结合CRISPR/Cas12a和RT-LAMP的用于检测食源性甲肝病毒的一管式方法技术

本发明专利技术涉及一种结合CRISPR/Cas12a和RT‑LAMP的用于检测食源性甲肝病毒的一管式方法，具体步骤如下：S1、于反应管管内配置RT‑LAMP反应体系，将待测样本加入反应管管内，并于反应管内加装油封，于反应管管盖配置CRISPR/Cas12a体系，包括带有FAM荧光基团的ssDNA荧光探针；S2、反应管管底进行恒温扩增，得到扩增后的基因片段；S3、将管底扩增结束的RT‑LAMP反应体系与管盖的CRISPR/Cas12a体系混合；S4、采集混合后的反应管内的荧光信号强度，当反应管内荧光信号强度增加时，待测样本内含有甲肝病毒，当反应管内荧光信号强度未变时，待测样本内不含有甲肝病毒。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物检测，尤其是涉及一种结合crispr/cas12a和rt-lamp的用于检测食源性甲肝病毒的一管式方法。

技术介绍

1、甲型肝炎病毒(hav)是小核糖核酸病毒科ssrna(+)病毒，是最常见的食源性病毒之一。hav有一个直径为27-30nm的非包裹的二十面体衣壳和一个被衣壳包裹的约7.5kb的单链rna分子。由甲型肝炎引起的甲型肝炎一直是一个全球性的公共安全问题，可导致广泛传播。全世界每年有150万人感染甲型肝炎，未确诊的感染人数可能达到数千万人。受甲肝病毒污染的食物可能是一个未知比例的人的甲型肝炎的来源。受甲型肝炎污染的食物几乎覆盖了所有的新鲜农产品，如海鲜、水果、蔬菜、饮用水，特别是贝类、草莓等软浆果，而未经处理的饮用水是甲型肝炎传播的主要媒介。此外，甲型肝炎病毒非常稳定，经过酸化、热处理、低温脱水、贝类净化、紫外线处理等各种食品处理程序后，依旧能够存活。作为作为病毒，因其细胞内寄生的生物特性，甲型肝炎病毒不能在食物中复制，其在受污染的食物中的丰度通常很低。尽管如此，甲型肝炎仍然对人类健康构成了潜在威胁。因此，对具有潜在污染风险的食品本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种结合CRISPR/Cas12a和RT-LAMP的用于检测食源性甲肝病毒的一管式方法，其特征在于，具体步骤如下：

2.根据权利要求1所述的一种结合CRISPR/Cas12a和RT-LAMP的用于检测食源性甲肝病毒的一管式方法，其特征在于，步骤S1中，所述RT-LAMP反应体系还包括引物和添加剂，所述引物用于扩增甲肝病毒，所述添加剂用于提高扩增效率，

3.根据权利要求2所述的一种结合CRISPR/Cas12a和RT-LAMP的用于检测食源性甲肝病毒的一管式方法，其特征在于，所述RT-LAMP反应体系还包括热启动DNA聚合酶、热启动反转录酶和缓冲液。

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【技术特征摘要】

1.一种结合crispr/cas12a和rt-lamp的用于检测食源性甲肝病毒的一管式方法，其特征在于，具体步骤如下：

2.根据权利要求1所述的一种结合crispr/cas12a和rt-lamp的用于检测食源性甲肝病毒的一管式方法，其特征在于，步骤s1中，所述rt-lamp反应体系还包括引物和添加剂，所述引物用于扩增甲肝病毒，所述添加剂用于提高扩增效率，

3.根据权利要求2所述的一种结合crispr/cas12a和rt-lamp的用于检测食源性甲肝病毒的一管式方法，其特征在于，所述rt-lamp反应体系还包括热启动dna聚合酶、热启动反转录酶和缓冲液。

4.根据权利要求1所述的一种结合crispr/cas12a和rt-lamp的用于检测食源性甲肝病毒的一管式方法，其特征在于，步骤s1中，所述油为石蜡油。

5.根据权利要求1所述的一种结合crispr/cas12a和rt-lamp的用于检测食源性甲肝病毒的一管式方法，其特征在于，步骤s1中，所述crispr/cas12a体系中还包括cas12a、crrna、镁离子和酶热稳定剂。

6.根据权利要求5所述的一种结合crispr/cas12a和rt-lamp的用于检测食源性甲肝病毒的一管式方法，其特征在于，所述cas12a选自fncas12a、lbcas12a、ascas12a或lb5cas12a中的任意一种，所述cas12...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵渝，李倩倩，王金，郭德华，薛俊欣，杨捷琳，
申请(专利权)人：上海师范大学，
类型：发明
国别省市：

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