一种负载肿瘤抗原的树突状细胞激活的T淋巴细胞的培养方法技术

技术编号：40180827 阅读：7 留言：0更新日期：2024-01-26 23:47

本发明专利技术提供了一种负载肿瘤抗原的树突状细胞激活的T淋巴细胞的培养方法，属于DC‑T细胞培养技术领域。本发明专利技术提供的培养方法，包括如下步骤：(1)将肿瘤细胞抗原与树突状细胞在诱导培养基Ⅰ中共孵育，得到负载肿瘤抗原的树突状细胞；(2)将所述负载肿瘤抗原的树突状细胞与T淋巴细胞在诱导培养基Ⅱ中共孵育，诱导得到负载肿瘤抗原的树突状细胞激活的T淋巴细胞。本发明专利技术提供的培养方法提高了负载肿瘤抗原的DC‑T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用，提高了对小鼠体内肿瘤的抑制作用。

全部详细技术资料下载

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及dc-t细胞培养，尤其涉及一种负载肿瘤抗原的树突状细胞激活的t淋巴细胞的培养方法。

技术介绍

1、树突状细胞(也称dc细胞)是由加拿大学者steinman于1973年发现的，是功能最强的抗原提呈细胞，因其成熟时伸出许多树突样或伪足样突起而得名。dc起源自骨髓多能造血干细胞，分化主要有两条途径：①髓样干细胞在gm-csf的刺激下分化为dc，称为髓样dc(myeloid dendritic cells,mdc)，也称dc1，与单核细胞和粒细胞有共同的前体细胞；②来源于淋巴样干细胞，与t细胞和nk细胞有共同的前体细胞，称为淋巴样dc(lymphoiddendritic cells,ldc)或浆细胞样dc(plasmacytoid dendritic cells,pdc)，即dc2。因为树突状细胞能够刺激t细胞并启动早期免疫反应，因此，可以用于肿瘤的免疫治疗，例如dc疫苗。

2、人体内大部分dc处于非成熟状态，表达低水平的共刺激因子和粘附因子，体外激发同种混合淋巴细胞增殖反应的能力较低，但未成熟dc具有极强的抗原吞噬能力，在摄取抗原(包括体外加工)或受到某些因素刺激时即分化为成熟dc，而成熟的dc表达高水平的共刺激因子和粘附因子。dc在成熟的过程中，由接触抗原的外周组织迁移进入次级淋巴器官，与t细胞接触并激发免疫应答。

3、dc作为目前发现的功能最强的apc，能够诱导特异性的细胞毒性t淋巴细胞(cytotoxic t lymphocyte，ctl)生成。研究表明，应用肿瘤相关抗原或抗原多肽体外冲击致

技术实现思路

1、本专利技术的目的在于提供一种负载肿瘤抗原的树突状细胞激活的t淋巴细胞的培养方法，对肿瘤相关抗原冲击致敏dc过程和负载肿瘤抗原的dc刺激t淋巴细胞的过程进行优化，从而提高负载肿瘤抗原的dc-t细胞对肿瘤的治疗作用。

2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：

3、本专利技术提供了一种负载肿瘤抗原的树突状细胞激活的t淋巴细胞的培养方法，包括如下步骤：

4、(1)将肿瘤细胞抗原与树突状细胞在诱导培养基ⅰ中共孵育，得到负载肿瘤抗原的树突状细胞；

5、(2)将所述负载肿瘤抗原的树突状细胞与t淋巴细胞在诱导培养基ⅱ中共孵育，诱导得到负载肿瘤抗原的树突状细胞激活的t淋巴细胞；

6、所述所述诱导培养基ⅰ以rpmi-1640完全培养基为基础培养基，含有如下浓度的刺激因子：rhgm-csf 400～600u/ml、rhil-4800～1200u/ml、rhil-15800～1200u/ml、tnf-α80～120u/ml。

7、优选的，所述肿瘤细胞抗原按照制备前肿瘤细胞的数量计，与树突状细胞的混合细胞数之比为5～10：1。

8、优选的，步骤(1)中所述共孵育的时间为4～5d。

9、优选的，所述诱导培养基ⅱ以rpmi-1640完全培养基为基础培养基，含有如下浓度的成分：rhil-2800～1200u/ml、rhil-6800～1200u/ml、tnf-α800～1200u/ml。

10、优选的，所述负载hep-2肿瘤抗原的树突状细胞与t淋巴细胞的混合细胞数之比为9～10:1。

11、优选的，步骤(2)中所述共孵育的时间为3～4d。

12、优选的，所述肿瘤为喉癌。

13、本专利技术提供了一种负载肿瘤抗原的树突状细胞激活的t淋巴细胞的培养方法，本专利技术通过对肿瘤相关抗原冲击致敏dc过程的诱导培养基成分和负载肿瘤抗原的dc刺激t淋巴细胞过程的诱导培养基成分进行优化，提高了负载肿瘤抗原的dc-t细胞对肿瘤细胞的杀伤作用，提高了对小鼠体内肿瘤的抑制作用。

本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种负载肿瘤抗原的树突状细胞激活的T淋巴细胞的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述肿瘤细胞抗原按照制备前肿瘤细胞的数量计，与树突状细胞的混合细胞数之比为5～10：1。

3.如权利要求2所述的培养方法，其特征在于，步骤(1)中所述共孵育的时间为4～5d。

4.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述诱导培养基Ⅱ以RPMI-1640完全培养基为基础培养基，含有如下浓度的刺激因子：rhIL-2800～1200U/mL、rhIL-6800～1200U/mL、TNF-α800～1200U/mL。

5.如权利要求4所述的培养方法，其特征在于，所述负载Hep-2肿瘤抗原的树突状细胞与T淋巴细胞的混合细胞数之比为9～10:1。

6.如权利要求5所述的培养方法，其特征在于，步骤(2)中所述共孵育的时间为3～4d。

7.如权利要求1～6任一项所述的培养方法，其特征在于，所述肿瘤为喉癌。

【技术特征摘要】

1.一种负载肿瘤抗原的树突状细胞激活的t淋巴细胞的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述肿瘤细胞抗原按照制备前肿瘤细胞的数量计，与树突状细胞的混合细胞数之比为5～10：1。

3.如权利要求2所述的培养方法，其特征在于，步骤(1)中所述共孵育的时间为4～5d。

4.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述诱导培养基ⅱ以rpmi-1640完全培养基为基础培养基，含有如...

【专利技术属性】
技术研发人员：张军，杨业国，郑荣杰，苏晓萍，王卿，叶茂，刘维康，
申请(专利权)人：广东壹加再生医学研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：

全部详细技术资料下载我是这个专利的主人