【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学和制药，具体涉及用作预测结直肠癌氟尿嘧啶治疗敏感性的标志物mlck1。
技术介绍
1、结直肠癌(crc)是消化系统常见恶性肿瘤，是世界上最常见的癌症之一。作为结直肠癌化疗中的基础用药，5-氟尿嘧啶（5-fu）通过抑制胸腺嘧啶合成酶的生物活性，阻止结直肠癌细胞内的dna合成，进一步干扰肿瘤的生长和转移。然而，在罹患结直肠癌患者身上长期使用5-fu容易导致肿瘤对于5-fu不敏感。根据大量的文献报道，使用5-fu作为基药的化疗失败，其中最重要的原因之一是结直肠癌患者对于5-fu耐药。尤其令人担忧的是，既往对于5-fu敏感的结直肠癌患者，当他的肿瘤复发时，更容易表现为对5-fu耐药。晚期结直肠癌患者对以5-fu为基础的化疗的有效率仅为10-15％，超过80％的晚期结直肠癌患者最终复发，尽管他们最初对化疗有反应。对5-fu的耐药性已被视为晚期结直肠癌化疗的主要障碍之一，因此，迫切需要确定治疗靶点并制定新的治疗策略，以提高结直肠癌患者对5-fu为主的化疗的反应。
2、研究表明，crc对5-fu耐药的机制有：跨膜转运蛋白功能增强，导致胞内药物浓度下降；胸甘酸合成酶(ts)活性增加，拮抗5-fu抑制ts的作用；二氢嘧啶脱氢酶(dpd)过表达，加速5-fu分解代谢；凋亡抑制蛋白家族(iaps)作用增强，使药物诱导的细胞凋亡减少；磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶b(pi3k-akt)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(mapk)信号通路等异常激活；热休克蛋白27(hsp27)高表达，对肿瘤细胞损伤保护作用增强等。
技术实现思路
1、针对上述存在的问题，本专利技术提供了方法，允许诊断和检测氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌。上述目的通过用作预测结直肠癌氟尿嘧啶治疗敏感性的标志物mlck1（肌球蛋白轻链激酶1）来实现，其中，当对比氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌组织中的表达和正常组织中或氟尿嘧啶-敏感的结直肠癌组织中的表达时，所述标志物的表达增加。
2、专利技术人证实mlck1高表达细胞株对5-fu的敏感性降低，因而mlck1被视作氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌预测的生物标志物，和用于分级氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌监督方案以及预测和监测结氟尿嘧啶-抵抗进展的判断工具。因而，基于用作氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌预测的生物标志物的mlck1的诊断方法和应用可以有利地用于：检测和诊断氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌；预测氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌；监测氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌的进展；区分氟尿嘧啶抵抗和氟尿嘧啶敏感的结直肠癌。
3、在另一个方面，本专利技术涉及用于诊断、检测、监测或预测氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌的组合物，其包括mlck1表达产物。
4、在另一个方面，本专利技术涉及mlck1作为标志物的应用，所述标志物用于诊断、检测、监测或预测氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌。
5、在另一个方面，本专利技术涉及用于诊断、检测、监测或预测氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌的方法，所述方法至少包括下述步骤：测定样品中mlck1的水平。
6、在另一个方面，本专利技术涉及用于诊断、检测、监测或预测氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌的免疫测定，至少包括下述步骤：
7、（a）测试个体样品中mlck1的表达；
8、（b）测试对照样品中mlck1的表达；
9、（c）测定步骤（a）和步骤（b）的表达的差异；
10、（d）基于步骤（c）得到的结果，确定氟尿嘧啶-抵抗的存在或阶段或进展。
11、在另一个方面，本专利技术涉及一种鉴别个体适合于氟尿嘧啶治疗结直肠癌的方法，所述方法包括：
12、（a）测试个体样品中mlck1的表达；
13、（b）测试对照样品中mlck1的表达；
14、（c）相对于步骤（b）中的水平，分类步骤（a）的表达水平；
15、（d）在个体样品被分类为具有增加的mlck1表达水平的情况下，将该个体鉴别为不适合氟尿嘧啶治疗结直肠癌。
16、在另一个方面，本专利技术涉及一种用于分级一个或多个具有氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌的个体的免疫测定，其特征在于，包括下述步骤：
17、（a）测试个体样品中mlck1的表达；
18、（b）测试对照样品中mlck1的表达；
19、（c）测定步骤（a）和步骤（b）的表达的差异；
20、（d）在个体样品具有增加的mlck1表达水平的情况下，基于步骤（c）得到的结果，将一个或多个个体分级至氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌治疗。
21、在本专利技术的一个优选实施方案中，通过测量核酸或蛋白水平、或通过测定mlck1的生物活性，完成所述表达的测试或测定。
22、在本专利技术的另一个优选实施方案中，还包括额外步骤：将测得的核酸或蛋白水平或测得的生物活性与对照水平相对比。
23、在本专利技术的另一个优选实施方案中，还包括额外步骤：测定lc3b和/或beclin-1和/或 p62和/或tnfr2/nf-κb的表达水平。
24、在本专利技术的另一个优选实施方案中，所述样品包括组织样品、活组织检查样品、血液样品或包含循环肿瘤细胞的样品。
25、在另一个方面，本专利技术涉及用于治疗或预防氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌的抑制性的药物组合物，其特征在于，包含至少一种选自下述组分：
26、（a） 直接地抑制mlck1活性的化合物；
27、（b） 间接地抑制mlck1活性的化合物；
28、（c） mlck1蛋白的显性失活形式或其生物活性等小物；
29、（d） 编码和表达mlck1的显性失活形式的核酸；
30、（e） 对mlck1特异性的mirna；
31、（f） 对mlck1特异性的sirna；
32、（g） 对mlck1表达产物或对mlck1蛋白特异性的适体；
33、（h） 能够特异性地结合mlck1蛋白的小分子或肽拟似物；
34、（i） 对mlck1蛋白特异性的抗体和/或对mlck1蛋白特异性的抗体变体。
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1.用作预测结直肠癌氟尿嘧啶治疗敏感性的标志物MLCK1，其特征在于，当对比氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌组织中的表达和正常组织中或氟尿嘧啶-敏感的结直肠癌组织中的表达时，所述标志物的表达增加。
2.一种用于诊断、检测、监测或预测氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌的组合物，其特征在于，包括MLCK1表达产物。
3.MLCK1作为标志物的应用，其特征在于，所述标志物用于诊断、检测、监测或预测氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌。
4.一种用于诊断、检测、监测或预测氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌的方法，其特征在于，所述方法至少包括下述步骤：测定样品中MLCK1的水平。
5.一种用于诊断、检测、监测或预测氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌的免疫测定，其特征在于，包括下述步骤： （a）测试个体样品中MLCK1的表达； （b）测试对照样品中MLCK1的表达；（c）测定步骤（a）和步骤（b）的表达的差异； （d）基于步骤（c）得到的结果，确定氟尿嘧啶-抵抗的存在或阶段或进展。
6.一种鉴别个体适合于氟尿嘧啶治疗结直肠癌的方法，其特征在于，所述方法包括：（a）测试个体样品中ML
7.一种用于分级一个或多个具有氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌的个体的免疫测定，其特征在于，包括下述步骤：
8.根据权利要求4、6任一所述的方法、或权利要求5或7所述的免疫测定，通过测量核酸或蛋白水平、或通过测定MLCK1的生物活性，完成所述表达的测试或测定。
9.如权利要求8所述的方法或免疫测定，其中所述方法或免疫测定包括下述步骤：将测得的核酸或蛋白水平或测得的生物活性与对照水平相对比。
10.一种用于治疗或预防氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌的抑制性的药物组合物，其特征在于，包含至少一种选自下述组分：
...【技术特征摘要】
1.用作预测结直肠癌氟尿嘧啶治疗敏感性的标志物mlck1，其特征在于，当对比氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌组织中的表达和正常组织中或氟尿嘧啶-敏感的结直肠癌组织中的表达时，所述标志物的表达增加。
2.一种用于诊断、检测、监测或预测氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌的组合物，其特征在于，包括mlck1表达产物。
3.mlck1作为标志物的应用，其特征在于，所述标志物用于诊断、检测、监测或预测氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌。
4.一种用于诊断、检测、监测或预测氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌的方法，其特征在于，所述方法至少包括下述步骤：测定样品中mlck1的水平。
5.一种用于诊断、检测、监测或预测氟尿嘧啶-抵抗的结直肠癌的免疫测定，其特征在于，包括下述步骤： （a）测试个体样品中mlck1的表达； （b）测试对照样品中mlck1的表达；（c）测定步骤（a）和步骤（b）的表达的差异； （d）基于步骤（c）得到的结果，确定氟尿嘧啶-抵抗的存在或阶段或进展。...
【专利技术属性】
技术研发人员：隋新兵，张若男，张明明，项煜，马萌萌，唐慧芬，吴其标，
申请(专利权)人：隋新兵，
类型：发明
国别省市：
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