【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体为一种慢病毒介导的稳定表达irf2细胞系及其构建方法和用途。
技术介绍
1、禽流感病毒(avian influenza virus，aiv)属于单股负链分节段的rna病毒。禽流感病毒根据其表面的血凝素(ha)和神经氨酸酶(na)的抗原特征分为h亚型和n亚型，目前在禽中已发现16种特异的ha和9中特异的na，分别命名为h1～h16，n1～n9。禽流感病毒根据其致病性可分为高致病性禽流感(highly pathogenic avian influenza，hpai)和低致病性禽流感(low pathogenicity avian influenza，lpai)，h9n2亚型aiv虽为lpaiv，但在世界范围内传播甚广。自1994年首次报道以来，h9n2 aiv一直在我国流行。近来几年，h9n2 aiv已逐渐成为我国禽流感流行的主要亚型之一。家禽感染h9n2 lpaiv后，增加了它们继发感染其他病原体的易感性，可导致较高的死亡率以及巨大的经济损失。此外，h9n2 aiv可跨宿主传播感染哺乳动物，甚至可以感染人类，而且不需要中间宿主。h9n2亚型禽流感病毒还可为感染人h5n1，h5n6，h7n9等毒株提供内部基因，所以，h9n2 aiv的防控不但对养禽业至关重要，而且具有重要的公共卫生意义。
2、干扰素调节因子(interferon regulatory factors，irfs)是一类调控干扰素表达的转录因子家族。irf家族是多个模式识别受体的下游转录因子，参与多种生物学过程，在免疫细胞发育、分化和
3、现有技术1：《禽流感病毒非结构蛋白与宿主相关蛋白相互作用及感染鸡组织病理学研究》，2008年，华中农业大学，李建丽，博士论文；其在文中以猜测性的结论表示：在体内和体外，ns1蛋白与isg12-2及irf2蛋白间存在相互作用。ns1蛋白与isg12-2和irf2的相互作用，可能抑制某些ifn表达相关通路，拮抗ifn的表达，降低机体的抗病毒状态，利于aiv的复制和扩散。
4、现有技术2：《病毒感染过程中青鳉irf2基因过表达的双面性》，姜正正等著，水产学报，2021年第9期，其观察到olirf2能够显著抑制nf-κb和isre的活性，说明olirf2可能通过抑制细胞的天然免疫应答进而促进病毒的增殖.然而持续过表达olirf2则增强了细胞的抗病毒能力，同时促进干扰素相关基因mx1，ifn和irf3的表达。因此，olirf2基于表达的持续时间不同而具有抗病毒或者促病毒的双面效果。
5、通过上述记载可见，irf2基因的瞬时表达一般情况下是促进病毒增殖的，irf2基因的持续过表达则很有可能抑制病毒增殖。
6、同时，现有技术1提示irf2基因能够促进aiv的复制和扩散可能和ns1蛋白相关。
7、在本领域中，采用df-1进行aiv的扩繁是较为建议的一种细胞系，在若干细胞系中，该细胞系的表现相对较突出。但是即使采用df-1进行aiv的扩繁，其滴度依然无法达到理想的程度。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种慢病毒介导的稳定表达irf2细胞系，该细胞系能够稳定表达irf2基因，进一步通过体外试验证明过表达irf2具有促进对h9n2 aiv的增殖作用。实验结果表明稳定表达irf2细胞系能够显著增加h9n2 aiv在细胞上的增殖滴度。
2、同时，本专利技术还提供细胞系的构建方法以及用途。
3、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
4、一种慢病毒介导的稳定表达irf2细胞系的构建方法，将含有鸡的irf2基因的慢病毒接种至df-1细胞，经过筛选，得到能够表达irf2蛋白的df-1细胞。
5、在上述的构建方法中，所述方法具体为：
6、步骤1：将线性化的慢病毒表达载体与irf2基因连接得到含有irf2基因的质粒；
7、步骤2：将质粒转染hek293t细胞，收集含有irf2基因的慢病毒；
8、步骤3：将慢病毒接种至df-1细胞，经过筛选，得到能够表达irf2蛋白的df-1细胞。
9、在上述的构建方法中，所述鸡的irf2基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
10、在上述的构建方法中，所述慢病毒表达载体为plv-cmv-mcs-ef1-puro。
11、在上述的构建方法中，所述步骤2中，将质粒、包装质粒pspax2和pmd2.g共同转染hek293t细胞。
12、同时，本专利技术还公开了一种慢病毒介导的稳定表达irf2细胞系，通过如上任一所述方法制备得到。
13、最后，本专利技术还公开了采用如上所述的irf2细胞系扩繁禽流感病毒的用途。
14、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
15、利用慢病毒包装法成功构建过表达irf2基因的df-1细胞系。构建的df-1-irf2相比于df-1细胞h9n2禽流感的病毒滴度明显增加，有助于禽流感病毒的复制，构建的df-1-irf2细胞可用作h9n2禽流感的候选疫苗细胞株。
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1.一种慢病毒介导的稳定表达IRF2细胞系的构建方法，其特征在于，将含有鸡的IRF2基因的慢病毒接种至DF-1细胞，经过筛选，得到能够表达IRF2蛋白的DF-1细胞。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述方法具体为：
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述鸡的IRF2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述慢病毒表达载体为pLV-CMV-MCS-EF1-Puro。
5.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述步骤2中，将质粒、包装质粒psPAX2和pMD2.G共同转染HEK293T细胞。
6.一种慢病毒介导的稳定表达IRF2细胞系，其特征在于，通过权利要求1-5任一所述方法制备得到。
7.采用权利要求6所述的IRF2细胞系扩繁禽流感病毒的用途。
【技术特征摘要】
1.一种慢病毒介导的稳定表达irf2细胞系的构建方法，其特征在于，将含有鸡的irf2基因的慢病毒接种至df-1细胞，经过筛选，得到能够表达irf2蛋白的df-1细胞。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述方法具体为：
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述鸡的irf2基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
4.根据权利要求2所述的构建方...
【专利技术属性】
技术研发人员：代曼曼，马露露，郭梓轩，赵青青，廖明，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：
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