧合成β-丙氨酸。目前adc主要分为两种，一种是用磷酸吡哆醛作为辅因子，一种是用丙酮酸作为辅因子。虽然adc广泛存在于原核生物和部分昆虫、植物中，但目前只有大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和谷氨酸棒杆菌来源的丙酮酰依赖性adc可以实现工业化生产。
2、丙酮酰依赖型adc在翻译起始先产生一个无活性的π蛋白，在位点gly24-ser25处发生蛋白水解作用，酯键断裂产生c-连接羟基的β亚基(2.8kda)和n-连接丙酮酰基团的α亚基(11kda)，α亚基n端丝氨酸进一步转化为丙酮酰基团从而获得活性。adc催化l-天冬氨酸...
【技术保护点】
1.一种天冬氨酸-α-脱羧酶定向进化及用于β-丙氨酸合成的方法，其特征在于：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，通过基于荧光法的高通量筛选，获得4个高催化效率的突变体K63N、K113R、S7N、A99T，确定4个关键位点S7、K63、A99、K113。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，选定突变体K63N为基础，分别对位点S7、A99、K113进行饱和突变。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，针对氨基酸残基的亲水性和空间位阻设计突变组合进行虚拟筛选，得到了8个可能的优势突变组合。
5.根据权利要...
【技术特征摘要】
1.一种天冬氨酸-α-脱羧酶定向进化及用于β-丙氨酸合成的方法，其特征在于：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，通过基于荧光法的高通量筛选，获得4个高催化效率的突变体k63n、k113r、s7n、a99t，确定4个关键位点s7、k63、a99、k113。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，选定突变体k63n为基础，分别对位点s7、a99、k113进行饱和突变。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，针对氨基酸残基的亲水性和空间位阻设计突变组合进行虚拟筛选，得到了8个可能的优势突变组合。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于...
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