一种原核细胞分泌表达系统及其构建方法和应用技术方案

本文提供一种原核细胞分泌表达系统及其构建方法和应用。具体地，本文提供一种用于原核细胞的蛋白质分泌表达系统，其包含：(i)目的蛋白表达盒，其含有与第一启动子操作性连接的编码所述目的蛋白的多核苷酸；和(ii)促分泌元件，其含有与第二启动子操作性连接的编码促分泌因子的多核苷酸；其中，所述目的蛋白含有信号肽；并且其中，所述编码促分泌因子的多核苷酸具有SEQ ID NO:1所示核苷酸序列。本文还提供了所述分泌表达系统的构建方法、具有该分泌表达系统的载体、细胞，及其用于分泌表达生产蛋白质的用途。本文提供的分泌表达系统能实现蛋白质的高效分泌表达，提高蛋白质产品的纯度和产量，在重组蛋白生产中有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程及生物工程领域，具体涉及一种原核细胞分泌表达系统及其构建方法和应用。

技术介绍

1、常见的原核表达宿主具有生长速度快、遗传背景和生理特性清楚、易于改造操作、生长密度高等优点。但是，其在蛋白质表达方面也存在一些缺点：(1)目的蛋白通常在胞内表达，难以规避胞内蛋白酶降解，且胞内缺乏周质空间的氧化还原环境及促进二硫键形成的酶；(2)蛋白质表达后的纯化步骤烦琐、细胞破碎工艺复杂且破碎后会引入大量污染性宿主细胞蛋白。

2、在原核表达宿主中采用分泌表达策略表达目的重组蛋白，可以更大程度地规避上述缺陷。目前，原核表达宿主(例如大肠杆菌)中常用的分泌表达策略是在目的重组蛋白前端添加合适的信号肽，参见例如，cn103173440a、cn100475965c、cn106589067b、cn109825488a。由此，目的重组蛋白能够从胞内分泌到原核表达宿主周质空间中。但是，由于目的重组蛋白本身性质的不同，只有部分目的重组蛋白能被进一步分泌至胞外培养基。

3、因此，仍需一种优化的分泌表达策略，其能够使原核表达宿主胞内表达的目的蛋白更本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于原核细胞的蛋白质分泌表达系统，其包含：

2.如权利要求1所述的蛋白质分泌表达系统，其中，所述促分泌元件具有SEQ ID NO:2所示核苷酸序列。

3.如权利要求1所述的蛋白质分泌表达系统，其中，所述信号肽选自：来源于Sec途径的信号肽，来源于Tat途径的信号肽，和来源于Sec-Tat途径的信号肽。

4.如权利要求1所述的蛋白质分泌表达系统，其中，所述第一启动子和第二启动子各自独立地选自：组成型启动子和诱导型启动子；具体地，所述第一启动子和第二启动子各自独立地选自诱导型启动子；更具体地，所述诱导型启动子选自阿拉伯糖诱导型启动子、IPTG诱导型...

【技术特征摘要】

1.一种用于原核细胞的蛋白质分泌表达系统，其包含：

2.如权利要求1所述的蛋白质分泌表达系统，其中，所述促分泌元件具有seq id no:2所示核苷酸序列。

3.如权利要求1所述的蛋白质分泌表达系统，其中，所述信号肽选自：来源于sec途径的信号肽，来源于tat途径的信号肽，和来源于sec-tat途径的信号肽。

4.如权利要求1所述的蛋白质分泌表达系统，其中，所述第一启动子和第二启动子各自独立地选自：组成型启动子和诱导型启动子；具体地，所述第一启动子和第二启动子各自独立地选自诱导型启动子；更具体地，所述诱导型启动子选自阿拉伯糖诱导型启动子、iptg诱导型启动子和鼠李糖诱导型启动子。

5.如权利要求1所述的蛋白质分泌表达系统，其中，所述目的蛋白表达盒与所述促分泌元...

【专利技术属性】
技术研发人员：李兆鹏，武青彬，
申请(专利权)人：杭州明德生物医药技术有限公司，
类型：发明
国别省市：