一种质粒DNA的分离纯化方法技术

本发明专利技术涉及一种质粒DNA的分离纯化方法。该分离纯化方法包括以下步骤：(1)含目的质粒的菌体裂解液经过滤得到含目的质粒的菌体裂解上清液；(2)将含目的质粒的菌体裂解上清液经膜浓缩后换液得到粗提溶液；(3)将粗提溶液依次通过第一层析柱和第二层析柱进行层析分离，得到纯化后的质粒溶液，其中，第一层析柱所采用的填料为具有分子筛功能、离子交换功能和疏水功能的多功能填料，第二层析柱所采用的填料为亲和填料。本发明专利技术方法通过工艺整体设计，特别是采用特定的两步层析相结合，实现了高纯高品质质粒DNA的高效生产，成本更低更适用于工业化水平质粒分离纯化。本发明专利技术工艺适用于不同大小及类型的目的质粒DNA分离纯化，适用性广。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程，具体涉及一种质粒dna的分离纯化方法。

技术介绍

1、质粒存在于许多细菌及酵母等生物中，是细胞染色体能够自主复制的很小的环状dna分子。质粒是基因工程中最常用的载体，可以作为疫苗或者治疗性药物单独使用；也可以在病毒生产中作为病毒包装的原料；在mrna疫苗或药物的生产中，可以作为体外转录反应的模板，用于mrna的体外转录制备。随着基因治疗、细胞治疗和mrna药物的快速发展，质粒dna得到了更加广泛的应用。因此，高纯度、高质量的质粒dna的工程大规模生产需求不断增加。

2、质粒dna提取及纯化的工艺流程包括：菌体发酵、菌体裂解、澄清过滤、浓缩、层析纯化。目前市面上制备质粒纯化工艺，使用的还是cytiva提供的传统的质粒纯化三步法方案。首先使用凝胶过滤(6ff)，在高硫酸铵浓度下(2.1m)，利用质粒dna与宿主rna分子量的差别进行分离。该层析的作用是除去宿主rna以及其他杂质，收率为90％左右。优点是回收率高，对大小不同的质粒适用性强。但是缺点也非常明显，凝胶层析为非特异性过滤，样品的上样体积有限，上样体积小于柱体积的1/本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种质粒DNA的分离纯化方法，其特征在于：所述的分离纯化方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的质粒DNA的分离纯化方法，其特征在于：所述多功能填料的平均粒径为80～100μm，由激活的配基核心和惰性壳层组成，所述配基核心包括基质和配基，所述基质为高度交联结合琼脂糖，所述配基为辛胺；和/或，所述亲和填料的平均粒径为30～50μm，所述亲和填料的配基为嗜硫芳香族化合物。

3.根据权利要求2所述的质粒DNA的分离纯化方法，其特征在于：所述多功能填料为Capto Core 700；所述亲和填料为Cytiva PlasmidSelect Xtra。

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【技术特征摘要】

1.一种质粒dna的分离纯化方法，其特征在于：所述的分离纯化方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的质粒dna的分离纯化方法，其特征在于：所述多功能填料的平均粒径为80～100μm，由激活的配基核心和惰性壳层组成，所述配基核心包括基质和配基，所述基质为高度交联结合琼脂糖，所述配基为辛胺；和/或，所述亲和填料的平均粒径为30～50μm，所述亲和填料的配基为嗜硫芳香族化合物。

3.根据权利要求2所述的质粒dna的分离纯化方法，其特征在于：所述多功能填料为capto core 700；所述亲和填料为cytiva plasmidselect xtra。

4.根据权利要求1所述的质粒dna的分离纯化方法，其特征在于：所述含目的质粒的菌体裂解液为含目的质粒的大肠杆菌菌体裂解液；和/或，所述目的质粒的大小为3kb-15kb。

5.根据权利要求1所述的质粒dna的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤(1)中，所述过滤包括先后进行的一级过滤和二级过滤，所述一级过滤采用的是孔径为10μm～50μm的深层滤器，所述二级过滤采用的是孔径为0.22μm～0.45μm的囊氏滤器。

6.根据权利要求1所述的质粒dna的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤(2)中，所述膜浓缩采用的是孔径为100kd～300kd的平板膜包和/或中...

【专利技术属性】
技术研发人员：许美玲，杨薇，柯尊阳，肖瑶，李晨，刘梦洁，任科云，叶炜，梁华，胡坤坤，左静，彭木，
申请(专利权)人：楷拓生物科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：