【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医学检测，特别涉及尿液外泌体mrna作为分子标志物在制备用于诊断膀胱癌的产品中的应用。
技术介绍
1、膀胱癌(bca)是全球发病率最高的恶性肿瘤之一。目前，膀胱癌的诊断主要取决于膀胱镜检与组织学评估，这是一种侵入性诊断方式，患者依从性较差。由于缺乏患者接受度高，诊断效果好的手段，约1/4的患者确诊时，已发展到中晚期，具有较差的预后结果，易复发，终身治疗费用昂贵。开发一种患者依从性高、检测准确且方便的检测方法对于膀胱癌患者至关重要。
2、液体活检技术的发展是肿瘤精准诊疗征程上具有重要影响的一步，它是一种非侵入性的检测手段，通过检测患者体液(血液、尿液、腹水等)来获取肿瘤组织释放到外周循环中的肿瘤相关信息，其分析的主要肿瘤成分包括循环肿瘤细胞、游离dna/rna、肿瘤驯化血小板、细外泌体等。由于液体活检具有无创性，可在疾病多个阶段进行重复取样等优点，使得其在肿瘤的早期诊断、疾病预后、复发监测等方面都具有重要应用。
3、因此，有必要开发一种新的用于诊断膀胱癌的产品。
技术实现思路
1、本专利技术目的是提供尿液外泌体mrna作为分子标志物在制备用于诊断膀胱癌的产品中的应用，利用用于诊断膀胱癌的产品可检测患者尿液外泌体mrna的表达水平，从而快速方便的用于诊断膀胱癌，灵敏度达到90％以上。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、在本专利技术的第一方面，提供了尿液外泌体mrna作为分子标志物在制备用于诊断膀胱癌
4、其中，所述lsr的genbank登录号gene id:51599，所述tubb的genbank登录号geneid:203068。
5、进一步地，所述用于诊断膀胱癌的产品包括尿液外泌体mrna分子标志物的检测引物或实时荧光定量pcr检测试剂盒。
6、所述用于诊断膀胱癌的产品还包括：尿液外泌体提取试剂、尿液外泌体rna提取试剂和rna逆转录试剂。
7、在本专利技术的第二方面，提供了一种用于诊断膀胱癌的的检测引物，包括：
8、用于检测lsr的引物：核苷酸序列如seq id no：1和seq id no：2所示；
9、用于检测tubb的引物：核苷酸序列如seq id no：5和seq id no：6所示。
10、在本专利技术的第三方面，提供了一种用于诊断膀胱癌的实时荧光定量pcr检测试剂盒，包括所述的检测引物。
11、进一步地，所述实时荧光定量pcr试剂盒还包括：用于均一化的内参引物、阳性对照模板、阴性对照模板和qpcr反应常规试剂。
12、进一步地，所述用于均一化的内参引物为以gapdh为内参的引物，所述内参引物的核苷酸序列如seq id no.7和seq id no.8所示。
13、进一步地，述阳性对照模板为经测序验证过的尿液外泌体mrna pcr扩增产物；所述阴性对照模板为去离子水；所述qpcr反应常规试剂包括sybr-green ipremix ex taq。
14、在本专利技术的第五方面，提供了一种膀胱癌诊断系统，所述系统包括：
15、处理器和存储器，所述存储器耦接到所述处理器，所述存储器存储指令，当所述指令由所述处理器执行时使用以下步骤：
16、将膀胱癌标志物lsr和tubb的mrna表达水平输入如下计算公式中，获得膀胱癌诊断分值；
17、uexo-2r＝-2.598+0.86×(lsr)+1.202×(tubb)，其中(lsr)与(tubb)为lsr和tubb在外泌体中的表达量2-δδct。
18、进一步地，所述lsr和tubb在外泌体中的表达量通过实时荧光定量pcr试剂盒pcr、基因芯片、二代高通量测序、panomics或nanostring宏基因组测序中的任意一种测定获得。
19、在本专利技术的第六方面，提供了一种计算机可读存储介质，其上存储有计算机程序，所述计算机程序被处理器执行时使用以下步骤：
20、根据输入的膀胱癌标志物lsr和tubb的mrna表达水平输入所述预测系统中，经过计算获得膀胱癌诊断分值。
21、在本专利技术的第七方面，提供了一种膀胱癌预后预测诊断产品，包括：
22、膀胱癌标志物lsr和tubb的mrna表达水平测定产品；
23、和所述预测系统或所述的膀胱癌诊断系统或所述的计算机可读存储介质。
24、在本专利技术的第八方面，提供了所述的检测引物和/或所述的实时荧光定量pcr检测试剂盒和/或所述的膀胱癌诊断系统或所述计算机可读存储介质在制备用于诊断膀胱癌的产品中的应用。
25、本专利技术实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：
26、1、本专利技术提供的尿液外泌体mrna作为分子标志物在制备用于诊断膀胱癌的产品中的应用，本专利技术首次将尿液外泌体lsr与tubb作为新型生物标志物，区别与传统生物标志物，不仅稳定、微创、易于检测，且定量精确，将大大提高癌症诊断的敏感性和特异性，该生物标志物的开发有助于膀胱癌的诊断，并为其他肿瘤类似生物标志物的研制提供借鉴。将尿液外泌体mrna的lsr和tubb联合作为一种有效的膀胱癌辅助诊断尿液分子标志物，本专利技术通过尿液外泌体lsr与tubb的含量来判断是否患有膀胱癌，方法具有极高的灵敏度
27、2、本专利技术提供了检测膀胱癌辅助诊断尿液分子标志物尿液外泌体mrna表达水平的引物，利用所述引物可检测患者尿液外泌体mrna的表达水平，从而使膀胱癌的诊断更加方便易行；利用所述引物可制备膀胱癌辅助诊断的试剂盒，从而快速方便的检测尿液外泌体mrna在患者的表达水平；将血浆尿液外泌体mrna的lsr和tubb的表达水平用于辅助诊断膀胱癌患者，灵敏度达到90％以上。
28、3、本专利技术提供了一种膀胱癌诊断系统，构建了模型，uexo-2r＝-2.598+0.86×(lsr)+1.202×(tubb)，其中(lsr)与(tubb)为lsr和tubb在外泌体中的表达量。根据输入的膀胱癌标志物lsr和tubb的mrna表达水平输入所述预测系统中，经过计算获得膀胱癌诊断分值，从而用于诊断膀胱癌。该诊断模型可大大提高低级别与非浸润型的早期膀胱癌的检出率，该生物标志物的开发有助于膀胱癌诊断及无创早筛。
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1.尿液外泌体mRNA作为分子标志物在制备用于诊断膀胱癌的产品中的应用，其特征在于，所述尿液外泌体mRNA包括LSR或/和TUBB。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述用于诊断膀胱癌的产品包括尿液外泌体mRNA分子标志物的检测引物或/和实时荧光定量PCR检测试剂盒。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述用于诊断膀胱癌的产品还包括：尿液外泌体提取试剂、尿液外泌体RNA提取试剂和RNA逆转录试剂。
4.一种用于诊断膀胱癌的的检测引物，其特征在于，包括：
5.一种用于诊断膀胱癌的实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求4所述的检测引物。
6.根据权利要求5所述的一种用于诊断膀胱癌的实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述实时荧光定量PCR试剂盒还包括：用于均一化的内参引物为以GAPDH为内参的引物，所述内参引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。
7.一种膀胱癌诊断系统，其特征在于，所述系统包括：
8.一种计算机可读存储介质，其上存
9.一种膀胱癌预后预测诊断产品，其特征在于，包括：
10.权利要求4所述的检测引物和/或权利要求5-8所述的实时荧光定量PCR检测试剂盒或权利要求7所述的膀胱癌诊断系统或权利要求8所述的计算机可读存储介质在制备用于诊断膀胱癌的产品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.尿液外泌体mrna作为分子标志物在制备用于诊断膀胱癌的产品中的应用，其特征在于，所述尿液外泌体mrna包括lsr或/和tubb。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述用于诊断膀胱癌的产品包括尿液外泌体mrna分子标志物的检测引物或/和实时荧光定量pcr检测试剂盒。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述用于诊断膀胱癌的产品还包括：尿液外泌体提取试剂、尿液外泌体rna提取试剂和rna逆转录试剂。
4.一种用于诊断膀胱癌的的检测引物，其特征在于，包括：
5.一种用于诊断膀胱癌的实时荧光定量pcr检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求4所述的检测引物。
6.根据权利要求5所述的一种用于...
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