【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及眼用制剂，尤其涉及一种递送间充质干细胞外泌体的plga纳米颗粒及其制备方法和应用。
技术介绍
1、视网膜位于眼球底部，可将视觉影像传到脑部。视网膜由多层细胞组成，包含有感光细胞、视网膜色素上皮层细胞(retinalpigment epithelium，rpe)等。视网膜色素上皮层细胞为一层紧贴于视网膜感觉神经外的色素细胞。视网膜色素上皮层细胞含有色素小颗粒，负责提供养分与氧气给感光细胞，以维持感光细胞所需的营养。视网膜色素上皮细胞也负责调节离子浓度、排除代谢废弃物等，借以维持感光细胞、视神经细胞等的正常运作。
2、然而，随着老化或环境伤害，会造成视网膜色素上皮层细胞失去功能，甚至造成细胞死亡，进而导致多种视网膜病变产生，例如：视网膜色素病变、黄斑部病变、糖尿病视网膜病变等。因此，如何修复视网膜损伤或是恢复视网膜功能以治疗或减缓眼部疾病，成为目前研究的目标。
3、外泌体是细胞外微环境的重要组成部分，是各种活体细胞分泌的大小约为30-100nm的膜性囊泡，包含多种蛋白质和核酸等重要信号分子，参与物质转运和细胞间交流，对细胞的存活、生长、增殖和分化以及营养代谢起到调控作用。研究表明骨髓干细胞(bonemarrow-derived stem cell，bmcs)来源的外泌体是bmcs旁分泌途径的重要产物，作为细胞间信息交流的载体，与bmcs有着相似的生物学功能，在多种器官损伤中表现出促进再生与修复、抑制炎性反应，维持稳态的强大能力。外泌体体积小，在血液中稳定存在，不易被补体裂解，可从细胞上清中连续获
4、聚乳酸羟基乙酸共聚物(plga)是由两种单体-乳酸和羟基乙酸随机聚合而成，是目前最好的生物可降解聚合物之一。在众多用来制备聚合体纳米颗粒的聚合物中，plga因其良好的性能而备受关注，如：(1)生物降解和生物相容性；(2)良好的成囊和成膜的性能；(3)良好的配方和生产方法，适应不同种类的药物，如亲水性或疏水性的小分子或大分子；(4)可持续缓释；(5)可进行表面修饰定向传递等。不同单体比例可制备出不同类型的plga，例如plga(50:50)表示该聚合物由50％乳酸和50％羟基乙酸组成。所有的plga都是非定型的，其玻璃化温度在40～60℃之间。它能够溶于大多数有机溶剂中，如：氯化溶剂类、四氢呋喃、丙酮、乙酸乙酯、乙腈等。
5、尽管bmcs衍生的外泌体被认为是无细胞治疗的新候选者，但不同剂型的外泌体在修复视网膜的效果方面具有一定的差异，如何获得获得包封率、载药量高，药物释放稳定的外泌体递送系统，有利于提高疗效。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种递送间充质干细胞外泌体的plga纳米颗粒及其制备方法和应用，本专利技术制备的递送间充质干细胞外泌体的plga纳米颗粒包封率、载药量高，药物释放稳定。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种递送间充质干细胞外泌体的plga纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：
4、(1)将间充质干细胞外泌体和plga溶解于有机溶剂中，再加入草酸，溶解后作为载药有机相；
5、(2)将聚乙烯醇溶于水中，作为水化介质；
6、(3)将载药有机相滴加至水化介质中，均质，形成o/w型乳液；
7、(4)将o/w型乳液进行旋蒸，除去有机溶剂，形成包裹间充质干细胞外泌体的plga纳米颗粒悬浮液；
8、(5)将包裹间充质干细胞外泌体的plga纳米颗粒悬浮液离心，在沉淀中加入海藻糖，冷冻干燥，获得递送间充质干细胞外泌体的plga纳米颗粒。
9、优选的，所述有机溶剂包含二氯甲烷和乙酸乙酯，所述二氯甲烷和乙酸乙酯的体积比为1:0.5～1.5。
10、优选的，所述有机溶剂中plga的浓度为50～120mg/ml，间充质干细胞外泌体的浓度为20～40mg/ml。
11、优选的，所述草酸的浓度为0.5～1mol/l，所述草酸的体积与有机溶剂的体积比为1:10～20。
12、优选的，所述plga的分子量为5～10万，其结构中乳酸与羟基乙酸的物质的量之比为0.8～1.5:1。
13、优选的，所述水化介质中聚乙烯醇的重量百分浓度为0.5～5％。
14、优选的，所述均质的转速为5000～8000rpm，所述均质的时间为5～10min。
15、优选的，载药有机相滴加至水化介质的过程伴随搅拌，所述搅拌的转速为1500～2000rpm。
16、本专利技术还提供了所述制备方法得到的递送间充质干细胞外泌体的plga纳米颗粒。
17、本专利技术还提供了所述的递送间充质干细胞外泌体的plga纳米颗粒在制备治疗眼角膜损伤的眼用制剂中的应用。
18、通过采用上述技术方案，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术通过选择适当的有机溶剂、调整plga的分子量、及其结构内乳酸与羟基乙酸的物质的量之比，获得的plga纳米颗粒包封率、载药量较高，plga纳米粒子粒径较小而且均匀，能有效减少突释，药物释放稳定，能提高视网膜细胞损伤后的存活率。
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1.一种递送间充质干细胞外泌体的PLGA纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂包含二氯甲烷和乙酸乙酯，所述二氯甲烷和乙酸乙酯的体积比为1:0.5～1.5。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂中PLGA的浓度为50～120mg/mL，间充质干细胞外泌体的浓度为20～400mg/mL。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述草酸的浓度为0.5～1mol/L，所述草酸的体积与有机溶剂的体积比为1:10～20。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述PLGA的分子量为5～10万，其结构中乳酸与羟基乙酸的物质的量之比为0.8～1.5:1。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述水化介质中聚乙烯醇的重量百分浓度为0.5～5％。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述均质的转速为5000～8000rpm，所述均质的时间为5～10min。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其
9.权利要求1～8任意一种制备方法制备得到的递送间充质干细胞外泌体的PLGA纳米颗粒。
10.权利要求9所述的递送间充质干细胞外泌体的PLGA纳米颗粒在制备治疗眼角膜损伤的眼用制剂中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种递送间充质干细胞外泌体的plga纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂包含二氯甲烷和乙酸乙酯，所述二氯甲烷和乙酸乙酯的体积比为1:0.5～1.5。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂中plga的浓度为50～120mg/ml，间充质干细胞外泌体的浓度为20～400mg/ml。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述草酸的浓度为0.5～1mol/l，所述草酸的体积与有机溶剂的体积比为1:10～20。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述plga的分子量为5～10万，其结构中乳酸...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨业国，苏晓萍，刘维康，王卿，叶茂，郑荣杰，
申请(专利权)人：广东壹加再生医学研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：
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