【技术实现步骤摘要】
本申请涉及蛋白质纯化，尤其涉及一种纯化荧光标记蛋白质的双水相分离系统及纯化方法。
技术介绍
1、荧光标记技术起源自20世纪40年代，当时使用荧光标记抗体来检测相应的一些抗原。随着分子生物学、现代医学的发展以及各种先进荧光检测技术及仪器的应用，荧光标记作为一种新的、非放射性的标记技术受到人们很高的重视，并取得了极为迅速的发展。被广泛应用在了细胞内外的物质检测、核酸的检测，以及疾病早期的诊断等医学检测领域。
2、荧光标记蛋白是一种能够发出荧光信号的蛋白质，其结构和特点使其成为生物学研究中使用的工具。荧光标记蛋白通常由两部分组成：一个荧光染料和一个蛋白质标记。荧光染料通常是荧光素或其衍生物，可以通过激发光的作用下发出荧光信号。蛋白质标记则用来将荧光染料标记到感兴趣的生物分子上，例如蛋白质、核酸或细胞器等。荧光标记蛋白的特点在于其能够实现实时监测和可视化生物分子的位置、数量和活动状态。荧光标记蛋白的荧光信号强度可以被调节，从而可以实现定量检测。
3、在荧光标记的技术中，最常用的试剂有罗丹明类和荧光素类等，其它的荧光标记试剂，还有多环芳烃的化合物、芳香杂环的化合物类以及一些稀土元素的螯合物等，近期发展起来的某些新型的荧光标记试剂，同样也受到很大程度的重视。通过这些荧光染料标记蛋白质，能够进一步提升检测的精度。
4、然而，现有的荧光标记蛋白质的制备，纯化步骤是难点。现有的荧光标记蛋白质纯化，主要是利用蛋白质的大小、电荷、疏水性和对其他分子的亲和性等特性，设计纯化方法，实现分离、纯化，主要采用透析法和层析法
技术实现思路
1、为了解决上述至少一种技术问题，开发一种纯化效率高，分离纯化得到的荧光标记蛋白纯度也较高，且成本相对低廉的荧光标记蛋白纯化工艺，本申请提供一种纯化荧光标记蛋白质的双水相分离系统及纯化方法。
2、一方面，本申请提供了一种纯化荧光标记蛋白质的双水相分离系统，所述双水相分离系统包括a水相和b水相，所述a水相为含胶束溶液，包括胶束和溶剂，所述胶束采用一种或多种聚合物，所述a水相的胶束包括聚乙二醇，所述a水相的溶剂为triton-x溶液；所述b相为盐溶液，包括盐和溶剂，所述盐采用一种或多种盐，所述b水相的盐包括磷酸钾和/或磷酸钠，所述a水相的溶剂为磷酸盐缓冲溶液；所述a水相中，胶束的质量分数为5~50%，所述b水相中，盐的质量分数为5~35%。
3、通过采用上述技术方案，本申请设计了一种专用于纯化荧光标记蛋白质的双水相分离系统，a水相采用triton-x溶液作为溶剂，添加聚合物胶束，b水相采用磷酸盐缓冲溶液作为溶剂，添加磷酸盐，配得的双水相分离系统的两相能够选择性的分配荧光染料和荧光标记蛋白质，具有优异的分离效果，对荧光标记蛋白质的纯化收率较高，得到的产物纯度也较高；本申请的纯化荧光标记蛋白质的双水相分离系统，对荧光染料和荧光标记蛋白质的分离、纯化的速度快，效率较高，而且能够适用于目前现有的绝大多数荧光染料。
4、可选的，所述a水相和b水相的体积比为1~50:1。
5、可选的，所述a水相中，还包括一种或多种盐；所述a水相的盐包括有机盐，所述a水相中盐的质量分数为0.1~10%。
6、进一步可选的，所述a水相的盐包括1-丁基-3-甲基咪唑氯盐。
7、可选的，所述a水相中，还包括一种或多种醇；所述a水相中醇的质量分数为0.1~30%。所述a水相中的醇包括正丁醇。
8、进一步可选的，所述a水相中的醇包括正丁醇。
9、另一方面，本申请还提供了一种纯化荧光标记蛋白质的双水相纯化方法，使用上述的纯化荧光标记蛋白质的双水相分离系统。
10、可选的，所述的纯化荧光标记蛋白质的双水相纯化方法，具体包括以下步骤：
11、s1、将荧光标记蛋白质反应后的反应液加入纯化荧光标记蛋白质的双水相分离系统中，与a水相和b水相充分混合，得到样品混合液；
12、s2、将步骤s1得到的样品混合液离心处理，得到分层的双相溶液；
13、s3、将步骤s2得到的分层的双相溶液，弃去上相，并补入a水相，充分混合后，得到混合液；
14、s4、将步骤s3得到的混合液离心处理，得到再次分层的双相溶液；
15、s5、将步骤s4得到的再次分层的双相溶液，弃去上相，得到纯化后的荧光标记蛋白质的浓缩液。
16、通过采用上述技术方案，本申请基于本申请设计的双水相分离系统，设计了荧光标记蛋白质的纯化方法，通过两次混合-分配，30min内就能完成纯化过程，速度远高于现有的透析法和层析法；本申请的荧光标记蛋白质的纯化方法，分离出的未反应的荧光染料还能回收再利用，使用的试剂和原料成本也相对低廉，整体成本较低。
17、进一步可选的，所述步骤s2和步骤s4中，离心处理的离心转速为2000～8000rpm。
18、进一步可选的，所述步骤s5后，还包括向荧光标记蛋白质的浓缩液中加入纯化水或缓冲液的配液工序，或者将荧光标记蛋白质的浓缩液离心、纯化的进一步纯化工序。
19、综上所述，本专利技术包括以下至少一种有益技术效果：
20、1. 本申请设计了一种专用于纯化荧光标记蛋白质的双水相分离系统，a水相采用triton-x溶液作为溶剂，添加聚合物胶束，b水相采用磷酸盐缓冲溶液作为溶剂，添加磷酸盐，配得的双水相分离系统的两相能够选择性的分配荧光染料和荧光标记蛋白质，具有优异的分离效果，对荧光标记蛋白质的纯化收率较高，得到的产物纯度也较高。
21、2. 本申请的纯化荧光标记蛋白质的双水相分离系统，对荧光染料和荧光标记蛋白质的分离、纯化的速度快，效率较高，而且能够适用于目前现有的绝大多数荧光染料。
22、3. 本申请基于本申请设计的双水相分离系统，设计了荧光标记蛋白质的纯化方法，通过两次混合-分配，30min内就能完成纯化过程，速度远高于现有的透析法和层析法。
23、4. 本申请的荧光标记蛋白质的纯化方法，分离出的未反应的荧光染料还能回收再利用，使用的试剂和原料成本也相对低廉，整体成本较低。
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1.一种纯化荧光标记蛋白质的双水相分离系统，所述双水相分离系统包括A水相和B水相，其特征在于，所述A水相为含胶束溶液，包括胶束和溶剂，所述胶束采用一种或多种聚合物，所述A水相的胶束包括聚乙二醇，所述A水相的溶剂为Triton-X溶液；所述B相为盐溶液，包括盐和溶剂，所述盐采用一种或多种盐，所述B水相的盐包括磷酸钾和/或磷酸钠，所述A水相的溶剂为磷酸盐缓冲溶液；所述A水相中，胶束的质量分数为5~50%，所述B水相中，盐的质量分数为5~35%。
2.根据权利要求1所述的纯化荧光标记蛋白质的双水相分离系统，其特征在于，所述A水相和B水相的体积比为1~50:1。
3.根据权利要求1所述的纯化荧光标记蛋白质的双水相分离系统，其特征在于，所述A水相中，还包括一种或多种盐；所述A水相的盐包括有机盐，所述A水相中盐的质量分数为0.1~10%。
4.根据权利要求3所述的纯化荧光标记蛋白质的双水相分离系统，其特征在于，所述A水相的盐包括1-丁基-3-甲基咪唑氯盐。
5.根据权利要求1所述的纯化荧光标记蛋白质的双水相分离系统，其特征在于，所述A水相中，还
6.根据权利要求1所述的纯化荧光标记蛋白质的双水相分离系统，其特征在于，所述A水相中的醇包括正丁醇。
7.一种纯化荧光标记蛋白质的双水相纯化方法，其特征在于，使用权利要求1~6任意一项所述的纯化荧光标记蛋白质的双水相分离系统。
8.根据权利要求7所述的纯化荧光标记蛋白质的双水相纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
9.根据权利要求8所述的纯化荧光标记蛋白质的双水相纯化方法，其特征在于，所述步骤S2和步骤S4中，离心处理的离心转速为2000～8000rpm。
10.根据权利要求8所述的纯化荧光标记蛋白质的双水相纯化方法，其特征在于，所述步骤S5后，还包括向荧光标记蛋白质的浓缩液中加入纯化水或缓冲液的配液工序，或者将荧光标记蛋白质的浓缩液离心、纯化的进一步纯化工序。
...【技术特征摘要】
1.一种纯化荧光标记蛋白质的双水相分离系统，所述双水相分离系统包括a水相和b水相，其特征在于，所述a水相为含胶束溶液，包括胶束和溶剂，所述胶束采用一种或多种聚合物，所述a水相的胶束包括聚乙二醇，所述a水相的溶剂为triton-x溶液；所述b相为盐溶液，包括盐和溶剂，所述盐采用一种或多种盐，所述b水相的盐包括磷酸钾和/或磷酸钠，所述a水相的溶剂为磷酸盐缓冲溶液；所述a水相中，胶束的质量分数为5~50%，所述b水相中，盐的质量分数为5~35%。
2.根据权利要求1所述的纯化荧光标记蛋白质的双水相分离系统，其特征在于，所述a水相和b水相的体积比为1~50:1。
3.根据权利要求1所述的纯化荧光标记蛋白质的双水相分离系统，其特征在于，所述a水相中，还包括一种或多种盐；所述a水相的盐包括有机盐，所述a水相中盐的质量分数为0.1~10%。
4.根据权利要求3所述的纯化荧光标记蛋白质的双水相分离系统，其特征在于，所述a水相的盐包括1-丁基-3-甲基咪唑氯盐。
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【专利技术属性】
技术研发人员：赵航，王琦，招彦焘，刘时宇，杨峥，肖宇强，郑志，
申请(专利权)人：相达生物科技深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：
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