【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及单分子检测，具体为一种基于单分子检测液路系统的单分子检测方法。
技术介绍
1、单分子检测液路系统的设计和优化需要根据具体的实验需求和目标分子的特性进行调整。针对不同的目标分子，可能需要不同的探针修饰方式、流体通道设计和信号采集方式等。因此，合理设计和优化单分子检测液路系统是实现单分子检测的关键步骤之一，而现有技术中，因为测试过程以及清洗过程会浪费大量的试剂以及清洗液等等，导致检测成本过高，且操作过程复杂，导致检测效率较低。
技术实现思路
1、(一)解决的技术问题
2、针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种基于单分子检测液路系统的单分子检测方法。
3、(二)技术方案
4、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种基于单分子检测液路系统的单分子检测方法，基于在特定酶处理条件下，进行温和解离并富集的单分子免疫分析方法，该检测方法包括容器内壁的活化、非磁微球-捕获抗体制备、检测抗体-磁性微珠的制备，磁性微珠-靶标-非磁微球的制备，并在温和条件下进行核酸双链解离并富集，收集报告物，信号探测等一系列操作步骤。
5、优选的，所述检测方法具体为：
6、s1、设计液路系统；
7、s2、表面修饰；
8、s3、样品处理；
9、s4、温和解离和富集；
10、s5、信号采集和分析。
11、优选的，所述s1步骤具体为：设计具有合适形状和尺寸的微流体通道和反应室，液路系统
12、优选的，所述s2步骤具体为：在液路系统中进行表面修饰，以固定抗体或其他特异性探针，表面修饰常采用化学修饰方法，如自组装单分子膜或化学反应引发的共价结合方法，修饰后的表面能够特异性地捕获目标分子。
13、优选的，所述s3步骤具体为：将待检测样品引入微流体通道，样品中的目标分子与修饰后的表面上的抗体或探针结合
14、优选的，所述s3步骤还包括有：为了提高特异性和灵敏度，对样品进行预处理，去除非特异性的蛋白质、浓缩需要检测的目标分子。
15、优选的，所述s4步骤具体为：通过调节酶的活性和温度等条件，使得与修饰表面结合的目标分子可以在温和的条件下解离，使用富集方法，包括磁珠富集、电泳富集的方法进行处理，增加目标分子的浓度。
16、优选的，所述s4步骤还包括有：
17、洗涤磁珠：将磁珠放入洗涤缓冲液中，使其充分悬浮并洗涤去除任何杂质；
18、与抗体或探针结合：将磁珠与抗体或其他特异性的探针结合，抗体或探针上有一个与目标分子特异性结合的结合位点，使其与目标分子发生特异性结合；
19、样品和磁珠结合：将待检测的样品加入到磁珠中，使样品中的目标分子与磁珠上的抗体或探针结合。
20、优选的，所述s4步骤还包括有：磁场分离：将带有结合的磁珠的混合物置于磁场中，使磁珠快速沉降并与磁力线对齐，目标分子与磁珠一起固定在底部，非结合的杂质则通过去除上清液来分离；
21、再悬浮和洗涤：将磁场移除后，将磁珠再悬浮于洗涤缓冲液中并轻柔洗涤，以去除非特异性结合的杂质；
22、目标分子的回收：通过改变缓冲液ph或其他特定条件，使目标分子与磁珠解离，使目标分子从磁珠上释放出来。
23、优选的，所述s5步骤具体为：通过荧光显微镜、激光共聚焦显微镜等设备，对修饰表面上解离的目标分子进行高灵敏度的单分子检测。
24、优选的，
25、优选的，
26、优选的，
27、优选的，
28、优选的，
29、优选的，
30、(三)有益效果
31、与现有技术相比，本专利技术提供了一种基于单分子检测液路系统的单分子检测方法，具备以下有益效果：
32、1、该基于单分子检测液路系统的单分子检测方法，通过特定酶处理条件下，进行温和解离并富集的单分子免疫分析方法，高灵敏度的免疫分析方法，可以用于检测低丰度的蛋白质或其他生物分子。
33、2、该基于单分子检测液路系统的单分子检测方法，通过磁珠富集的处理方法，用于富集目标分子并去除杂质，基于磁珠具有磁性的特点，在外加磁场的作用下，可以快速和高效地将磁珠与目标分子结合，然后通过磁场的移除将磁珠与非目标物质分离。
34、3、该基于单分子检测液路系统的单分子检测方法，将待检测的样品加入到磁珠中，使样品中的目标分子与磁珠上的抗体或探针结合。在结合过程中，对于非特异性结合的杂质，可以通过调整缓冲液成分或使用抗体竞争剂等方法减少其结合。
35、4、该基于单分子检测液路系统的单分子检测方法，通过荧光显微镜、激光共聚焦显微镜等设备，对修饰表面上解离的目标分子进行高灵敏度的单分子检测。利用探针的荧光信号强度、时间间隔等信息进行信号的采集和分析，以获得目标分子的定量和定位信息，达到快速检测的效果。
36、5、该基于单分子检测液路系统的单分子检测方法，通过温和解离和富集的过程，可以使富集后的目标分子被限定在一个分子级别的检测区域，并能够避免了传统大量样品处理等步骤，具有高灵敏度、高特异性和高通量的特点，适用于各种生物分子的检测。
37、6、该基于单分子检测液路系统的单分子检测方法，高灵敏度、高特异性、可重复性好、处理时间短、实验操作简单等。因此，磁珠富集在生物分析、免疫分析和基因检测等领域得到广泛应用。
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1.一种基于单分子检测液路系统的单分子检测方法，其特征在于：基于在特定酶处理条件下，进行温和解离并富集的单分子免疫分析方法，该检测方法包括容器内壁的活化、非磁微球-捕获抗体制备、检测抗体-磁性微珠的制备，磁性微珠-靶标-非磁微球的制备，并在温和条件下进行核酸双链解离并富集，收集报告物，信号探测等一系列操作步骤。
2.根据权利要求1所述的一种基于单分子检测液路系统的单分子检测方法，其特征在于：所述检测方法具体为：
3.根据权利要求2所述的一种基于单分子检测液路系统的单分子检测方法，其特征在于：所述S1步骤具体为：设计具有合适形状和尺寸的微流体通道和反应室，液路系统由微流体芯片构成，其中包括进样口、通道结构和信号采集区域。
4.根据权利要求2所述的一种基于单分子检测液路系统的单分子检测方法，其特征在于：所述S2步骤具体为：在液路系统中进行表面修饰，以固定抗体或其他特异性探针，表面修饰常采用化学修饰方法，如自组装单分子膜或化学反应引发的共价结合方法，修饰后的表面能够特异性地捕获目标分子。
5.根据权利要求2所述的一种基于单分子检测液路系统
6.根据权利要求5所述的一种基于单分子检测液路系统的单分子检测方法，其特征在于：所述S3步骤还包括有：为了提高特异性和灵敏度，对样品进行预处理，去除非特异性的蛋白质、浓缩需要检测的目标分子。
7.根据权利要求2所述的一种基于单分子检测液路系统的单分子检测方法，其特征在于：所述S4步骤具体为：通过调节酶的活性和温度等条件，使得与修饰表面结合的目标分子可以在温和的条件下解离，使用富集方法，包括磁珠富集、电泳富集的方法进行处理，增加目标分子的浓度。
8.根据权利要求1所述的一种基于单分子检测液路系统的单分子检测方法，其特征在于：所述S4步骤还包括有：
9.根据权利要求1所述的一种基于单分子检测液路系统的单分子检测方法，其特征在于：所述S4步骤还包括有：磁场分离：将带有结合的磁珠的混合物置于磁场中，使磁珠快速沉降并与磁力线对齐，目标分子与磁珠一起固定在底部，非结合的杂质则通过去除上清液来分离；
10.根据权利要求1所述的一种基于单分子检测液路系统的单分子检测方法，其特征在于：所述S5步骤具体为：通过荧光显微镜、激光共聚焦显微镜等设备，对修饰表面上解离的目标分子进行高灵敏度的单分子检测。
...【技术特征摘要】
1.一种基于单分子检测液路系统的单分子检测方法，其特征在于：基于在特定酶处理条件下，进行温和解离并富集的单分子免疫分析方法，该检测方法包括容器内壁的活化、非磁微球-捕获抗体制备、检测抗体-磁性微珠的制备，磁性微珠-靶标-非磁微球的制备，并在温和条件下进行核酸双链解离并富集，收集报告物，信号探测等一系列操作步骤。
2.根据权利要求1所述的一种基于单分子检测液路系统的单分子检测方法，其特征在于：所述检测方法具体为：
3.根据权利要求2所述的一种基于单分子检测液路系统的单分子检测方法，其特征在于：所述s1步骤具体为：设计具有合适形状和尺寸的微流体通道和反应室，液路系统由微流体芯片构成，其中包括进样口、通道结构和信号采集区域。
4.根据权利要求2所述的一种基于单分子检测液路系统的单分子检测方法，其特征在于：所述s2步骤具体为：在液路系统中进行表面修饰，以固定抗体或其他特异性探针，表面修饰常采用化学修饰方法，如自组装单分子膜或化学反应引发的共价结合方法，修饰后的表面能够特异性地捕获目标分子。
5.根据权利要求2所述的一种基于单分子检测液路系统的单分子检测方法，其特征在于：所述s3步骤具体为：将待检测样品引入微流体通道，样品中的目标分子...
【专利技术属性】
技术研发人员：颜菁，陈皓睿，李凤娟，
申请(专利权)人：上海邦先医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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