【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及具有对称结构的蛋白的设计和表达。本专利技术涉及具有例如金属结合和酶活性等功能特性的合成蛋白。
技术介绍
1、蛋白质的功能性和结构多样性激发了研究人员将其工程改造以用于各种应用。近期的实例已经证明了工程改造蛋白质作为增强的催化剂、疫苗、生物传感器和2d/3d框架的构建单元(mcconnell等人，acs synth.biol.2020,9,381–391；brouwer等人，cell 2021,184,1188–1200；schuster biosensors 2018,8,40；chen等人，j.am.chem.soc.2019,141,8891–8895；pyles等人，nature 2019,571,251–256；zhang等人，nat.commun.2020,11,1–12；ben-sasson等人，nature 2021,589,468–473)。在许多情况下，通过重新设计现有的蛋白质可以获得具有新功能的蛋白质。计算蛋白质设计的进展刺激了具有各种构象和功能的独特蛋白的开发(kuhlman&bradley nat.rev.mol.cell bio.2019,20,681–697)。因此，蛋白质工程改造科学家不限于再利用天然蛋白质，并且能够用具有改进的特性的新分子扩展他们的工具包。
2、因为对称蛋白的稳定性和多功能性，因此，对称蛋白特别适合作为开发2d/3d组装体的构建单元(yeates annu.rev.biophys.2017,46,23–42)。一种极其稳定的对称β-螺旋蛋白(β-p
技术实现思路
1、计算蛋白质设计的进展允许开发具有独特特性的新蛋白质。对称设计蛋白具有显著的稳定性，可以作为创建大分子组装体的多功能性构建单元。本专利技术描述了sake的开发：具有可修饰的环的新型对称、稳定的蛋白质构建单元。在本专利技术中要求保护的多肽将被称为sake蛋白。在观察ph诱导的3d自组装后，沿着蛋白质的内部旋转轴工程改造金属结合位点以构建2d表面阵列。使用原子力显微镜证明了cu(ii)依赖性表面2d自组装。本专利技术公开了一种稳定且高度可修饰的sake蛋白构架，其用作创建多功能的大分子材料的构建单元。
2、在保守序列基序中，氨基酸xn未被编号。由于序列列表确实对xn氨基酸进行了编号，因此xn的c末端氨基酸的编号将不同。
3、因此，序列基序的x14、x16和x18分别成为序列列表的seq id no 34中的位置29、31和33。在整个说明书中使用了保守序列基序的编号。
4、在整个说明书中，当使用例如“ile4具有leu或phe作为替代物”之类的用语时，这意味着在序列的第4位可以存在ile、leu或phe。
5、本专利技术进一步总结在以下陈述中：
6、1.一种多肽，所述多肽包含与seq id no:32具有至少60％或70％的同一性的序列或包含所述序列的2至9个重复：
7、ngriy5avg8g9-xn-lnsve14ay16dp18etdew23sfvapm29ttpr33sgvg37vav40l(seq id no:32)
8、其中xn为1至15个氨基酸，其中x可以是任意氨基酸，
9、并且其中所述序列中的氨基酸tyr5、gly8、gly9、tyr16、trp23、arg33和val40是保守的。
10、2.一种多肽，所述多肽包含的2至9个序列重复，所述序列的每一个与seq id no:34具有至少70％的同一性：
11、ngrix5avg8g9-xn-lnsvx14ax16dx18etdew23sfvapm29ttpr33sgvg37vav40l(seq id no:34)
12、其中xn为1至15个氨基酸，其中x可以是任意氨基酸，并且其中重复序列彼此间隔0至15个氨基酸，
13、其中每个所述序列中的氨基酸gly8、gly9和trp23是保守的，
14、并且条件是：任选地，对于所述序列中的一个序列，所述一个序列的氨基末端部分位于所述多肽的c末端，并且所述一个序列的剩余羧基末端部分位于所述多肽的氨基末端。
15、该条件的一个实例如下所示：
16、具有三个重复序列的多肽示意性表示为：
17、abcdefgh-abcdefgh-abcdefgh
18、因此该多肽也可以为：
19、bcdefgh-abcdefgh-abcdefgh-a
20、cdefgh-abcdefgh-abcdefgh-ab
21、defgh-abcdefgh-abcdefgh-abc
22、efgh-abcdefgh-abcdefgh-abcd
23、fgh-abcdefgh-abcdefgh-abcde
24、gh-abcdefgh-abcdefgh-abcdef
25、h-abcdefgh-abcdefgh-abcdefg
26、3.根据陈述2所述的多肽，其中，在一个或多个或所有所述序列中，
27、x5是酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸或甲硫氨酸，或其中x5是酪氨酸、苯丙氨酸或色氨酸，x5是酪氨酸或苯丙氨酸，
28、x16是酪氨酸、苯丙氨酸或色氨酸，或x16是酪氨酸或苯丙氨酸，并且
29、x18是脯氨酸或缬氨酸。
30、本专利技术明确设想并公开了x5、x16和x18的所有上述组合的实施方案。
31、在特定实施方案中，x5是酪氨酸、苯丙氨酸或色氨酸，并且
32、x16是酪氨酸、苯丙氨酸或色氨酸，并且
33、x18是脯氨酸或缬氨酸。
34、4.根据陈述2或3所述的多肽，其中，在一个或多个或所有所述序列中，x14是glu、asp、cys或ser，或其中x14是glu或asp。
35、5.根据陈述1至4中任一项所述的多肽，其中，在所述一个或多个或所有所述序列中，
36、arg33和/或val40是保守的，
37、val40是保守的。
38、5.根据陈述2本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种多肽，所述多肽包含2至9个序列重复，所述序列中的每一个与SEQ ID NO:34具有至少70％的同一性：
2.根据权利要求1所述的多肽，其中，在一个或多个或所有所述序列中，
3.根据权利要求1或2所述的多肽，其中，在一个或多个或所有所述序列中，X14是谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的多肽，其中，在一个或多个或所有所述序列中，
5.根据权利要求1至4中任一项所述的多肽，其中，在一个或多个或所有所述序列中，
6.根据权利要求1至5中任一项所述的多肽，其中，在一个或多个或所有所述序列中，氨基酸Trp23、Met29和Gly37是保守的。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的多肽，所述多肽包含所述序列的2个、3个或6个重复。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的多肽，其中，一个或多个或所有所述序列与SEQID NO:32具有至少80％、90％或95％的同一性，或与SEQ ID NO:32相同。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的多肽，其中Xn
10.根据权利要求1至9中任一项所述的多肽，其中重复的每个所述序列彼此间隔1至最多5个氨基酸。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的多肽，其中一个或多个所述重复序列彼此紧密相邻。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的多肽，其中所有所述序列彼此紧密相邻。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的多肽，其中在所述多肽中的所述序列的重复序列是相同的，但所述氨基酸Xn除外。
14.根据权利要求1至9中任一项所述的多肽，所述多肽包含所述序列的第一重复序列和第二重复序列，其中所述第一重复序列和第二重复序列在所述多肽中交替出现。
15.权利要求1至14中任一项所定义的多肽的多聚体多肽。
16.根据权利要求15所述的多聚体多肽，其中权利要求1-14中任一项所定义的多肽彼此非共价结合。
17.根据权利要求15所述的多聚体多肽，其中在权利要求1至10中任一项所定义的所述多肽的多聚体中，多肽通过胱氨酸键结合。
18.根据权利要求15至17中任一项所述的多聚体多肽，所述多聚体多肽是3个非非共价结合的多肽的六聚体，所述多肽是权利要求1至中任一项所定义的多肽，所述多肽具有两个重复序列；或是2个非非共价结合的多肽的六聚体，所述多肽是权利要求1至9中任一项所定义的多肽，所述多肽具有3个重复序列。
19.一种产生功能蛋白的方法，所述方法包括以下步骤：
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述功能是蛋白结合、酶活性或与有机分子的结合。
21.根据权利要求19或20所述的方法，所述方法进一步包括确定所述多聚体蛋白在低于4的pH是否稳定的步骤，或其中所述多聚体蛋白对蛋白水解降解具有抗性。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种多肽，所述多肽包含2至9个序列重复，所述序列中的每一个与seq id no:34具有至少70％的同一性：
2.根据权利要求1所述的多肽，其中，在一个或多个或所有所述序列中，
3.根据权利要求1或2所述的多肽，其中，在一个或多个或所有所述序列中，x14是谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的多肽，其中，在一个或多个或所有所述序列中，
5.根据权利要求1至4中任一项所述的多肽，其中，在一个或多个或所有所述序列中，
6.根据权利要求1至5中任一项所述的多肽，其中，在一个或多个或所有所述序列中，氨基酸trp23、met29和gly37是保守的。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的多肽，所述多肽包含所述序列的2个、3个或6个重复。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的多肽，其中，一个或多个或所有所述序列与seqid no:32具有至少80％、90％或95％的同一性，或与seq id no:32相同。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的多肽，其中xn为5至15个氨基酸，或为5至10个氨基酸。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的多肽，其中重复的每个所述序列彼此间隔1至最多5个氨基酸。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的多肽，其中一个或多个所述重复序列彼此紧密相邻。
12.根据权利要求1至1...
【专利技术属性】
技术研发人员：D·克拉克，S·德菲特，G·维尔普拉，A·沃特，S·伍特尔斯，
申请(专利权)人：勒芬天主教大学，
类型：发明
国别省市：
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