【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于食品卫生检测，特别涉及一种制曲过程中米曲霉孢子数检测方法。
技术介绍
1、米曲霉作为丝状真菌中的一个常见种，其具有生长条件宽松、繁殖能力旺盛、产孢量大、酶系丰富等特点，被广泛用于发酵食品工艺中。米曲霉利用孢子繁殖，菌丝长出分生孢子梗，在分生孢子梗顶囊上再生出小梗，小梗上着生孢子，显微镜下众多分生孢子梗和孢子形成簇状。
2、在酱油的生产工艺中，制曲是酱油生产的关键步骤。所谓制曲，指的是菌种在适宜的条件下在曲料上扩大培养的过程，目的是获得大量健康的孢子。菌种和种曲中的米曲霉孢子数量多少直接影响种曲的制备时间和质量，进而影响整个发酵工艺的稳定性，需要重点加以监控和调节。
3、目前有标准sb/t 10315-1999《孢子数测定法》来测定种曲、菌种中的孢子数。该方法采用血球计数板法对孢子溶液进行定量测定。一定质量的种曲经分散处理后制备成孢子溶液，再用血球计数板计算孢子溶液浓度。该方法对仪器设备要求较低，但也存在以下缺陷：(1)振摇方式无法充分分散分生孢子；(2)过滤效果差，显微镜视野中出现孢子梗等杂质干扰计数；(3)孢子比重较水高而出现孢子沉降情况，悬浮液不稳定；(4)单次孢子计数动辄数百个，耗时较长，不满足生产线多批次样品的快速测定；(5)孢子在计数区中的分布不均匀，检测结果精密度差。血球计数板法从样品混匀-稀释-加样到计数区域，焦距调节，计数读数等，即便按照规范的步骤进行也会产生极大的随机误差。因此，开发一种适用于种曲的准确性高的米曲霉孢子数检测方法对于发酵调味品生产企业提高生产质量而言很有意义
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种制曲过程中米曲霉孢子数检测方法。
2、本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
3、一种制曲过程中米曲霉孢子数检测方法，包括以下步骤：
4、(1)将乙醇溶液、稀硫酸溶液和水加入到米曲霉中，超声分散均匀，然后利用500目滤布过滤去除杂质，得到纯净的孢子溶液；
5、(2)将步骤(1)中得到的纯净的孢子溶液加水稀释成五个以上浓度梯度的孢子溶液，并分别加入糖类物质调节溶液比重为1.03～1.18，形成稳定的孢子悬浮液，同时根据血球计数板法分别测定其孢子浓度；其中，糖类物质为葡萄糖、蔗糖和果葡糖浆中的至少一种；
6、(3)利用散射透射比式浊度计测定步骤(2)中的孢子悬浮液的浊度，然后根据孢子悬浮液的浊度及其对应的孢子浓度建立数学模型(线性方程/曲线)；
7、(4)将乙醇溶液、稀硫酸和水加入到待测米曲霉样品中，超声分散均匀，然后利用500目滤布过滤去除杂质，得到待测孢子溶液；再加入糖类物质，调节溶液比重为1.03～1.18，形成稳定的待测孢子悬浮液；其中，糖类物质为葡萄糖、蔗糖和果葡糖浆中的至少一种；
8、(5)利用散射透射比式浊度计测定步骤(4)中的待测孢子悬浮液的浊度，然后根据步骤(3)中建立的数学模型，计算得到米曲霉的孢子浓度和/或孢子数量。
9、步骤(1)和(4)中所述的米曲霉包括米曲霉种曲、曲精或扩培曲。
10、步骤(1)和(4)中所述的乙醇溶液的浓度优选为体积百分比95％。
11、步骤(1)和(4)中所述的乙醇溶液的用量为按每克米曲霉配比10ml乙醇溶液计算。
12、步骤(1)和(4)中所述的稀硫酸溶液为将质量分数为98％的浓硫酸与水按体积比1:10混合得到的稀硫酸溶液(按sb/t 10315-1999标准方法配制)。
13、步骤(1)和(4)中所述的稀硫酸溶液的用量为按每克米曲霉配比10ml稀硫酸溶液计算。
14、步骤(1)和(4)中所述的水的用量为按每克米曲霉配比20ml水计算。
15、步骤(1)和(4)中所述的乙醇溶液、稀硫酸溶液和水的体积比为1:1:2。
16、步骤(1)和(4)中所述的超声的条件为：55khz条件下超声10～30min；其中，当样品为扩培曲或种曲时，超声时间优选为30min；当样品为曲精时，超声时间优选为10min。
17、步骤(2)和(4)中所述的糖类物质优选为果葡糖浆；本专利技术通过对比发酵食品企业通用的几种原料，如葡萄糖、蔗糖、果葡糖浆的比重调节效果对比，同时基于成本、操作便利性考虑，选择调节比重的试剂为果葡糖浆。
18、步骤(2)和(4)中，调节溶液的比重优选为1.038～1.176；进一步优选为1.070～1.090，再进一步优选为1.08。
19、步骤(2)和(4)中所述的孢子悬浮液中糖类物质的浓度为质量百分比10～40％；优选为重量百分比20％；浊度测定需要在其稳定时间内完成测定，低浓度的稳定时间短，而20％浓度能够保持10min稳定，且从便于试验人员操作的角度考虑，20％糖较易溶解，稳定时间合适，能够批量处理样品，符合实际应用情况；另外，不同比例的浊度值差异大主要是糖类物质的光学性质导致系统性偏差，建立曲线与测定时保持一致的糖溶液比例即可避免该影响。
20、步骤(2)中所述的孢子悬浮液的孢子浓度范围优选为58～563万个/ml。
21、步骤(2)中，血球计数板法测定孢子浓度为按照sb/t 10315-1999 2.2-2.3孢子数测定法进行测定。
22、步骤(3)中，为使浊度与传统的血球计数板法测定的孢子浓度呈现线性关系，所述孢子悬浮液的浊度与血球计数板法测定的孢子浓度匹配关系的建立采用双对数转换后再拟合线性方程。
23、所述的制曲过程中米曲霉孢子数检测方法在米曲霉孢子数检测中的应用。
24、本专利技术的工作原理说明：浊度是根据悬浮于透明液体中不溶性颗粒物质所产生的光的散射或衰减程度来定量表征这些悬浮颗粒物质含量的单位。当一束平行光在透明液体中传播，如果液体中无任何悬浮颗粒存在，那么光束在直线传播时不会改变方向；若有悬浮颗粒、光束在遇到颗粒时就会改变方向形成散射光并引起透射光的衰减。颗粒愈多(浊度愈高)光的散射、透射衰减程度就越严重，浊度越高。当样品中所含的孢子数越多，其对应的样液中的孢子颗粒物就越多，浊度就越高，并与传统的血球计数板法测定的孢子数建立匹配关系，从而通过浊度得出孢子数。
25、本专利技术中，由于种曲中的孢子呈簇状生长，未充分打散孢子和分生孢子杆会影响溶液的均匀性，进而影响血球计数板的计数和浊度的稳定性，致使检测结果不准确。为此，专利技术人经过研究，最终确认通过超声处理可以打散粘连的孢子，高目数(500目)的滤网可以实现杂质的过滤并对粘连的孢子进行进一步的选择，进而制备纯净的孢子溶液，同时针对孢子比重大、易沉降的特性，经过试验研究，最终发现其在果葡糖浆溶液(20％)体系中能在一定时间内保持稳定。本专利技术方法经过上述调整后，具备良好的再现性。
26、本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：
27、1、本专利技术提供了一种米曲霉孢子数检测方法，在制曲过程中不同阶段的种曲经过处理制备成稳定本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种制曲过程中米曲霉孢子数检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
10.权利要求1～9任一项所述的制曲过程中米曲霉孢子数检测方法在米曲霉孢子数检测中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种制曲过程中米曲霉孢子数检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
6.根...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗旗峰，熊瑞瑞，续颖，匡哲，石浩，唐子晴，肖雪，柯粤振，全斌，
申请(专利权)人：广东厨邦食品有限公司，
类型：发明
国别省市：
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