【技术实现步骤摘要】
本申请涉及疾病诊治和分子生物学，具体涉及肝癌诊断方法。
技术介绍
1、长链非编码rna(long noncoding rna，lncrna)是长度超过200个核苷酸的非蛋白质编码rna。越来越多的研究表明，lncrna参与了广泛的生物学过程，并与癌症等多种疾病相关。在各种实体肿瘤或者血液系统恶性肿瘤中，大量的lncrna被定义为癌基因和抑癌基因，参与到肿瘤发生和转移的细胞生物学进程中。lncrnas在多种肿瘤组织和体液(如血液、唾液和尿液等)中存在异常表达，且已应用于部分肿瘤的早期诊断，可较好地预测疾病的复发和转移，有望在疾病的临床诊治当中起到重要作用。例如，血清lncrna-atb可用作乳腺癌早期非侵入性诊断标志物的并且具有监测乳腺癌进展和分期的潜在能力。血清lncrnasnhg5可成为胃癌患者短期不良事件的生存预测因子。
2、hox反义转录rna(hox transcript antisense rna,hotair)是一种在多种肿瘤中起到致癌基因的lncrna，在肿瘤的发生、转移、耐药中具有重要作用。gupta等报告hotair在转移性乳腺癌中高表达，其在原发乳腺肿瘤中的高表达是预测后续转移和死亡率的重要指标。此外，在上皮性卵巢癌和结肠癌中，hotair的高表达也可能预示着不良的预后和促进转移。研究表明，hotair与肝癌的发生发展也密切相关，hotair高表达可以促进肝癌细胞的增殖、存活和侵袭。zhong等研究发现沉默hotair可促进肝癌细胞的凋亡，抑制细胞增殖。gao等发现hotair在肝癌组织中高表达，
3、目前文献中关于hotair在肝癌诊断及预后的临床研究多集中于肝癌组织学，且尚无对肝癌术后患者进行动态随访监测的研究，因此hotair在肝癌患者血清中的表达能否在临床诊断及预后判断值得我们关注。在本部分研究中，我们通过将70位肝癌患者的血清hotair表达与其临床病理特征之间的关系进行分析，以评估其是否参与恶性肿瘤的发展。再通过受试者工作特征(roc)曲线、kaplan-meier和cox回归分析评估潜在的诊断和预后价值。最后跟踪随访了37位肝癌术后患者，分别拥有预后良好、复发、死亡三种不同生存结局，动态监测其者血清hotair变化，判断血清hotair能否作为肝癌患者术后进展及复发的指标。这对肝癌的早期诊断及预后判断，以及实现对肝癌的早发现、早干预、早治疗具有重要临床价值。
技术实现思路
1、本研究中，我们发现肝癌患者术前血清hotair表达水平明显高于肝硬化及健康组，这与先前研究结果一致。随后，我们利用roc曲线评估了血清hotair的诊断能力，结果提示hotair与afp联合检测对肝癌的诊断效能最佳，其auc为0.942，敏感性和特异性分别为84.3％、90.8％，优于hotair或afp作为单一生物标志物检测肝癌的性能。此外，hotair与afp的联合检测对肝癌分期的鉴别诊断能力也有一定意义，其auc为0.782，敏感性和特异性分别为86.7％、65.0％。
2、而在临床病理特征方面，本研究结果显示高hotair表达水平与cnlc分期、肝外转移、血管侵犯、癌栓形成、肿瘤大小显著相关，也证明hotair参与了plc的发展。而以上这些临床病理特征是影响肝癌诊断和预后的重要因素，与肝癌的侵袭和进展有关，往往提示预后不良。而肿瘤大小在一定程度上反映了肿瘤的负荷量，肿瘤越大，合成和释放的lncrna越多，hotair也越多；相反，肿瘤破坏后，肿瘤体积缩小，因此表达水平降低。在本研究中我们发现，相比术前，肝癌患者术后1月的血清hotair表达水平明显下降，提示血清hotair可能能够评估手术或非手术治疗的有效性，并监测随访期间的复发。根据以上信息我们推测hotair可能是肝癌患者预后不良的预测指标，其血清表达水平可能有助于肝癌的临床诊断和复发预测。
3、因此，我们跟踪随访了51例肝癌术后患者的3年内的预后生存结局，通过cox回归多因素分析发现hotair、cnlc分期、血管侵犯、癌栓形成是影响肝癌术后患者生存的独立因素，hotair还是影响肝癌术后患者复发转移的独立因素；再通过kaplan-meier方法绘制了生存和复发曲线图，发现hotair低表达患者的生存率及复发转移率均明显优于hotair高表达组。这提示了hotair高表达对患者的预后有明显的负面影响，具有对肝癌患者预后的预测价值。
4、复发是肝癌术后的主要并发症，一般以2年为界分为早期复发和晚期复发。早期复发(即在切除后2年内)占肿瘤复发的70％以上，并被认为是“真正的复发”。通常认为是先前存在的肝内转移；而在这段时间之后的晚期复发被认为主要是由“新生”肿瘤引起的。早期复发主要由原发(切除破坏)肿瘤的侵袭性特征决定，如肿瘤大小、肿瘤多样性、血管侵犯和较高的血清甲胎蛋白水平等。在bclc 0或a期肿瘤中，2年无复发生存率分别约为50％和30％。在潜在的根治性手术后识别有高复发风险的患者，使临床医生能够提供适当的监测，以便在肝癌复发的最早阶段发现复发，及时采取措施提高疗效，延长患者生存期。
5、因此我们将这51例肝癌术后患者按其不同生存结局，分为预后良好组、复发转移组、死亡组三组，监测术前、术后1、术后2(复发)、术后3(再治疗)四个时间点的hotair表达水平，分别作动态折线图；并且再将其中随访血清数据完整的37例患者使用重复测量方差分析进行两两比较。结果显示死亡组术前hotair表达量明显高于预后良好组与复发组；相比术前，三组患者术后血清hotair均得到了下降，而复发组与死亡组患者复发时hotair明显上升，再次治疗后hotair又明显下降。意外的是，我们发现复发组的术后hotair表达水平整体高于死亡组，考虑到部分原因可能是样本量少影响了统计数据；另一原因是推测复发组患者大多生存时间长于死亡组，复发组患者经tace或rfa治疗后的长期时间内会有残留病灶存留，造成hotair释放堆积，因此使hotair表达水平偏高；此外，所有肿瘤特征(肿瘤大小、病理类型和位置)都可能影响hotair血清表达水平，而确定肿瘤如何影响lncrna表达水平还需要进一步研究。根据以上数据，我们认为血清hotair可作为一个监测肝癌患者术后进展及复发的指标。
6、进一步的，我们发现hotair与afp联合检测对肝癌的诊断效能最佳。此外，我们也利用roc曲线分析了hotair对肝癌cnlc分期的预测能力，将plc分期i～ii期患者(40人)与iii～iv期患者(30人)进行了对比。结果显示，血清hotair对肝癌分期预测具有一定诊断能力，而hotair与afp的联合检测则能进一步提高这一诊断能力。
7、综上所述，本研究表明了本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种诊断、检测、监测、预测肝癌预后的计算机系统，其特征在于，所述系统包括：
2.一种用于辅助诊断肝癌的试剂盒，其采用血清lncRNA HOTAIR和AFP水平作为辅助诊断肝癌的标志物，包括检测血清lncRNA HOTAIR和AFP水平的物质。
3.检测血清lncRNA HOTAIR和AFP水平的物质在制备用于诊断、检测、监测或预测肝癌预后的产品中的应用。
4.权利要求1所述的系统、权利要求2所述的试剂盒或权利要求3所述的应用，其中所述肝癌为肝细胞癌；和/或所述的检测lncRNA HOTAIR的物质包括核酸提取、逆转录和荧光测量所使用的物质。
5.权利要求1所述的系统、权利要求2所述的试剂盒或权利要求3所述的应用，其中所述的检测lncRNA HOTAIR的物质包括采用定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)使用的物质。
6.权利要求1所述的系统、权利要求2所述的试剂盒或权利要求3所述的应用，其中所述的检测lncRNA HOTAIR的物质包括SYBR Green Realtime PCR Master Kit、RNA提取分
7.权利要求1所述的系统，其中所述的评估模块通过受试者工作特征(ROC)曲线、Kaplan-Meier和Cox回归分析评估潜在的诊断和预后价值。
8.权利要求1所述的系统、权利要求2所述的试剂盒或权利要求3所述的应用，其中所述的检测lncRNA HOTAIR的物质包括引物序列：
9.一种联合标志物，所述联合标志物由lncRNA HOTAIR和AFP组成。
10.联合标志物在制备用于肝癌手术预后风险评估的试剂盒中的应用，所述的联合标志物由lncRNA HOTAIR和AFP组成。
...【技术特征摘要】
1.一种诊断、检测、监测、预测肝癌预后的计算机系统，其特征在于，所述系统包括：
2.一种用于辅助诊断肝癌的试剂盒，其采用血清lncrna hotair和afp水平作为辅助诊断肝癌的标志物，包括检测血清lncrna hotair和afp水平的物质。
3.检测血清lncrna hotair和afp水平的物质在制备用于诊断、检测、监测或预测肝癌预后的产品中的应用。
4.权利要求1所述的系统、权利要求2所述的试剂盒或权利要求3所述的应用，其中所述肝癌为肝细胞癌；和/或所述的检测lncrna hotair的物质包括核酸提取、逆转录和荧光测量所使用的物质。
5.权利要求1所述的系统、权利要求2所述的试剂盒或权利要求3所述的应用，其中所述的检测lncrna hotair的物质包括采用定量实时聚合酶链反应(qrt-pcr)使用的物质。
6.权利要求1所述的系统、权利要求2所述的试剂盒或...
【专利技术属性】
技术研发人员：包剑锋，黄劲松，张凤英，史婷婷，楼衷涵，汪义，傅爱，李兆翌，李玲，王聪聪，
申请(专利权)人：杭州市西溪医院，
类型：发明
国别省市：
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